ựược trên gà Rừng lai F2 nuôi tại vườn Quốc gia Cúc Phương
Theo một nguyên tắc chung, ựể phòng chống các bệnh truyền nhiễm có hiệu quả, thì ựiều kiện tiên quyết là phải xác ựịnh ựược tác nhân gây bệnh và phải hiểu ựủ bản chất của mầm bệnh. Bệnh do vi khuẩn Salmonella gây ra cũng nằm trong nguyên tắc nàỵ Vì vậy, việc xác ựịnh serotyp của các chủng
Salmonella phân lập ựược ở gà Rừng lai F2 nuôi tại vườn Quốc gia Cúc Phương là một phần không thể thiếu ựược trong nghiên cứu của chúng tôị Thông qua kết quả giám ựịnh, giúp người ta hiểu ựược serotyp Salmonella nó là tác nhân chắnh gây ra bệnh tiêu chảy, chết phôi ở trứng và gà con chết. Từ ựó ựịnh hướng sử dụng vaccine phòng bệnh.
Theo Quinn và cs (2002), ựể xác ựịnh serotyp của vi khuẩn Salmonella, nên lấy khuẩn lạc phát triển ở phần nghiêng của thạch TSI hoặc từ môi trường thạch thường.
Từ những chủng Salmonella phân lập ựược trên ựàn gà Rừng lai F2 bằng phản ứng ngưng kết nhanh trên phiến kắnh với kháng huyết thanh ựa giá polyOH, chúng tôi tiếp tục ựịnh typ vi khuẩn bằng kháng huyết thanh ựơn giá và xác ựịnh kháng nguyên lông H ựể ựịnh danh vi khuẩn. Kết quả thu ựược chúng tôi trình bày ở bảng 4.6.
Theo bảng 4.6 cho thấy:
Cả bốn serotyp S.gallinarum, S.pullorum, S.enteritidis và S.typhimurium
ựều dương tắnh với công thức kháng nguyên Ọ Trong ựó các serotyp
S.gallinarum, S.pullorum, S.enteritidis có công thức kháng nguyên O là (09), còn S.typhimurium có công thức kháng nguyên O là (04). Bên cạnh ựó khi xác ựịnh kháng nguyên H, thì S.gallinarum và S.pullorum âm tắnh (không có kháng nguyên lông H); S.enteritidis và S.typhimurium dương tắnh (có kháng nguyên lông H). Nhưng quan sát ựặc tắnh sinh hóa về khả năng sinh H2S trong môi trường TSI thì cho thấy: S.gallinarum không sản sinh H2S, còn S.pullorum,
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦẦẦ 63
Bảng 4.6. Kết quả xác ựịnh serotyp của các chủng vi khuẩn Salmonella phân lập ựược trên ựàn gà Rừng lai F2 nuôi tại vườn Quốc gia Cúc Phương
Số chủng
kiểm tra Serotyp
Phản ứng sinh H2S trong mt TSI Công thức kháng nguyên (KN-O) Kháng nguyên lông (KN-H) Số chủng (+) Tỷ lệ (%) N = 37 S.gallinarum O/AGH2S-ve 09 - 19 51,35 N = 37 S.pullorum O/AGH2S+ve 09 - 10 27,03 N = 37 S.enteritidis O/AGH2S+ve 09 + 5 13,51 N = 37 S.typhimurium O/AGH2S+ve 04 + 3 8,11 Ghi chú:
O = alkaline; A = axit; G = hơi;
H2S+ve = sản sinh H2S; H2S-ve = không sản sinh H2S (-) = không có kháng nguyên H; (+) = có kháng nguyên H
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦẦẦ 64
S.enteritidis và S.typhimurium thì sản sinh H2S. Dựa vào ựặc tắnh sinh hóa này chúng ta có thể phân biệt ựược 4 serotyp trên.
0 10 20 30 40 50 60
S.gallinarum S.pullorum S.enteritidis S.typhimurium
Bốn Serotyp Salmonellaphân lập ựược
Tỷ lệ (%)
Biểu ựồ 4.4. Kết quả ựịnh typ vi khuẩn Salmonella
Kết quả xác ựịnh serotyp của các chủng vi khuẩn Salmonella phân lập ở gà Rừng lai F2 nuôi tại vườn Quốc gia Cúc Phương (bảng 4.6) cho thấy: trong tổng số chủng kiểm tra là 37 chủng thì có 19 chủng là serotyp S.gallinarum
chiếm tỷ lệ 51,35%; 10 chủng là serotyp S.pullorum chiếm tỷ lệ là 27,03%; 5 chủng là serotyp S.enteritidis chiếm tỷ lệ 13,51% và 3 chủng còn lại là serotyp
S.typhimurium chiếm tỷ lệ 8,11%. Như vậy, chủng S.gallinarum chiếm tỷ lệ cao nhất, còn chủng S.typhimurium chiếm tỷ lệ thấp nhất. Trước ựây người ta cho rằng các chủng Salmonella này gây ra các bệnh khác nhau trên gà. S.pullorum
gây bệnh bạch lỵ ở gà con; S.gallinarum gây bệnh thương hàn ở gà lớn;
S.enteritidis và S.typhimurium gây bệnh phó thương hàn ở gà lớn. Hiện nay người ta phân lập căn bệnh từ gà con hay gà lớn ựều thấy cả hai S.gallinarum và
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦẦẦ 65
ựặc tắnh về chuyển hóa ựường. Vì thế bệnh ựược gọi chung là S.gallinarum Ờ pullorum (Nguyễn Như Thanh và cs, 2001).
Theo Nguyễn Vĩnh Phước và cs (1978), Salmonella gây bệnh cho gà chủ yếu là S.gallinarum - pullorum, S.enteritidis, S.typhimurium, trong ựó
S.gallinarum - pullorum gây nên bệnh tắch ựặc trưng là chủ yếu, còn
S.enteritidis, S.typhimurium thường gây bệnh ở thể ẩn mang trùng.
Như vậy, qua nghiên cứu tình hình nhiễm Salmonella trên ựàn gà Rừng lai F2 nuôi tại vườn Quốc gia Cúc Phương, ựã cho số liệu minh chứng cụ thể rằng hầu hết chủng S.gallinarum gây bệnh ở cả gà con và gà lớn tại ựàn gà Rừng lai F2. Và chủng S.gallinarum chiếm tỷ lệ nhiều nhất, tỷ lệ ắt nhất là chủng
Styphimurium.
4.4. Kết quả xác ựịnh ựộc lực của một số chủng vi khuẩn Salmonella phân lập trên ựàn gà Rừng lai F2 nuôi tại vườn Quốc gia Cúc Phương trên chuột nhắt trắng
Selbitz (1995), cho biết: vi khuẩn Salmonella có nhiều serotyp, ựộc lực của mỗi serotyp lại phụ thuộc vào nhiều yếu tố gây bệnh. Ở mỗi serotyp, các yếu tố gây bệnh sẽ quyết ựịnh thể bệnh cấp tắnh và mãn tắnh. Ngoài khả năng gây bệnh cho gà, Salmonella còn có khả năng gây bệnh cho nhiều loài ựộng vật khác, xong vai trò gây bệnh của một số chủng nào ựó chỉ ựược công nhận sau khi tiến hành thử ựộc lực. Do vậy, ựể xác ựịnh vai trò gây bệnh của vi khuẩn
Salmonella phân lập ựược trên ựàn gà Rừng lai F2, chúng tôi ựã tiến hành kiểm tra ựộc lực của các chủng Salmonella phân lập ựược trên chuột nhắt trắng.
Chúng tôi lấy 10 chủng Salmonella phân lập ựược thuộc 4 serotyp
S.gallinarum, S.pullorum, S.enteritidis và S.typhimurium từ gà Rừng lai F2 nuôi tại vườn Quốc gia Cúc Phương ựánh số từ CF - M1 ựến CF - M10 ựể thử ựộc lực bằng cách tiêm truyền qua chuột nhắt trắng. Các chủng ựược nuôi cấy trong môi trường BHI ở 370C trong 18 - 24 giờ, ựếm số lượng vi khuẩn có trong 1ml canh trùng bằng cách ựếm số lượng khuẩn lạc trên thạch. Mỗi chủng tiêm cho 2
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦẦẦ 66
chuột, mỗi chuột 0,1ml canh trùng vào xoang phúc mạc. Theo dõi thời gian chuột chết. Các chuột ựược tiến hành mổ khám, lấy máu tim ựể nuôi cấy phân lập lại vi khuẩn. Kết quả ựược trình bày ở bảng 4.7.
Kết quả ở bảng 4.7 cho thấy: sau khi tiêm canh trùng vi khuẩn
Salmonella, tất cả các chủng vi khuẩn ựem thử ựều gây chết 100% chuột thắ nghiệm trong 8 - 24 giờ sau khi tiêm, trong ựó có 7 chủng gây chết 100% chuột trong thời gian 8 - 24 giờ, 1 chủng gây chết chuột sau 24 giờ, ựặc biệt 2 chủng gây chết chuột trước 8 giờ.
Bảng 4.7. Kết quả kiểm tra ựộc lực của một số chủng Salmonella phân lập ựược trên ựàn gà Rừng lai F2 nuôi tại vườn Quốc gia Cúc Phương
Ký hiệu chủng Số chuột tiêm Liều tiêm (ml) đường tiêm Số chuột chết Tỷ lệ (%) Thời gian chết (giờ) Phân lập lại vi khuẩn CF Ờ M1 2 0,1 2 100,0 8 - 24 + CF Ờ M2 2 0,1 2 100,0 8 -16 + CF - M3 2 0,1 2 100,0 < 8 + CF - M4 2 0,1 2 100,0 > 24 + CF Ờ M5 2 0,1 2 100,0 8 - 16 + CF Ờ M6 2 0,1 2 100,0 8 - 24 + CF Ờ M7 2 0,1 2 100,0 < 8 + CF Ờ M8 2 0,1 2 100,0 8 - 24 + CF Ờ M9 2 0,1 2 100,0 8 - 16 + CF Ờ M10 2 0,1 Xoang phúc mạc 2 100,0 8 - 16 +
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦẦẦ 67
Chúng tôi ựã tiêm môi trường nước thịt (chưa nuôi cấy vi khuẩn) cho hai chuột nhắt trắng làm ựối chứng, thấy chuột khỏe mạnh, bình thường trong suốt thời gian theo dõị Mổ khám chuột chết, lấy máu tim nuôi cấy phân lập vi khuẩn thì ựều phân lập ựược vi khuẩn Salmonella thuần khiết.
Như vậy, kết quả trên cho thấy: các chủng Salmonella phân lập từ gà Rừng lai F2 nuôi tại vườn Quốc gia Cúc Phương có ựộc lực khá cao và cũng là nguyên nhân gây chết cho gà.