phân lập ựược trên chuột bạch
- Chế môi trường BHI (Brain Heart Infusion). Chia ra ống nghiệm, mỗi ống 5 ml.
- Dùng que cấy vô trùng lấy vi khuẩn ựã ựược nuôi ở 370C, 24 giờ trong môi trường thạch MacConkey hoặc thạch XLD, cho vào các ống môi trường BHỊ Nuôi trong 24 giờ, nhiệt ựộ 370C. Trong thời gian nuôi cấy các ống nghiệm ựược lắc nhiều lần ựể kắch thắch sự phát triển của vi khuẩn.
- Trước khi tiêm chuột bạch: xác ựịnh số lượng vi khuẩn Salmonella trong canh trùng bằng phương pháp ựếm số khuẩn lạc trên thạch ựĩa XLD.
Cách tiến hành:
đếm số lượng vi khuẩn trong 1 ml canh trùng (cfu/ml): lấy 1 ml dung dịch nuôi cấy vi khuẩn ở 370C trong 24 giờ, cho vào ống nghiệm có chứa 9 ml nước sinh lý vô trùng. Trộn ựều bằng máy lắc Vortex.
Dùng pipet vô trùng hút 0,1 ml huyễn dịch pha loãng ở các ựộ pha loãng khác nhau 10-1, 10-2, 10-3, 10-4, 10-5, 10-6, 10-7 cấy vào môi trường MacConkey hoặc môi trường XLD (mỗi ựộ pha loãng cấy vào 2 ựĩa môi trường). Dùng que gạt thủy tinh vô trùng dàn ựều huyễn dịch trên khắp bề mặt ựĩa thạch, ựể tủ ấm 370C trong 24 giờ, lấy ra ựọc kết quả.
Số lượng Salmonella (N) trong 1 ml ựược tắnh theo công thức sau: ∑ C
N =
(n1.1 + n2.0,1).d
Trong ựó: C là số khuẩn lạc ựếm ựược ở các ựĩa có ựộ pha loãng liền nhau chọn ựể ựếm. Vắ dụ: ta chọn 2 ựộ pha loãng 10-7 và 10-8.
n1: Số ựĩa của ựộ pha loãng ban ựầu (2 ựĩa): 10-7. n2: Số ựĩa của ựộ pha loãng tiếp theo (2 ựĩa): 10-8. d: Hệ số pha loãng của ựậm ựộ ban ựầu: 10-7.
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦẦẦ 47
- Sau khi ựếm khuẩn lạc ta tiến hành tiêm chuột với liều 0,2 ml canh trùng có ựậm ựộ vi khuẩn 109 cfu/ml, tiêm phúc mạc 2 chuột bạch.
- Theo dõi thắ nghiệm trong 7 ngàỵ
- Khi chuột chết tiến hành mổ khám kiểm tra bệnh tắch và lấy bệnh phẩm của những chuột này phân lập lại vi khuẩn trên môi trường ựặc hiệụ