Nhiều nghiên cứu về phân lập các hợp chất tự nhiên có hoạt tính sinh học có trong cây Xáo tam phân. Năm 2013, nhóm nghiên cứu Nguyễn Mạnh Cường và cs.
đã bước đầu nghiên cứu thành phần hóa học cây Xáo tam phân họ Rutaceae”. Kết quả nghiên cứu cho thấy, phân đoạn n-hexan của dịch chiết methanol thân và rễ cây
P. trimera đã phân lập được 3 hợp chất ninhvanin, ostruthin và 6-(2- hydroxyetyl)-
2,2-dimetyl-2H-1-benzopyran, trong đó hợp chất ninhvanin là một coumarin mới lần đầu tiên được phân lập trong tự nhiên. Cấu trúc hóa học của các hợp chất này đã được xác định bằng các phương pháp phổ cộng hưởng từ hạt nhân NMR (1D, 2D) và phổ ESI-MS, HR-ESI-MS. Tiếp theo đến năm 2014, tác giả Trần Thị Thùy
Dương và cs. đã phân lập được hai hợp chất acridon, alkaloid và hai hợp chất coumarin trong bột rễ Xáo tam phân. Dịch chiết cây Xáo tam phân có chứa
flavonoid, saponin, alkaloid và chủ yếu là courmarin và triterpenoid. Các hợp chất này có tác dụng ức chế viêm gan cấp; có tác dụng độc (ức chế, tiêu diệt) đối với 5 dòng tế bào ung thư: Ung thư gan Hep-G2, ung thư đại tràng HTC116, ung thư vú MDA MB231, ung thư buồng trứng OVCAR-8 và ung thư cổ tử cung Hela (mạnh nhất với ung thư gan Hep-G2 và ung thư cổ tử cung) [9, 12, 13, 23]. Nhóm nghiên cứu Nguyễn Văn Tặng và cs., (2015) đã chỉ ra rằng kỹ thuật sấy là một bước quan trọng để tạo các vật liệu khô để bảo quản, điều này có thể có những ảnh hưởng đến sự ổn định của các hợp chất và các hoạt động sinh học của các gốc chống oxi hóa.
Kết quả cho thấy rằng các phương pháp làm khô ảnh hưởng đáng kể đến hàm lượng hoạt chất sinh học và khả năng chống oxy hóa của gốc P. trimera và sấy lò
vi sóng (400 W) là phương pháp tốt nhất, với tổng phenolic, tổng flavonoid, proanthocyanidin và saponin của Xáo tam phân lần lượt là 11,27 mg GAE, 19,88 mg RE, 3,98 mg CE, và 267,15 mg EE/g mẫu khô tương ứng. Ngoài ra, phương pháp này có thời gian sấy ngắn nhất (0,28 h) và tiêu thụ năng lượng ít nhất (0,28 kWh) [24]. Để tiếp tục xác định một số hợp chất mới có trong Xáo tam phân, năm 2017, Hoàng Lê Tuấn Anh và cs. đã nghiên cứu và phân lập 7 hợp chất chính từ cây Xáo tam phân là ostruthin, ninhvanin, 8-geranyl-7-hydroxy-coumarin, 6- (60, 70 - dihydroxy-30, 70 -dimethylocta-20 -enyl) -7-hydroxycoumarin, 6- (7-hydroperoxy- 3,7-dimethylocta-2,5-dienyl) -7-hydroxycoumarin, 6- (2-hydroxyethyl) -2,2- dimethyl-2H - 1-benzopyran và luvangetin. Các hợp chất 1 Pha 4 và 7 đã ức chế sản xuất NO và PGE2 trong các tế bào BV2 được kích thích bằng LPS, với các giá trị IC50 tương ứng từ 9,8 đến 46,8 và từ 9,4 đến 52,8 lM. Ostruthin và ninhvanin ngăn chặn biểu hiện protein iNOS và COX-2 do LPS gây ra. Ngoài ra, Đặng Hoàng Phú và cs. (2017) đã phân lập được thêm hai acridone, paratrimerin C và D và hai coumarin, paratrimerin E và F, được phân lập từ chiết xuất CHCl3 và EtOAc của Paramignya trimera (Rutaceae), cùng với mười hai hợp chất đã biết trước đó (5L1616). Cấu trúc của chúng đã được làm sáng tỏ trên cơ sở dữ liệu phổ. Tất cả các hợp chất phân lập đều có hoạt tính ức chế α-glucosidase đáng kể theo cách phụ thuộc nồng độ và cho thấy hoạt động ức chế mạnh hơn, với các giá trị IC50 nằm trong khoảng từ 14,6 đến 112,2 M, so với acarbose (IC50, 214,5 M) [12].
1.2.3.2. Các tác dụng sinh dược học của một số hợp chất tự nhiên của cây Xáo tam phân
a. Tác dụng chống oxy hóa, kháng viêm và bảo vệ gan của dịch chiết cây Xáo tam phân Cho đến nay, các nghiên cứu phát hiện khả năng chống oxy hóa, kháng viêm
và bảo vệ gan của dịch chiết Xáo tam phân và một số loài thuộc chi Paramignya đã được thực hiện. Các nghiên cứu về tác dụng sinh học của cao chiết chi Paramignya được tiến hành theo hướng đánh giá hoạt tính kháng ung thư, hoạt tính bảo vệ gan và hoạt tính kháng tiểu đường. Đánh giá sinh học đầu tiên được thực hiện trên loài P. lobata thu ở Singapore về hoạt tính kháng ung thư. Cao chiết metanol của thân loài P. lobata đã được chứng minh ức chế dòng ung thư biểu mô với giá trị ED50 100 μg/mL. Ngoài ra, cao chiết metanol của rễ P. trimera có tác dụng chống oxi hóa mạnh hơn hẳn các cao dùng các dung môi hữu cơ khác (nước, acetonitril, ethyl acetate và hexan) [25]. Hơn nữa, Nguyễn Văn Tặng và cs. cũng đã nghiên cứu khảo sát các điều kiện chiết xuất khác nhau và đánh giá về tác dụng chống oxi hóa nhằm tối ưu hóa quy trình chiết xuất cao chiết sử dụng metanol từ rễ loài P. trimera [25].
Nghiên cứu của Nguyễn Minh Khởi và cs. (2013) đã sử dụng mô hình gây độc gan bằng paracetamol (400 mg/kg) trên chuột Swiss, dịch chiết metanol ở liều 10 và 20 g/ kg không làm giảm AST, ALT và bilirubin sau 8 ngày thử nghiệm [26]. Năm 2017, Đặng Hoàng Phú và cs. đã đánh giá thêm hoạt tính ức chế alpha- glucosidase của dịch chiết metanol của rễ P. trimera. Kết quả cho thấy dịch chiết metanol của rễ P. trimera có hoạt tính ức chế enzym α-glucosidase khá cao với IC50 giá trị 36,6 μg/
mL [27]. Năm 2019, Trần Thu Hường và cs. đã chỉ ra rằng P. trimera (Oliv.) Guill.
(Rutaceae), phân bố chủ yếu ở các khu vực phía Nam của Việt Nam, đã được sử dụng làm cây thuốc để điều trị các bệnh về gan và ung thư. Từ chiết xuất methanol của rễ và thân của P. trimera, 3 hợp chất mới đã được phân lập, bao gồm ninhvanin B, paramitrimerol và axit parabacunoic và một số loại alkaloid đã biết như citrusinine-I. Cấu trúc của các hợp chất này đã được xác định bằng phương pháp quang phổ khối ion hóa điện hóa, phân tích phổ cộng hưởng từ hạt nhân, cũng như bằng cách so sánh với dữ liệu công bố [28].
b. Tác dụng chống ức chế các dòng tế bào ung thư của dịch chiết cây Xáo tam phân Về tác dụng gây độc tế bào ung thư, cao chiết metanol của rễ loài P. trimera
dòng tế bào ung thư gồm Hep-G2, HTC-116, MDA- MB-231, OVCAR-8 và dòng tế bào Hela. Gần đây, Nguyễn Văn Tặng và cs. (2019) tiếp tục nghiên cứu tác dụng chống ung thư và tác dụng chống oxi hóa của cao chiết và phân đoạn của loài P.
trimera [17, 24]. Năm 2016, Nguyễn Văn Tặng và cs. nghiên cứu tạo cao chiết metanol của lá và rễ loài P. trimera có khả năng gây độc với 12 dòng tế bào ung thư:
MiaPaCa2 (tuyến tụy), HT29 (đại tràng), A2780 (buồng trứng), H460 (phổi), A431 (da), Du145 (tuyến tiền liệt), BE2-C (u nguyên bào thần kinh), MCF-7 (vú), MCF- 10A, U87, SJ-G2 và SMA (glioblastoma) [17]. Năm 2017, Nguyễn Minh Khởi và cs. đã chứng minh cao chiết metanol của rễ loài P. trimera không độc. Về tác dụng gây độc tế bào ung thư, cao chiết metanol của rễ loài P. trimera cùng phân đoạn hexan và hợp chất ostruthin được chứng minh gây độc với năm dòng tế bào ung thư gồm Hep-G2, HTC-116, MDA- MB-231, OVCAR-8 và dòng tế bào Hela [7, 29].
Năm 2018, Nguyễn Mạnh Cường và cs. đã nghiên cứu tác dụng chống ung thư của cao chiết metanol Xáo tam phân trên dòng tế bào ung thư vú MCF-7 của người, kết quả nghiên cứu kết quả đánh giá độc tính tế bào cho thấy dịch chiết Xáo tam phân trên các khối u đa bào của các tế bào MCF-7. Kết quả đánh giá IC50 của dịch chiết trên các tế bào 3D MCF-7 lớn hơn gần 50 lần so với các tế bào MCF-7 đơn lớp.
Ngược lại, các xét nghiệm độc tính đối với dịch chiết Xáo tam phân cho thấy dịch chiết Xáo tam phân ức chế mạnh các tế bào MCF-7 trong cả điều kiện in vitro và in vivo. Giá trị IC50 đo được khi thử nghiệm dịch chiết Xáo tam phân trong mô hình in vivo thấp hơn đáng kể so với in vitro (giá trị IC50 tương ứng là 168,9 11,65 μg/ml so với 260,8 16,54 g/ml). Thử nghiệm xâm lấn tế bào cho thấy, dịch chiết Xáo tam phân ức chế Hoàn toàn sự xâm lấn của các tế bào MCF-7 ở nồng độ
250g/ml. Kết quả đã đưa ra niềm hi vọng mới cho bệnh nhân ung thư vú và ung thư gan trong giai đoạn tới [29]. Tương tự, nhóm nghiên cứu của Nguyễn Trường Sinh và cs. (2019) đã chỉ ra độc tính tế bào của dịch chiết metanol của P. trimera trên dòng tế bào gốc ung thư vú Việt Nam (VNBRCA1). Những kết quả này cho thấy dịch chiết metanol của P.trimera đã chọn lọc các dòng tế bào VNBRCA1, kết quả nghiên cứu cho thấy rằng dịch chiết metanol của P. trimera có thể là tác nhân tiềm năng trong điều trị ung thư [30]. Gần đây, năm 2019, nghiên cứu của Nguyễn Văn Tặng và cs. đã cho thấy khả năng gây độc tế bào của dịch chiết Xáo tam phân ức chế sự phát triển của tế bào ung thư tuyến tụy của BxPc3 và CFPAC1 trong nồng độ
từ 50 đến 200 g/ml, cao hơn so với các loại thuốc ostruthin (67 μM), gemcitabine (50 nM) và so sánh với dịch chiết giàu saponin từ vỏ cây Quillaja ở nồng độ 200 μg/ml. Ngược lại, khả năng gây độc tế bào của dịch chiết Xáo tam phân có khả năng chống lại các dòng tế bào ung thư tuyến tụy (P <0,05) so với gemcitabine (50 nM) và chiết xuất vỏ cây Quillaja (200 μg/ml). Giá trị IC50 của dịch chiết Xáo tam phân chống lại tế bào ung thư BxPc3 và CFPAC1 lần lượt là 32,12 và 36,65 μg/ml [31].