Nguyên tắc: Dựa vào tắnh chất của vitamin B1 là rất nhạy với chất oxyhóạ Khi bị oxyhóa nó biến thành thiocrom. Chất này dưới ánh sáng tử ngoại có màu huỳnh quang xanh. đây là cơ sở của phương pháp xác ựịnh vitamin B1 vì phản
ứng oxyhóa vitamin B1 thành thiocrom xảy ra theo ựúng tỷ lệ tương ựương: một
phân tử vitamin B1 tạo ra một phân tử thiocrom. để phản ứng trên xảy ra, trước
hết phải giải phóng vitamin B1 ra khỏi mẫu bằng chế phẩm lên men.
Tiến hành: Cân 5-10g mẫu, nghiền kỹ trong cối sứ với 10-15ml H2SO4 0,1N. Chuyển cả vào bình ựịnh mức, thêm H2SO4 ựến 75ml. đặt bình vào nồi cách thủy sôi trong 45 phút, lắc ựềụ để nguội bình và cho chế phẩm men vào (cứ 1g mẫu cân 0,03g khuẩn ty khô). đặt bình vào máy ựiều nhiệt ở 40oC trong 12 giờ. Sau ựó lấy bình ra, thêm nước cất ựến vạch ựịnh mức, lắc kỹ, lọc.
Hút lấy 10ml nước lọc cho vào phễu chiết, thêm vào 20ml rượu butylic, lắc mạnh 1-2 phút. Chiết, tách lớp rượu rạ Thêm vào 1ml K3Fe(CN)6 dung dịch 1% và 3ml natri hydroxit dung dịch 15%, lắc nhanh hỗn hợp và thêm vào 10ml rượu butylic, lại lắc. Tách bỏ lớp nước, còn lại lớp rượu cho qua giấy lọc chứa Na2SO4 khan. Sau ựó chuyển dung dịch vào ống nghiệm có cùng kắch thước, cùng dung tắch và màu thủy tinh giống dãy ống tiêu chuẩn. đo cường ựộ huỳnh quang của mẫu thử- so với dãy tiêu chuẩn trên máy huỳnh quang.
Tắnh kết quả: 1000 * * 1 100 * * %) ( G V V a mg X =
a (γ )- lượngvitamin B1 có trong ống tiêu chuẩn có màu huỳnh quang trùng với ống chứa mẫu thử.
V (ml)- dung tắch bình ựịnh mức.
V1(ml)- thể tắch dung dịch thử lấy ựể oxyhóạ G (g )- lượng mẫu cân.
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦẦẦ.. 35