4.1. Xác định cấu trúc hóa học của các hợp chất đã phân lập
4.1.2. Các hợp chất đã từng được công bố cấu trúc hóa học
a. Hợp chất AL-01: 3-O-β-D-glucuronopyranosyl-23-hydroxyoleanolic acid-28-O-β-D-glucopyranoside
Hợp chất AL-01 thu được có dạng bột vô định hình, màu trắng. Dữ liệu phổ NMR (Bảng 4.7) xuất hiện các tín hiệu của khung Hederagenin. Cụ thể, phổ 1H NMR xuất hiện tín hiệu proton của 06 nhóm methyl tại δH 0,82; 0,88; 0,93; 0,95;
0,97; 1,17; 01 tín hiệu olefin proton tại δH 5,27 (1H, br s) và 02 tín hiệu anomeric proton tại δH 4,46 (1H, d, J = 8,0 Hz) và 5,40 (1H, d, J = 7,5 Hz). Ngoài ra, phổ
13C NMR xuất hiện tín hiệu carbon nối đôi tại δC 123,7 và 144,9; 02 tín hiệu của nhóm carbonyl tại δC 178,2 và 177,0; 01 tín hiệu nhóm methine carbinol tại δC
82,2. Hơn nữa, tương tác HMBC giữa H3-24 (δH 0,88) và C-3 (δC 82,2)/ C-4 (δC
43,8)/ C-5 (δC 48,0)/ C-23 (δC 64,6) chỉ ra carbon tại C-23 bị oxy hóa.
02 tín hiệu anomeric cho thấy sự hiện diện của 02 gốc đường. Tín hiệu carbon tại δC 177,0 gợi ý sự hiện diện của glucuronic acid monosaccharide, tương tác HMBC giữa Glu H-1' (δH 4,46) và C-3 (δC 82,2) xác nhận liên kết O- glycosidic nằm tại C-3 của phần aglycone. Các tương tác HSQC giữa δH 5,40/ δC
95,7; δH 3,34/ δC 73,9; δH 3,42/ δC 78,2; δH 3,37/ δC 71,1; δH 3,37/ δC 78,6; δH 3,70 và 3,84/ δC 62,4 cùng với tương tác HMBC giữa H-1'' (δH 5,40) và C-28 (δC
178,2) cho thấy đây là đơn vị đường glucose được gắn vào C-18 của phần aglycone. Hằng số ghép J của các proton H-1' và H-1'' đều bằng 8,0, cho thấy các gốc đường đều có định hướng β.
Từ các phân tích trên, kết hợp với sự so sánh dữ liệu NMR của hợp chất AL-01 và hợp chất tham khảo từ tài liệu [24], có thể khẳng định đây là hợp chất 3- O-β-D-glucuronopyranosyl-23-hydroxyoleanolic acid-28-O-β-D-glucopyranoside (công thức phân tử C42H66O15) (Hình 4.43).
Hình 4.43. Cấu trúc hóa học (A) và tương tác HMBC chính (B) của hợp chất AL-01.
Luận văn thạc sĩ Kinh tế
Bảng 4.7. Số liệu phổ NMR của hợp chất AL-01 và hợp chất tham khảo.
C #,dδC a,bδC a,cδH (J, Hz) C #,dδC a,bδC a,cδH (J, Hz) 1 38,9 39,5 1,00 (m)/1,62 (m) 23 64,6 64,6 3,28 (d, 12,0)
3,64 (d, 12,0) 2 26,0 26,1 1,79 (m)/1,99 (m) 24 13,7 13,7 0,88 (s) 3 82,0 82,2 3,69 (m) 25 16,2 16,5 0,97 (s)
4 43,5 43,8 - 26 17,6 17,7 0,82 (s)
5 47,8 48,0 1,25 (m) 27 26,2 26,3 1,17 (s) 6 18,3 18,8 1,39 (m)/1,50 (m) 28 176,6 178,2 - 7 33,0 33,4 1,29 (m)/1,62 (m) 29 23,8 23,9 0,95 (s)
8 39,8 40,6 - 30 33,2 33,4 0,93 (s)
9 48,2 49,0 1,64 (m) 3-O-GluA
10 36,9 37,6 - 1′ 106,1 104,9 4,46 (d, 8,0)
11 23,8 24,8 1,73 (m)/2,08 (m) 2′ 75,5 75,0 3,26 (m) 12 122,6 123,7 5,27 (br s) 3′ 78,0 78,1 3,39 (m)
13 144,2 144,9 - 4′ 73,3 73,6 3,43 (m)
14 42,1 43,0 - 5′ 77,7 76,4 3,62 (m)
15 28,3 28,8 1,10 (m)/1,81 (m) 6′ 172,9 177,0 -
16 23,7 24,5 1,91 (m) 28-O-Glc
17 47,0 48,1 - 1′′ 95,6 95,7 5,40 (d, 8,0)
18 41,9 42,6 2,87 (dd, 3,5; 13,5) 2′′ 74,1 73,9 3,34 (m) 19 46,3 47,2 1,18 (m)/1,72 (m) 3′′ 78,8 78,2 3,42 (m)
20 30,9 31,5 - 4′′ 71,1 71,1 3,37 (m)
21 43,3 34,8 1,23 (m)/1,40 (m) 5′′ 79,2 78,6 3,37 (m)
22 32,6 33,1 1,61 (m)/1,74 (m) 6′′ 62,2 62,4 3,70 (m)/3,84 (m)
Đo trong a)CD3OD, b)125 MHz, c)500 MHz, d)Py-d5. Tín hiệu được xác định trên phổ DEPT, HSQC và HMBC. GluA: β-D- glucuronopyranosyl, Glc: β-D-glucopyranosyl. #δC 3-O-β-D- glucuronopyranosyl-23-hydroxyoleanolic acid-28-O-β-D-glucopyranoside [24].
b. Hợp chất AL-02: 3-O-[α-L-arabinopyranosyl-(1→3)-β-D- glucuronopyranosylhederagenin 28-O-β-D-glucopyranosyl ester
Hợp chất AL-02 thu được có dạng bột vô định hình, màu trắng. Tương tự như hợp chất AL-01, hợp chất AL-02 có các tín hiệu của Hederagenin, bao gồm các tín hiệu proton của 06 nhóm methyl (δH 0,71; 0,82; 0,93; 0,95; 0,99; 1,18), 01 tín hiệu olefin proton [δH 5,27 (br s)] trên phổ 1H NMR; tín hiệu carbon nối đôi (δC
123,7 và 144,9; 01 tín hiệu nhóm methine carbinol (δC 82,2) trên phổ 13C NMR.
Thêm vào đó, tương tác HMBC giữa H3-24 (δH 0,71) và C-3 (δC 82,2)/ C-4 (δC
43,8)/ C-5 (δC 49,0)/ C-23 (δC 64,9) chỉ ra carbon tại C-23 bị oxy hóa.
Cũng giống như hợp chất AL-01, hợp chất AL-02 cũng có các gốc glucuronopyranoside và glucopyranoside với bộ tín hiệu đặc trưng lần lượt là (δH
Luận văn thạc sĩ Kinh tế
4,50/ δC 104,7; δH 3,45/ δC 74,5; δH 3,61/ δC 86,1; δH 3,38/ δC 71,1; δH 3,63/ δC 77,5) và (δH 5,40/ δC 95,7; δH 3,34/ δC 73,9; δH 3,42/ δC 78,2; δH 3,54/ δC 71,9; δH 3,36/ δC
78,6; δH 3,70 và 3,83/ δC 62,4). Các gốc đường lần lượt gắn vào C-3 và C-28 của phần aglycone, điều này được chứng minh bằng các tương tác HMBC giữa GluA H-1′ (δH 4,50)/ C-3 (δC 82,2) và Glc H-1′′′ (δH 5,40) và C-28 (δC 178,1).
Sự khác biệt giữa hợp chất AL-02 và AL-01 là hợp chất AL-02 có gốc arabinopyranosyl, được tìm thấy bởi các tương tác HSQC giữa δH 4,59/ δC 105,2; δH
3,68/ δC 72,5; δH 3,57/ δC 74,2; δH 3,83/ δC 69,7; δH 3,62 và 3,96/ δC 67,4; và tương tác HMBC giữa proton tại δH 4,59 (H-1′′) và carbon tại δC 86,1 (C-3′) cho thấy gốc arabinopyranosyl gắn vào C-3′.
Dựa vào các số liệu NMR của hợp chất AL-02, kết hợp với so sánh hợp chất tham khảo ở tài liệu [95] (Bảng 4.8), có thể kết luận hợp chất AL-02 là 3-O-[α-L- arabinopyranosyl-(1→3)-β-D-glucuronopyranosylhederagenin 28-O-β-D- glucopyranosyl ester (công thức phân tử: C47H74O19) (Hình 4.44).
(A) (B)
Hình 4.44. Cấu trúc hóa học (A) và tương tác HMBC chính (B) của hợp chất AL-02.
Bảng 4.8. Số liệu phổ NMR của hợp chất AL-02 và hợp chất tham khảo.
C a,#δC a,bδC a,cδH (J, Hz) C a,#δC a,bδC a,cδH (J, Hz) 1 39,4 39,5 0,98 (m)/1,62 (m) 26 17,6 17,7 0,82 (s) 2 26,4 26,1 1,78 (m)/1,96 (m) 27 26,4 26,3 1,18 (s) 3 82,1 82,2 3,69 (m) 28 177,8 178,1 -
4 42,8 43,8 - 29 23,8 23,9 0,95 (s)
5 48,3 49,0 1,63 (m) 30 33,3 33,2 0,93 (s) 6 18,8 18,9 1,38 (m)/1,49 (m) 3-O-GluA
7 30,7 33,4 1,29 (m) 1′ 104,7 104,7 4,50 (d, 8,0)
8 40,5 40,6 - 2′ 74,6 74,5 3,45 (m)
9 48,0 48,1 1,25 (m) 3′ 86,5 86,1 3,61 (m)
10 37,6 37,6 - 4′ 71,0 71,1 3,38 (m)
11 24,6 24,5 1,81 (m) 5′ 77,4 77,5 3,63 (m) 12 123,6 123,7 5,27 (br s) 6′ 176,1 176,6 -
13 144,7 144,9 - 3′-O-Ara
14 43,7 43,0 - 1′′ 105,4 105,2 4,59 (d, 7,0) 15 28,9 28,8 1,10 (m)/1,80 (m) 2′′ 74,9 72,5 3,68 (m) 16 24,6 24,2 1,90 (m) 3′′ 73,8 74,2 3,57 (m)
Luận văn thạc sĩ Kinh tế
17 47,4 49,0 - 4′′ 70,8 69,7 3,83 (m)
18 42,7 42,6 2,87 (dd, 4,0; 14,0) 5′′ 67,3 67,4 3,62 (m)/ 3,96 (m) 19 47,2 47,2 1,16 (m)/1,73 (m) 28-O-Glc
20 31,4 31,5 - 1′′′ 95,6 95,7 5,40 (d, 8,0) 21 35,0 34,9 1,22 (m)/1,40 (m) 2′′′ 73,6 73,9 3,34 (m) 22 33,2 33,1 1,62 (m)/1,72 (m) 3′′′ 78,2 78,2 3,42 (m) 23 64,8 64,9 3,27 (m)/3,64 (m) 4′′′ 71,7 71,9 3,54 (m) 24 13,4 13,3 0,71 (s) 5′′′ 78,2 78,6 3,36 (m)
25 16,3 16,5 0,99 (s) 6′′′ 62,3 62,4 3,70 (m)/ 3,83 (m)
Đo trong a) CD3OD, b)125 MHz, c)500 MHz. Tín hiệu được xác định trên phổ DEPT, HSQC và HMBC. GluA: β-D- glucuronopyranosyl, Ara: α-L-arabinopyranosyl, Glc: β-D-glucopyranosyl. #δC
của 3-O-[α-L-arabinopyranosyl-(1→3)-β-D-glucuronopyranosylhederagenin 28-O-β-D- glucopyranosyl ester [95].
c. Hợp chất AL-03: chikusetsusaponin IVa methyl ester
Hợp chất AL-03 thu được có dạng bột vô định hình, màu trắng. Công thức phân tử của AL-03 được xác định là C43H68O14 bởi phổ HR-ESI-MS với peak ion phân tử proton hóa tại m/z 843,4320 [M+35Cl]- (Tính toán lý thuyết cho công thức phân tử tương ứng là C43H68O1435Cl: 843,4298); m/z 845,4324 [M+37Cl]- (Tính toán lý thuyết cho công thức phân tử tương ứng là C43H68O1437Cl: 845,4268).
Phổ 1H NMR cho 07 tín hiệu nhóm methyl [δH 0,81; 0,86; 0,93; 0,95; 0,97;
1,08; 1,18 (3H, s)], 01 tín hiệu olefin proton [δH 5,27 (1H, br s)] và 02 tín hiệu anomeric proton [δH 4,40 (1H, d, J = 8,0 Hz), 5,40 (1H, d, J = 7,5 Hz)]. Phổ 13C NMR cho tín hiệu của 02 nhóm carbonyl tại δC 171,4 và 177,0; 01 tín hiệu carbon nối đôi tại δC 123,8 và 144,8, đây là những tín hiệu đặc trưng của oleanolic acid.
Ngoài ra, độ chuyển dịch hóa học tại δC 52,7/ δH 3,79 gợi ý nhóm –O‒CH3.
13 carbon còn lại gợi ý sự tồn tại của 02 đơn vị hexose. Mối tương quan giữa các proton (H-1ʹ ‒ H-6ʹ) và carbon (C-1ʹ ‒ C-6ʹ) trong phổ HSQC cùng với tương tác giữa H-1ʹ (δH 5,40) và C-28 (δC 177,0) trong phổ HMBC cho thấy đơn vị glucopyranosyl gắn vào C-28 của phần aglycone. Bộ tín hiệu proton/carbon trong phổ HSQC [H-1ʹʹ (δH 4,40)/ C-1ʹʹ (δC 107,0), H-2ʹʹ (δH 3,25)/ C-2ʹʹ (δC 75,3), H-3ʹʹ (δH 3,38)/ C-3ʹʹ (δC 77,5), H-4ʹʹ (δH 3,52)/ C-4ʹʹ (δC 73,2), H-5ʹʹ (δH 3,84)/ C-5ʹʹ (δC
76,6)], tương tác HMBC giữa các proton thuộc nhóm –O‒CH3 (δH 3,79) với C-6ʹʹ (δC 171,4) chứng tỏ nhóm –O‒CH3 gắn vào C-6ʹʹ, và gốc đường này được khẳng định gắn vào C-3 của phần aglycone dựa vào tương tác HMBC giữa H-1ʹʹ (δH 4,40) và C-3 (δC 91,1).
Kết hợp so sánh dữ liệu phổ NMR (Bảng 4.9) cùng tương tác HMBC chính của hợp chất AL-03 với hợp chất tham khảo ở tài liệu [102], kết luận hợp chất AL- 03 là chikusetsusaponin IVa methyl ester (Hình 4.45).
Luận văn thạc sĩ Kinh tế
(A) (B)
Hình 4.45. Cấu trúc hóa học (A) và tương tác HMBC chính (B) của hợp chất AL-03.
Bảng 4.9. Số liệu phổ NMR của hợp chất AL-03 và hợp chất tham khảo.
C #,bδC a,cδC a,dδH (J, Hz) C #,bδC a,cδC a,dδH (J, Hz) 1 39,0 39,7 0,99 (m)/1,61 (m) 24 16,9 16,9 0,86 (s) 2 27,1 27,0 1,68 (m)/1,80 (m) 25 16,1 15,9 0,97 (s) 3 90,1 91,1 3,16 (dd, 5,0; 12,0) 26 17,9 17,7 0,81 (s)
4 40,1 40,1 - 27 26,7 26,2 1,18 (s)
5 56,2 57,0 0,79 (m) 28 176,2 177,0 - 6 19,0 19,3 1,42 (m)/1,55 (m) 29 33,6 33,4 0,93 (s) 7 33,7 33,1 1,62 (m)/1,73 (m) 30 24,2 23,9 0,95 (s)
8 40,2 40,7 - 28-O-Glc
9 48,4 49,0 1,60 (m) 1ʹ 95,9 95,7 5,40 (d, 7,5)
10 37,4 37,9 - 2ʹ 74,4 73,9 3,33 (dd, 9,0; 7,5)
11 24,3 24,0 1,72 (m)/2,06 (m) 3ʹ 79,1 78,3 3,42 (dd, 9,0; 9,0) 12 122,8 123,8 5,27 (br s) 4ʹ 71,4 71,1 3,38 (dd, 9,0; 9,0)
13 144,8 144,8 - 5ʹ 79,5 78,7 3,36 (m)
14 42,6 42,9 - 6ʹ 62,6 62,4 3,69 (dd, 11,5; 5,5)
3,82 (dd, 11,5; 2,5) 15 28,8 28,9 1,10 (m)/1,81 (m) OCH3 52,4 52,7 3,79 (s)
16 24,3 24,5 1,75 (m)/2,07 (m) 3-O-Glu
17 47,1 48,0 - 1ʹʹ 107,3 107,0 4,40 (d, 8,0) 18 42,4 42,6 2,88 (dd, 4,0, 14,0) 2ʹʹ 75,6 75,3 3,25 (dd, 9,0; 8,0) 19 46,9 47,2 1,15 (m)/1,73 (m) 3ʹʹ 78,1 77,5 3,38 (dd, 9,0; 9,0) 20 31,4 31,5 - 4ʹʹ 73,4 73,2 3,52 (dd, 9,0; 9,0) 21 34,7 33,9 1,32 (m)/1,50 (m) 5ʹʹ 77,4 76,6 3,84 (d, 9,0) 22 33,6 34,9 1,22 (m)/1,40 (m) 6ʹʹ 170,5 171,4 -
23 28,2 28,4 1,08 (s)
Đo trong a)CD3OD, b)Py-d5, c)125 MHz, d)500 MHz. Tín hiệu được xác định trên phổ DEPT, HSQC và HMBC. Glc: β-D-glucopyranosyl, gluA: β-D-glucuronopyranosyl. #δC của chikusetsusaponin IVa methyl ester [102].
Luận văn thạc sĩ Kinh tế
d. Hợp chất AL-05: oleanolic acid-[28-O-β-D-glucopyranosyl]-3-O-[β-D- galactopyranosyl(1→3)]-[β-D-glucopyranosyl(1→2)]-β-D-glucuronopyranoside Hợp chất AL-05 thu được có dạng bột vô định hình, màu trắng. Độ quay cực
25D: +15,0° (c 0,1, MeOH). Công thức phân tử của AL-05 được xác định là C54H86O24 bởi phổ HR-ESI-MS với peak ion phân tử proton hóa ở m/z 1153,5208 [M + 35Cl]- (Tính toán lý thuyết cho công thức phân tử tương ứng là C54H86O2435Cl:
1153,5198) và 1155,5154 [M + 37Cl]- (Tính toán lý thuyết cho công thức phân tử tương ứng là C54H86O2437Cl: 1155,5168).
Phổ NMR của hợp chất AL-05 có các đặc trưng của phần aglycone với độ chuyển dịch rất gần với dữ liệu NMR của hợp chất AL-03, cho thấy phần aglycone của hợp chất này cũng thuộc khung oleanane.
24 carbon còn lại gợi ý 04 đơn vị hexose. Tương tự hợp chất AL-03, tương tác HMBC giữa H-1ʹ (δH 5,40) và C-28 (δC 178,1) và bộ tín hiệu từ C-1ʹ đến C-6ʹ (δC
95,7; 73,9; 78,3; 71,2; 78,6; 62,5) tương ứng H-1ʹ đến H-6ʹ (δH 5,40; 3,34; 3,44;
3,36; 3,37; 3,70/3,83) trong phổ HSQC cho thấy đơn vị glucopyranosyl gắn vào C- 28 của phần aglycone.
Tín hiệu carbon tại δC 171,7 (C-6ʹʹ) gợi ý sự hiện diện của glucuronic acid monosaccharide; hơn nữa, tương tác HMBC giữa GluA H-1ʹʹ (δH 4,49) và C-3 (δC
91,9) xác nhận liên kết O-glycosidic nằm tại C-3 của phần aglycone.
Đường galactopyranosyl được nhận ra bởi một loạt tín hiệu tại δC 104,8/ δH
4,72; δC 73,1/ δH 3,61; 75,2/ δH 3,50; δC 70,6/ δH 3,82; δC 77,1/ δH 3,59; δC 62,4/ δH
3,70 và 3,84 trong phổ HSQC, cũng như sự xuất hiện của tín hiệu H-4ʹʹʹʹ với peak đôi rộng và hằng số ghép nhỏ (J = 3,0 Hz). Đường galactose được gắn vào C-3ʹʹ, được xác nhận bằng tương quan HMBC giữa H-1ʹʹʹʹ (δH 4,72) và C-3ʹʹ (δC 86,2), H- 3ʹʹ (δH 3,83) và Gal C-1ʹʹʹʹ (δC 104,4).
Phân tử đường glucose còn lại được nhận biết bằng dữ liệu phổ NMR, phổ HSQC và HMBC. Tương quan HMBC giữa Glc H-1"' (δH 4,99) và GluA C-2" (δC
78,9), GluA H-2" (δH 3,82) và Glc C-1"' (δC 103,2) xác nhận phân tử đường glucose gắn vào C-2" của đường galactose.
Hằng số ghép J lớn (7,5 – 8,0 Hz) tại các proton H-1ʹ, H-1ʹʹ, H-1ʹʹʹ, H-1ʹʹʹʹ cho thấy các đơn vị đường đều có định hướng β.
Dựa vào các phân tích trên và so sánh dữ liệu phổ NMR (Bảng 4.10) với hợp chất calendasaponin C [135], ta thấy một điểm khác biệt duy nhất của hai hợp chất này là tại C16-OH của hợp chất calendasaponin C có độ chuyển dịch hóa học δC
64,8; trong khi đó, tại C-16 của hợp chất AL-05 có độ chuyển dịch hóa học là δC
24,5 - gợi ý nhóm methylene tại C-16. Như vậy, có thể kết luận hợp chất AL-05 là oleanolic acid-[28-O-β-D-glucopyranosyl]-3-O-[β-D-galactopyranosyl(1→3)]-[β- D-glucopyranosyl(1→2)]-β-D-glucuronopyranoside (Hình 4.46).
Luận văn thạc sĩ Kinh tế
Hình 4.46. Cấu trúc hóa học (A) và tương tác HMBC chính (B) của hợp chất AL-05.
Bảng 4.10. Số liệu phổ NMR của hợp chất AL-05 và hợp chất tham khảo.
C #,cδC a,cδC b,cδH (J, Hz) C #,cδC a,cδC b,cδH (J, Hz) 1 38,7 39,8 1,00 (m)/1,61 (m) 30 23,9 23,8 0,93 (s) 2 26,5 26,9 1,72 (m)/1,98 (m) 28-O-glc
3 89,6 91,9 3,22 (m) 1ʹ 96,1 95,7 5,40 (d, 8,0) 4 39,6 40,5 - 2ʹ 74,2 73,9 3,34 (dd, 9,0; 8,0) 5 55,8 57,0 0,79 (m) 3ʹ 79,4 78,3 3,44 (t, 9,0) 6 18,5 19,3 1,40 (m)/1,53 (m) 4ʹ 71,3 71,2 3,36 (t, 9,0) 7 33,2 33,9 1,32 (m)/1,39 (m) 5ʹ 78,5 78,6 3,37 (m)
8 39,9 40,7 - 6ʹ 62,4 62,5 3,70 (m)/3,83 (m)
9 47,2 49,0 1,59 (m) 3-O-GluA
10 36,9 37,8 - 1ʹʹ 105,2 105,6 4,49 (d, 7,5) 11 23,8 23,9 1,72 (m)/2,05 (m) 2ʹʹ 78,9 78,9 3,82 (dd, 9,0; 7,5) 12 122,9 123,8 5,27 (br s) 3ʹʹ 88,0 86,2 3,83 (t, 9,0) 13 143,1 144,7 - 4ʹʹ 71,8 72,3 3,13 (t, 9,0)
14 44,6 42,9 - 5ʹʹ 77,3 78,1 3,63 (d, 9,0)
15 38,3 28,9 1,10 (m)/1,81 (m) 6ʹʹ 171,7 - - 16 64,8 24,5 1,90 (m) 2ʹʹ-O-Glc
17 51,4 48,0 - 1ʹʹʹ 103,9 103,2 4,99 (d, 8,0) 18 44,0 42,6 2,87 (dd, 3,5; 13,5) 2ʹʹʹ 76,3 76,2 3,18 (dd, 9,0; 8,0) 19 46,5 47,2 1,18 (m)/1,72 (m) 3ʹʹʹ 77,6 78,1 3,36 (t, 9,0) 20 30,6 31,5 - 4ʹʹʹ 72,7 72,6 3,13 (t, 9,0) 21 33,,8 34,9 1,23 (m)/1,40 (m) 5ʹʹʹ 78,6 78,2 3,32 (m)
22 26,4 33,1 1,61 (m)/1,74 (m) 6ʹʹʹ 63,5 63,6 3,57 (m)/3,84 (m) 23 28,0 28,3 1,08 (s) 3ʹʹ-O-Gal
24 16,7 16,8 0,88 (s) 1ʹʹʹʹ 102,5 104,4 4,72 (d, 8,0) 25 15,6 16,0 0,97 (s) 2ʹʹʹʹ 73,0 73,1 3,61 (dd, 9,5; 8,0) 26 17,4 17,7 0,82 (s) 3ʹʹʹʹ 75,4 75,2 3,50 (dd, 9,5; 3,5) 27 26,9 26,2 1,17 (s) 4ʹʹʹʹ 70,2 70,6 3,82 (dd, 3,5; 3,0) 28 175,5 178,1 - 5ʹʹʹʹ 77,3 77,1 3,59 (m)
29 33,0 33,4 0,95 (s) 6ʹʹʹʹ 62,0 62,4 3,70 (m)/3,84 (m)
Đo trong a)125 MHz, b)500 MHz, c)Py-d5. Tín hiệu được xác định trên phổ DEPT, HSQC và HMBC.
Glc: β-D-glucopyranosyl, gluA: β-D-glucuronopyranosyl, Gal: β-D-galactopyranosyl. #δC của calendasaponin C [135].
Luận văn thạc sĩ Kinh tế
e. Hợp chất AL-06: chikusetsusaponin IV
Hợp chất AL-06 thu được có dạng bột vô định hình, màu trắng. Độ quay cực
25D: +13,0° (c 0,1, MeOH). Công thức phân tử của AL-06 được xác định là C47H74O18 bởi phổ HR-ESI-MS m/z 961,4598 [M+35Cl]- (Tính toán lý thuyết cho công thức phân tử tương ứng là C47H74O1835Cl: 961,4564); 963,4597 [M+37Cl]- (Tính toán lý thuyết cho công thức phân tử tương ứng là C47H74O1837Cl: 963,4534).
Phổ NMR của hợp chất AL-06 có các đặc trưng của phần aglycone với độ chuyển dịch gần như hoàn toàn giống với hợp chất AL-03 cho thấy phần aglycone của hợp chất này cũng thuộc khung oleanane.
17 carbon còn lại gợi ý sự hiện diện của 03 gốc đường, bao gồm 02 đơn vị hexose và 01 đơn vị pentose. Tương tác HMBC giữa H-1' (δH 5,40) và C-28 (δC
177,0) và bộ tín hiệu từ C-1' đến C-6' (δC 95,7; 73,9; 78,7; 71,2; 78,7; 62,5) tương ứng H-1' đến H-6' (δH 5,40; 3,34; 3,43; 3,38; 3,43; 3,71/3,83) trong phổ HSQC cho thấy đơn vị glucopyranosyl gắn vào C-28 của phần aglycone, giá trị hằng số ghép (J
= 7,5 Hz) cho thấy định hướng β của gốc đường này. Tín hiệu carbon tại δC 172,2 gợi ý sự hiện diện của glucuronic acid monosaccharide; hơn nữa, tương tác HMBC giữa Glu H-1'' (δH 4,35) và C-3 (δC 90,7) xác nhận liên kết O-glycosidic nằm tại C- 3 của phần aglycone, hằng số ghép J lớn (7,5 Hz) gợi ý gốc đường này có dạng β.
Tín hiệu đặc trưng của anomeric proton/carbon (δH 5,09/ δC 109,5) đặc trưng cho nhóm arabinofuranosyl; tương tác giữa proton Ara(f) H-1''' (δH 5,09) và C-4" (δC
79,6) cho thấy nhóm arabinofuranosyl gắn vào C-4" của nhóm glucuronopyranosyl.
Dựa vào các phân tích trên và so sánh dữ liệu phổ NMR (Bảng 4.11) cùng tương tác HMBC chính của hợp chất AL-06 với hợp chất tham khảo ở tài liệu [102], kết luận hợp chất AL-06 là chikusetsusaponin IV (Hình 4.47).
(A) (B)
Hình 4.47. Cấu trúc hóa học (A) và tương tác HMBC chính (B) của hợp chất AL-06.
Bảng 4.11. Số liệu phổ NMR của hợp chất AL-06 và hợp chất tham khảo.
C @,bδC a,cδC a,dδH (J, Hz) C @,bδC a,cδC a,dδH (J, Hz) 1 38,8 39,7 0,97 (m)/1,61 (m) 26 17,4 17,7 0,81 (s) 2 26,2 26,9 1,69 (m)/1,92 (m) 27 26,2 26,4 1,18 (s) 3 89,7 90,7 3,16 (dd, 4,0; 11,5) 28 176,5 177,0 -
Luận văn thạc sĩ Kinh tế
4 39,7 40,2 - 29 33,1 33,6 0,93 (s) 5 55,7 57,0 0,80 (m) 30 23,7 23,9 0,95 (s) 6 18,4 19,3 1,42 (m)/1,56 (m) 28-O-Glc
7 33,1 34,0 1,61 (m)/1,73 (m) 1ʹ 95,8 95,7 5,40 (d, 7,5) 8 39,9 40,6 - 2ʹ 74,4 73,9 3,34 (dd, 9,0; 7,5) 9 48,0 49,8 1,60 (m) 3ʹ 78,9 78,7 3,43 (dd, 9,0; 9,0) 10 36,9 37,9 - 4ʹ 71,2 71,2 3,38 (dd, 9,0; 9,0) 11 23,7 24,5 1,73 (m)/2,05 (m) 5ʹ 78,2 78,7 3,43 (m)
12 122,5 123,9 5,27 (br s) 6ʹ 62,2 62,5 3,71 (dd, 11,5; 5,5) 3,83 (dd, 11,5; 2,5)
13 144,2 144,8 - 3-O-GluA
14 42,1 42,9 - 1ʹʹ 106,8 106,8 4,35 (d, 7,5) 15 28,2 28,9 1,16 (m)/1,82 (m) 2ʹʹ 75,4 75,5 3,33 (dd, 9,0; 7,5) 16 23,7 24,1 1,74 (m)/2,08 (m) 3ʹʹ 76,3 76,5 3,67 (dd, 9,0; 9,0) 17 47,0 47,7 - 4ʹʹ 78,9 79,6 3,72 (dd, 9,0; 9,0) 18 41,7 42,8 2,87 (dd, 4,0; 14,0) 5ʹʹ 76,3 76,3 3,45 (d, 9,0) 19 46,7 47,3 1,15 (m)/1,73 (m) 6ʹʹ 172,3 172,2 -
20 30,8 31,6 - 4ʹʹ-O-Ara(f)
21 34,0 34,9 1,31 (m)/1,50 (m) 1ʹʹʹ 108,3 109,5 5,09 (br s) 22 32,6 33,9 1,22 (m)/1,42 (m) 2ʹʹʹ 82,4 82,9 4,02 (dd, 1,5) 23 28,2 28,5 1,08 (s) 3ʹʹʹ 78,2 78,2 3,85 (dd, 8,5; 1,5) 24 17,0 17,0 0,86 (s) 4ʹʹʹ 87,4 86,3 4,13 (m)
25 15,5 15,9 0,97 (s) 5ʹʹʹ 62,5 63,2 3,65 (dd, 12,0; 4,5) 3,71 (dd, 12,0; 4,5)
Đo trong a)CD3OD, b)Py-d5c)125 MHz, d)500 MHz. Tín hiệu được xác định trên phổ DEPT, HSQC và HMBC. Glc: β-D-glucopyranosyl, GluA: β-D-glucuronopyranosyl, Ara(f): α-L- arabinofuranosyl. @δC của chikusetsusaponin IV [102].
f. Hợp chất AL-07: oleanolic acid 28-O-β-D-glucopyranosyl ester
Hợp chất AL-07 thu được có dạng bột vô định hình, màu trắng. Dữ liệu phổ NMR của hợp chất AL-07 (Bảng 4.12) xuất hiện 07 tín hiệu proton của nhóm methyl tại δH, 0,77; 0,83; 0,93; 0,95; 0,97; 0,99; 1,18; 01 tín hiệu nhóm carbonyl tại δC 178,1; 01 tín hiệu anomeric tại δH 5,40/ δC 95,7 gợi ý hợp chất AL-07 có phần aglycone thuộc khung oleanane và một gốc đường.
Dựa vào các tương tác trong phổ 2D NMR, cụ thể là các tương tác HSQC giữa các cặp proton/carbon δH 5,40/ δC 95,7; δH 3,35/ δC 73,9; δH 3,41/ δC 78,3; δH
3,37/ δC 71,1; δH 3,36/ δC 78,7; 3,68 và δH 3,81/ δC 62,4 và tương tác HMBC giữa H-1ʹ (δH 5,40) và C-28 (δC 178,1), có thể đề xuất đây là nhóm glucopyranosyl và nhóm này gắn vào C-28 của phần aglycone. Hằng số ghép lớn tại H-1ʹ (J = 8,0 Hz) cho thấy gốc đường này có định hướng β.
Luận văn thạc sĩ Kinh tế
Kết hợp giữa sự phân tích các phổ 1D, 2D NMR và so sánh với chất tham khảo ở tại liệu [136], có thể khẳng định hợp chất AL-07 là oleanolic acid 28-O-β-D- glucopyranosyl ester (công thức phân tử: C36H58O8) (Hình 4.48).
(A) (B)
Hình 4.48. Cấu trúc hóa học (A) và tương tác HMBC chính (B) của hợp chất AL-07.
Bảng 4.12. Số liệu phổ NMR của hợp chất AL-07 và hợp chất tham khảo.
C #δC a,bδC a,cδH (J, Hz) C #δC a,bδC a,cδH (J, Hz) 1 38,4 39,8 1,01 (m)/1,64 (m) 20 30,3 31,5 -
2 27,3 27,9 1,58 (m)/1,64 (m) 21 33,6 33,9 1,33 (m)/1,49 (m) 3 78,6 79,7 3,16 (dd, 4,0; 11,0) 22 32,7 34,9 1,22 (m)/1,41 (m)
4 38,3 39,9 - 23 29,4 28,7 0,99 (s)
5 55,0 56,8 0,76 (m) 24 15,2 16,3 0,77 (s) 6 18,0 19,5 1,42 (m)/1,58 (m) 25 15,0 15,9 0,97 (s) 7 31,7 33,1 1,62 (m)/1,73 (m) 26 16,5 17,7 0,83 (s)
8 38,4 40,7 - 27 26,5 26,3 1,18 (s)
9 47,4 49,0 3,32 (m) 28 176,9 178,1 -
10 36,7 38,1 - 29 23,1 23,9 0,95 (s)
11 22,7 24,5 1,92 (m)/2,06 (m) 30 32,5 33,4 0,93 (s) 12 122,4 123,8 5,27 (br s) 28-O-Glc
13 143,1 144,8 - 1′ 94,0 95,7 5,40 (d, 8,0)
14 41,0 42,9 - 2′ 72,2 73,9 3,35 (m)
15 27,7 28,9 1,10 (m)/1,82 (m) 3′ 76,5 78,3 3,41 (m) 16 22,7 24,0 1,92 (m) 4′ 69,6 71,1 3,37 (m)
17 45,6 48,0 - 5′ 76,5 78,7 3,36 (m)
18 41,5 42,6 2,87 (m) 6′ 61,3 62,4 3,68 (m)/3,81 (m) 19 46,7 47,2 1,17 (m)/1,72 (m)
Đo trong a)CD3OD, b)125 MHz, c)500 MHz. Tín hiệu được xác định trên phổ DEPT, HSQC và HMBC. Glc: β-D-glucopyranosyl. #δC oleanolic acid 28-O-b-D-glucopyranosyl ester [136].
Luận văn thạc sĩ Kinh tế
g. Hợp chất AL-08: oleanolic acid 3-O-α-L-arabinofuranoysyl-(1→4)-β-D- glucuronopyranoside (narcissiflorine)
Hợp chất AL-08 được phân lập có dạng bột vô định hình, màu trắng. Công thức phân tử của hợp chất này được xác định là C41H64O13 bởi phổ HR-ESI-MS có peak ion phân tử proton hóa tại m/z 763,4230 [M‒H]- (Tính toán lý thuyết cho công thức phân tử tương ứng là C41H63O13: 763,4269), m/z 799,4034 [M+35Cl]- (Tính toán lý thuyết cho công thức phân tử tương ứng là C41H64O1335Cl: 799,4034).
Phổ DEPT của hợp chất AL-08 cho các thông tin sau: có 41 nguyên tử carbon trong hợp chất, trong đó 09 nguyên tử carbon không mang proton, 14 nhóm methine, 11 nhóm methylene và 07 nhóm methyl.
Phổ 1H NMR cho tín hiệu của 07 proton thuộc nhóm methyl tại δH 0,84;
0,86; 0,93; 0,95; 0,96; 1,07; 1,18; 01 tín hiệu olefin proton tại δH 5,26 (br s), Phổ
13C NMR cho thấy sự hiện diện của nhóm carbonyl tại δC 182,0. Các tín hiệu trên gợi ý phần aglycone của hợp chất AL-08 thuộc khung oleanane.
11 nguyên tử carbon còn lại cùng với 02 tín hiệu anomeric tại δH 4,36/ δC
106,8; δH 5,10/ δC 109,5 khẳng định sự có mặt của 02 gốc đường, bao gồm một đơn vị hexose và một đơn vị pentose. Tín hiệu tại carbonyl tại δC 176,0 đặc trưng cho đơn vị glucuronopyranosyl, tương tác HMBC giữa GluA H-1ʹ (δH 4,36) và C-3 (δC
90,7) cho thấy gốc này gắn vào C-3 của phần glycone. Tương tự, tín hiệu singlet tù tại proton có độ chuyển dịch hóa học δH 5,10 gợi ý đây là gốc arabinofuranosyl, tương tác HMBC giữa Ara(f) H-1ʹʹ (δH 5,10) và GluA C-4ʹ (δC 79,6) cho thấy gốc này gắn vào C-4ʹ của nhóm glucuronopyranosyl.
Từ các phân tích trên, kết hợp với so sánh hợp chất tham khảo từ tài liệu [81]
(Bảng 4.13), có thể kết luận hợp chất AL-08 là oleanolic acid 3-O-α-L- arabinofuranoysyl-(1→4)-β-D-glucuronopyranoside (Narcissiflorine) (Hình 4.49).
(A) (B)
O
COOH
O
OH HO
HOOC
HO O
HO HO
O
3 5
10 8 12
15 18
20 22
23 24
25 26
27 28 30 29
1
3' 1' 5'
1'' 3''
5''
6'
Hình 4.49. Cấu trúc hóa học (A) và tương tác HMBC chính (B) của hợp chất AL-08.
Bảng 4.13. Số liệu phổ NMR của hợp chất AL-08 và hợp chất tham khảo.
C #,aδC a,bδC a,cδH (J, Hz) C #,aδC a,bδC a,cδH (J, Hz) 1 38,4 39,8 0,98; 1,60 23 28,0 28,5 1,07 (s) 2 26,1 27,0 1,70; 1,92 24 16,7 17,0 0,86 (s)
Luận văn thạc sĩ Kinh tế
3 89,7 90,7 3,17 (dd, 4,2; 11,4) 25 15,2 16,0 0,95 (s)
4 39,2 40,2 - 26 17,3 17,8 0,84 (s)
5 55,7 57,1 0,80 (12,0) 27 26,38 26,4 1,18 (s) 6 18,3 19,3 1,42; 1,56 28 181,5 182,0 - 7 33,2 34,1 1,32; 1,53 29 33,2 33,6 0,93 (s)
8 39,5 40,6 - 30 23,6 24,0 0,96 (s)
9 47,8 49,0 1,60 m 3-O-GluA
10 36,7 37,9 - 1ʹ 106,7 106,8 4,36 (d, 7,8) 11 23,6 24,5 1,89/1,91 2ʹ 75,5 75,5 3,32 (*)
12 122,4 123,6 5,26 (br t, 3,0) 3ʹ 76,3 76,6 3,46 (dd, 9,0; 9,0) 13 144,7 145,3 - 4ʹ 78,6 79,6 3,71 (dd, 9,0; 9,6) 14 42,0 42,8 - 5ʹ 77,3 78,0 3,68 (d, 9,6) 15 28,1 28,9 1,10; 1,80 6ʹ 174,3 176,0 -
16 23,6 24,2 1,60; 2,02 4'-O-Ara(f)
17 46,9 47,8 - 1ʹʹ 109,0 109,5 5,10 (br s) 18 42,0 42,9 2,87 (dd, 13,8; 3,6) 2ʹʹ 82,3 82,9 4,01 (d, 1,8) 19 46,5 47,3 1,15; 1,71 3ʹʹ 77,8 78,6 3,84 (dd, 5,4; 1,8)
20 30,7 31,6 - 4ʹʹ 85,6 86,4 4,14 (m)
21 34,1 35,0 1,21; 1,40 5ʹʹ 62,5 63,2 3,64 (dd, 12,0; 5,0) 3,74 (12,0; 1,8) 22 33,0 33,9 1,53; 1,77
(*) Tín hiệu lồng chập. Đo trong a)CD3OD, b)125 MHz, c)500 MHz. Tín hiệu được xác định trên phổ DEPT, HSQC và HMBC. GluA: β-D-glucuronopyranosyl, Ara(f): α-L-arabinofuranosyl. #δC
narcissiflorine [81].
h. Hợp chất AL-10: stipuleanoside R1
Hợp chất AL-10 được phân lập có dạng bột vô định hình, màu trắng. Phổ HR-ESI-MS xuất hiện peak ion phân tử proton hóa ở m/z 925,4696 [M-H]- (Tính toán lý thuyết cho công thức phân tử tương ứng là C47H73O18: 925,4797), m/z 961,4506 [M+35Cl]- (Tính toán lý thuyết cho công thức phân tử tương ứng là C47H74O1835Cl: 961,4564). Vậy, có thể đề xuất công thức phân tử của hợp chất này là C47H74O18.
Phổ 13C NMR và DEPT của hợp chất AL-10 cho tín hiệu của 47 nguyên tử carbon, trong đó có 09 carbon không mang proton, 19 nhóm methine, 12 nhóm methylene và 07 nhóm methyl.
Phổ NMR gợi ý phần aglycone là oleanolic acid với các đặc trưng như sau:
07 nhóm methyl (δH 1,06/ δC 28,50; δH 0,85/ δC 17; δH 0,96/ δC 15,9; δH 0,83/ δC 17,7;
δH 1,18/ δC 26,4; δH 0,93/ δC 33,6; δH 0,96/ δC 24,0), 01 liên kết C=C tại δC 123,60/
δH 5,25 và δC 145,2, 01 nhóm ‒COOH tại δC 178,0.
17 nguyên tử carbon còn lại cùng với 03 tín hiệu anomeric tại δH 4,37 (d, 7,5 Hz)/ δC 106,4; δH 4,84 (d, 7,5 Hz)/ δC 104,4; δH 5,20 (br s)/ δC 108,3 đề xuất hợp
Luận văn thạc sĩ Kinh tế
chất có 03 gốc đường, trong đó 02 đơn vị hexose và 01 đơn vị pentose. Các tín hiệu đặc trưng tại δC 176,8 (tín hiệu nhóm carbonyl của gốc đường), δC 63,3 (tín hiệu carbon liên kết với nhóm ‒OH), δH 5,20 (br s) lần lượt gợi ý sự hiện diện của các gốc glucuronopyranoside, glucopyranosyl, arabinofuranosyl.
So sánh dữ liệu NMR của hợp chất AL-10 với hợp chất tham khảo ở tại liệu [38] (Bảng 4.14), kết luận đây là hợp chất stipuleanoside R1 (Hình 4.50).
(A) (B)
Hình 4.50. Cấu trúc hóa học (A) và tương tác HMBC chính (B) của hợp chất AL-10.
Bảng 4.14. Số liệu phổ NMR của hợp chất AL-10 và hợp chất tham khảo.
C a,#δC a,bδC a,cδH (J, Hz) C a,#δC a,bδC a,cδH (J, Hz) 1 39,8 39,8 0,98; 1,61 26 17,7 17,7 0,83 (s) 2 26,9 26,9 1,70; 1,82 27 26,3 26,4 1,18 (s) 3 90,7 90,8 3,16 (dd, 4,5; 12,0) 28 178,0 178,0 -
4 40,1 40,2 - 29 33,4 33,6 0,93 (s)
5 57,0 57,0 0,80 30 24,0 24,0 0,96 (s)
6 19,3 19,3 1,43; 1,59 3-O-GluA
7 33,9 34,0 1,33; 1,54 1′ 106,3 106,4 4,37 (d, 7,5)
8 40,7 40,6 - 2′ 76,4 76,5 3,55 (t, 7,5)
9 49,1 49,1 1,60 3′ 81,9 81,9 3,77
10 37,8 37,9 - 4′ 79,3 79,4 3,81
11 24,5 24,5 1,91 5′ 78,1 78,1 3,70
12 123,8 123,6 5,25 (br s) 6′ 176,5 176,8 -
13 144,7 145,2 - 3'-O-Glc
14 42,9 42,9 - 1ʹʹ 104,4 104,4 4,84 (d, 7,5)
15 28,8 28,9 1,81 2ʹʹ 75,5 75,6 3,29
16 23,9 24,1 1,61; 2,02 3ʹʹ 78,3 78,0 3,37
17 48,0 47,7 - 4ʹʹ 71,0 71,1 3,38
18 42,5 42,7 2,87 (br d, 12,0) 5ʹʹ 78,3 78,2 3,27 19 47,2 47,3 1,16; 1,71 6ʹʹ 63,2 63,3 3,66 (m)
20 31,5 31,6 - 4'-O-Ara(f)
21 34,9 35,0 1,22; 1,41 1ʹʹʹ 108,3 108,3 5,20 (br s)
Luận văn thạc sĩ Kinh tế
22 33,1 33,8 1,54; 1,77 2ʹʹʹ 82,1 83,1 4,01 (d, 1,5) 23 28,5 28,5 1,06 (s) 3ʹʹʹ 75,3 75,2 3,87
24 17,0 17,0 0,85 (s) 4ʹʹʹ 87,1 87,2 4,40
25 16,0 15,9 0,96 (s) 5ʹʹʹ 62,4 62,2 3,71/3,84 (m)
Đo trong a)CD3OD, b)125 MHz, c)500 MHz. Tín hiệu được xác định trên phổ DEPT, HSQC và HMBC. Glc: β-D-glucopyranosyl, GluA: β-D-glucuronopyranosyl, Ara(f): α-L-arabinofuranosyl.
#δC Stipuleanoside R1 [38].
i. Hợp chất AL-11: chikusetsusaponin IVa
Hợp chất AL-11 được phân lập có dạng bột vô định hình, màu trắng. Công thức phân tử của AL-11 được xác định là C42H66O14 bởi phổ HR-ESI-MS xuất hiện peak ion phân tử proton hóa ở m/z 793,4349 [M-H]- (Tính toán lý thuyết cho công thức phân tử tương ứng là C42H65O14: 793,4374), m/z 829,4121 [M+35Cl]- (Tính toán lý thuyết cho công thức phân tử tương ứng là C42H66O1435Cl: 829,4141).
Kết hợp phân tích các phổ 1H NMR, 13C NMR, HSQC, DEPT ta thấy hợp chất AL-11 có 42 nguyên tử carbon trong phân tử, trong đó có 07 nhóm methyl (δH
1,07/ δC 28,53; δH 0,87/ δC 17,00; δH 0,96/ δC 16,04; δH 0,82/ δC 17,75; δH 1,18/ δC
26,28; δH 0,93/ δC 33,47; δH 0,96/ δC 23,95), 01 nhóm carbonyl (δC 178,12), 01 liên kết đôi C=C [δH 5,27 (br s)/ δC 123,87 và δC 144,80], 01 nhóm methine carbinol [δH
3,22 (dd, 4,0; 11,5)/ δC 84,9], 02 tín hiệu anomeric [δH 4,35 (d, 7,5)/ δC 106,69; δH
5,40 (d, 7,5)/ δC 95,93].
Như vậy, hợp chất cần phân tích có phần aglycone thuộc khung oleanane với 02 gốc đường. Ngoài ra, đặc trưng tại δC 177,0 cùng tương tác HMBC giữa δH 4,35 (d, J = 7,5 Hz) và δC 90,72 gợi ý nhóm glucuronopyranosyl gắn vào C-3 của phần aglycone, có định hướng β. Các tương tác HSQC giữa các cặp proton/carbon δH
5,40/ δC 95,93; δH 3,35/ δC 73,93; δH 3,43/ δC 78,31; δH 3,38/ δC 71,16; δH 3,43/ δC
78,68; 3,70 và 3,83/ δC 62,45 và tương tác HMBC giữa δH 5,40 (d, J = 7,5 Hz) và δC
178,12 gợi ý đây là gốc glucopyranoside có định hướng β, gắn vào C-28.
So sánh dữ liệu NMR của hợp chất AL-11 và hợp chất tham khảo từ tài liệu [76] (Bảng 4.15), có thể khẳng định hợp chất AL-11 là chikusetsusaponin IVa (Hình 4.51).
(A) (B)
Hình 4.51. Cấu trúc hóa học (A) và tương tác HMBC chính (B) của hợp chất AL-11.
Luận văn thạc sĩ Kinh tế
Bảng 4.15. Số liệu phổ NMR của hợp chất AL-11 và hợp chất tham khảo.
C #,aδC a,bδC a,cδH (J, Hz) C #,aδC a,bδC a,cδH (J, Hz) 1 39,8 39,86 1,02; 1,62 23 28,5 28,53 1,07 (s) 2 26,8 26,86 1,71; 2,01 24 17,0 17,00 0,87 (s) 3 90,8 90,72 3,22 (dd, 4,0; 11,5) 25 16,0 16,04 0,96 (s)
4 40,1 40,18 - 26 17,7 17,75 0,82 (s)
5 57,0 57,04 0,82 27 26,2 26,28 1,18 (s) 6 19,3 19,33 1,42; 1,56 28 178,1 178,12 - 7 33,9 33,98 1,34; 1,51 29 33,4 33,47 0,93 (s)
8 40,7 40,73 - 30 23,9 23,95 0,96 (s)
9 49,1 49,62 1,60 3-O-GluA
10 37,8 37,88 - 1ʹ 106,6 106,69 4,35 (d, 7,5) 11 24,5 24,02 1,91 2ʹ 75,5 75,54 3,27
12 123,8 123,87 5,27 (br s) 3ʹ 78,0 78,03 3,43
13 144,8 144,80 - 4ʹ 73,7 73,76 3,45
14 42,9 42,93 - 5ʹ 76,5 76,50 3,57
15 28,9 28,90 1,11; 1,82 6ʹ 176,9 177,0 - 16 23,8 23,95 1,74; 2,07 28-O-Glc
17 48,0 48,04 - 1ʹʹ 95,7 95,93 5,40 (d, 7,5) 18 42,8 42,61 2,87 (br d, 10,5) 2ʹʹ 73,9 73,93 3,35
19 47,2 47,21 1,17; 1,73 3ʹʹ 78,3 78,31 3,43
20 31,5 31,52 - 4ʹʹ 71,2 71,16 3,38
21 34,9 34,91 1,23; 1,42 5ʹʹ 78,7 78,68 3,43
22 33,1 33,16 1,63; 1,76 6ʹʹ 62,5 62,45 3,70/3,83 (m)
Đo trong a)CD3OD, b)125 MHz, c)500 MHz. Tín hiệu được xác định trên phổ DEPT, HSQC và HMBC. Glc: β-D-glucopyranosyl, GluA: β-D-glucuronopyranosyl. #δC Chikusetsusaponin IVa [76].
j. Hợp chất AR-01: chikusetsusaponin IV
Dữ liệu NMR của hợp chất AR-01 đã được phân tích và nhận thấy trùng lặp với hợp chất AL-06 (Phụ lục 30), có thể kết luận hợp chất AR-01 là chikusetsusaponin IV.
k. Hợp chất AR-02: narcissiflorine
Dữ liệu NMR của hợp chất AR-02 đã được phân tích và nhận thấy trùng lặp với hợp chất AL-08 (Phụ lục 31), có thể kết luận hợp chất AR-02 là narcissiflorine.
l. Hợp chất AR-03: stipuleanoside R1
Dữ liệu NMR của hợp chất AR-03 đã được phân tích và nhận thấy trùng lặp với hợp chất AL-10 (Phụ lục 32), có thể kết luận hợp chất AR-03 là stipuleanoside R1.
Luận văn thạc sĩ Kinh tế
m. Hợp chất AR-06: 3-O-{β-D-glucopyranosyl-(1→3)-[β-D- galactopyranosyl-(1→2)]-β-D-galactopyranosyl-oleanolic acid
Hợp chất AR-06 thu được dưới dạng bột vô định hình, màu trắng. Hợp chất AR-06 được xác định có công thức phân tử là C48H78O18 bởi phổ HR-ESI-MS cho peak ion phân tử proton hóa tại m/z 943 [M+H]+ (Tính toán lý thuyết cho công thức phân tử tương ứng là C48H79O18: 943,5266).
Phổ 13C-NMR của hợp chất AR-06 cho 01 tín hiệu liên kết đôi tại δC 122,4 (CH) và 144,6; 01 tín hiệu nhóm carboxylic tại δC 180,1; 01 tín hiệu carbon bị oxy hóa tại δC 89,4; 07 nhóm methyl tại δC 15,2; 16,5; 17,2; 23,5; 26,0; 27,9; 33,1; và 03 tín hiệu anomeric carbon tại δC 105,1; 104,4; 104,8.
Phổ 1H-NMR của hợp chất AR-06 cho 03 tín hiệu anomeric proton tại δH
4,74 (d, J = 7,8 Hz), 5,33 (d, J = 7,8 Hz), 5,18 (d, J = 7,8 Hz), các proton này tương tác lần lượt với các carbon tại δC 105,1; 104,4; 104,8.
Các dữ liệu trên đề xuất hợp chất AR-06 là một oleanane-12-en-28-oic acid glycoside với 03 gốc đường. Thêm vào đó, phổ HSQC thể hiện các tương tác từ C- 2' (δC 77,0), C-3' (δC 84,7), C-4' (δC 69,1), C-5' (δC 76,1), C-6' (δC 61,8) đến H-2' (δH
4,66), H-3' (δH 4,24), H-4' (δH 4,74), H-5' (δH 3,70), H-6' (δH 4,15/4,31) tương ứng;
từ C-2'' (δC 73,2), C-3'' (δC 75,0), C-4'' (δC 69,4), C-5'' (δC 75,0), C-6'' (δC 61,4) đến H-2'' (δH 3,88), H-3'' (δH 3,97), H-4'' (δH 4,93), H-5" (δH 3,72), H-6'' (δH 4,20/4,30) tương ứng, và từ C-2''' (δC 75,0), C-3''' (δC 77,8), C-4''' (δC 71,1), C-5''' (δC 77,9), C- 6''' (δC 62,1) đến H-2''' (δH 3,92), H-3''' (δH 4,11), H-4''' (δH 4,40), H-5''' (δH 3,82), H-6''' (δH 4,11/4,32) tương ứng. Các dữ liệu NMR của các gốc đường trùng khớp với dữ liệu NMR của Subcapitatoside B (Bảng 4.16) [148]– một hợp chất có gốc đường là 3-O-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-[β-D-galactopyranosyl-(1→2)]-β-D- galactopyranosyl. Hơn nữa, sự xuất hiện của hai peak proton đôi rộng tại δH 4,74 (H-4') và δH 4,93 (H-4'') với hằng số ghép nhỏ (J = 3,0 Hz) cũng khẳng định thêm về sự tồn tại của hai đơn vị đường galactopyranose. Các tương tác HMBC từ Gal H- 1' đến C-3, từ Gal H-1'' đến Gal C-2', và từ Glc H-1''' đến Gal C-3 chỉ ra rằng phần đường của hợp chất AR-06 là 3-O-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-[β-D- galactopyranosyl-(1→2)]-β-D-galactopyranosyl. Thêm vào đó, hằng số ghép lớn của các anomeric proton cho thấy dạng β của các liên kết glycoside.
Từ các phân tích trên, kết hợp so sánh với hợp chất tham khảo từ tài liệu [148], có thể khẳng định hợp chất AR-06 là 3-O-{β-D-glucopyranosyl-(1→3)-[β-D- galactopyranosyl-(1→2)]-β-D-galactopyranosyl-oleanolic acid (Hình 4.52).
Luận văn thạc sĩ Kinh tế