ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1. Đối tượng, thời gian, địa điểm nghiên cứu
* Đối tượng nghiên cứu:
- Chó, lợn nuôi tại một số địa phương của huyện Phú Lương, tỉnh Thái Nguyên.
- Bệnh do ấu trùng Cysticercus tenuicollis gây ra.
* Thời gian nghiên cứu: từ ngày 9/12/2013 đến ngày 31/5/2014
* Địa điểm nghiên cứu:
- Đề tài được thực hiện ở một số xã của huyện Phú Lương, tỉnh Thái Nguyên. Cụ thể là xã Động Đạt, xã Yên Ninh, xã Sơn Cẩm.
- Địa điểm xét nghiệm mẫu:
+ Phòng thí nghiệm Khoa Chăn nuôi Thú y - Trường Đại học Nông Lâm - Đại học Thái Nguyên.
+ Phòng ký sinh trùng - Viện Sinh thái và Tài nguyên sinh vật.
* Vật liệu nghiên cứu:
- Chó ở các địa phương (mổ khám tìm sán dây)
- Lợn ở các địa phương (mổ khám tìm ấu trùng Cysticerscus tenuicollis) - Mẫu máu lợn mắc bệnh do ấu trùng Cysticercus tenuicollis gây ra và mẫu máu lợn khoẻ.
- Các loại mẫu dùng trong nghiên cứu:
+ Mẫu ấu trùng sán dây Cysticerscus tenuicollis thu thập ở lợn.
+ Mẫu sán dây ký sinh ở đường tiêu hóa chó.
+ Mẫu máu lợn nhiễm ấu trùng Cysticercus tenuicollis và mẫu máu lợn khỏe.
- Dụng cụ, thiết bị và hóa chất:
+ Kính hiển vi quang học, kính lúp.
+ Lọ đựng hoá chất, lamen, lam kính, đĩa petri, chậu thủy tinh, cốc thủy tinh, tiêu bản.
+ Hóa chất gồm: glyxerin, axit lactic, thuốc nhuộm Carmin, cồn (từ 70o đến 100o), nước cất, xylen, Baume-Canada,...
3.2. Nội dung nghiên cứu
3.2.1. Nghiên cứu đặc điểm dịch tễ bệnh do ấu trùng Cysticercus tenuicollis gây ra ở lợn nuôi tại một số xã thuộc huyện Phú Lương, tỉnh Thái Nguyên 3.2.1.1. Tình hình nhiễm ấu trùng Cysticercus tenuicollis ở lợn tại một số xã thuộc huyện Phú Lương, tỉnh Thái Nguyên
- Tỷ lệ và cường độ nhiễm ấu trùng Cysticercus tenuicollis ở lợn tại các địa phương.
- Tỷ lệ và cường độ nhiễm ấu trùng Cysticercus tenuicollis ở lợn theo tuổi.
- Tỷ lệ và cường độ nhiễm ấu trùng Cysticercus tenuicollis ở lợn theo tính biệt.
- Tỷ lệ và cường độ nhiễm ấu trùng Cysticercus tenuicollis ở lợn theo các tháng.
3.2.1.2. Nghiên cứu mối tương quan giữa tỷ lệ nhiễm ấu trùng Cysticercus tenuicollis ở lợn với tỷ lệ nhiễm sán dây Taenia hydatigena ở chó tại các xã thuộc huyện Phú Lương, tỉnh Thái Nguyên
- Thành phần các loài sán dây ký sinh ở chó nuôi tại huyện Phú Lương, tỉnh Thái Nguyên.
- Tỷ lệ và cường độ nhiễm sán dây Taenia hydatigena ở chó tại các địa phương.
- Xác định tương quan giữa tỷ lệ nhiễm sán dây Taenia hydatigena ở chó với tỷ lệ nhiễm ấu trùng Cysticercus tenuicollis của lợn.
3.2.2. Sự thay đổi một số chỉ số huyết học của lợn bị nhiễm ấu trùng Cysticercus tenuicollis
3.2.3. Đề xuất biện pháp phòng trị bệnh do ấu trùng Cysticercus tenuicollis gây ra
3.3. Bố trí thí nghiệm và phương pháp nghiên cứu
3.3.1. Bố trí điều tra và phương pháp xác định tình hình nhiễm ấu trùng Cysticercus tenuicollis ở lợn
3.3.1.1. Bố trí điều tra tình hình nhiễm
Bố trí thu thập mẫu theo phương pháp lấy mẫu phân tầng (Nguyễn Như Thanh, 2001) [18].
Mổ khám lợn ở 3 xã thuộc huyện Phú Lương của tỉnh Thái Nguyên.
Cụ thể như sau:
STT Địa phương Số lợn mổ khám
1 Động Đạt 194
2 Yên Ninh 173
3 Sơn Cẩm 178
Tính chung 545
3.3.1.2. Phương pháp xác định tình hình nhiễm ấu trùng Cysticercus tenuicollis ở lợn
- Bộc lộ xoang ngực và xoang bụng lợn; phát hiện ấu trùng Cysticercus tenuicollis ký sinh trên bề mặt gan, lách, màng treo ruột, màng mỡ chài… , đếm số lượng ấu trùng/lợn và bảo quản ấu trùng trong cồn 700 (Nguyễn Thị Kim Lan, 2011) [10].
3.3.1.3. Phương pháp nghiên cứu một số đặc điểm dịch tễ bệnh do ấu trùng Cysticercus tenuicollis gây ra ở lợn
* Quy định những yếu tố cần xác định liên quan đến tình hình nhiễm ấu trùng Cysticercus tenuicollis
- Tuổi lợn: Tuổi lợn được phân ra theo 3 lứa tuổi:
≤ 6 tháng
> 6 - 12 tháng
> 12 tháng - Tính biệt:
+ Đực + Cái
3.3.2. Bố trí điều tra và phương pháp xác định tình hình nhiễm sán dây ở chó 3.3.2.1. Bố trí điều tra tình hình nhiễm sán dây ở chó
Thu thập mẫu sán dây ở đường tiêu hoá của chó theo phương pháp lấy mẫu phân tầng. Mẫu được thu thập tại các địa phương có lợn được mổ khám kiểm tra ấu trùng sán dây Cysticercus tenuicollis.
3.3.2.2. Phương pháp xác định tình hình nhiễm sán dây ở chó
* Phương pháp mổ khám, thu thập sán dây ở chó
Để tìm sán dây ký sinh ở đường tiêu hoá, tiến hành mổ khám chó theo phương pháp mổ khám phi toàn diện cơ quan tiêu hoá của Skrjabin (1928),
thu thập mẫu sán dây ký sinh ở ruột của chó.
Sán dây sau khi thu thập được làm chết tự nhiên trong nước lã, sau khi làm sạch bằng nước cất bảo quản trong cồn 700. Phân loại sơ bộ các loài sán dây đã thu thập được dưới kính lúp và kính hiển vi, căn cứ vào hình thái, cấu tạo của sán dây trưởng thành theo khoá định loại của Phan Thế Việt và cs (1977) [23], Nguyễn Thị Kỳ (2003) [7]. Việc xác định chính xác thành phần loài sán dây ở đường tiêu hoá chó được thực hiện ở Viện sinh thái và Tài nguyên sinh vật.
* Định loài sán dây: Định loài sán dây theo hệ thống phân loại của Schulz và Gvozdev, 1970 trên tiêu bản nhuộm Carmin (Phan Thế Việt và cs, (1977) [ 23]; Nguyễn Thị Kỳ, 2003 [7]).
- Làm tiêu bản tạm thời (làm tiêu bản trong): Sử dụng hỗn hợp dung dịch gồm: glyxerin + axit lactic + nước cất theo tỷ lệ 1:1:1. Phương pháp này có thể quan sát cấu tạo sơ bộ của đầu, giúp cho việc định loài sán dây được nhanh chóng.
- Làm tiêu bản cố định:
Quy trình nhuộm như sau:
+ Tách mẫu: tách những sán cơ thể có đầy đủ các bộ phận (đầu, cổ, thân).
+ Chọn những mẫu đẹp nhất có cấu tạo đầy đủ (đầu, cổ, thân, đốt già) + Rửa mẫu trong nước cất với thời gian 10 - 15 phút.
+ Ép mẫu: đặt mẫu vào giữa hai lam kính để ép cho mẫu thẳng, các mẫu khác làm tương tự, sau đó đặt các mẫu chồng lên nhau, ngâm trong nước với thời gian 15 phút, sau đó mở ra từ từ.
Trường hợp mẫu tươi: thu mẫu, rửa nhẹ nhàng cho sạch, gắp từng con đặt cẩn thận lên lam kính cho thẳng rồi đặt lam kính khác lên; tiếp tục với những mẫu khác như vậy. Sau đó đặt chồng lên nhau trong một chậu nhựa có nắp đậy, cho cồn 70o vào ngập mẫu, để trong 10 ngày nhấc ra cho vào chậu nước 5 - 10 phút để sán tự bong ra, gắp cho vào cồn 70o, sau 1 tuần đem nhuộm.
+ Mẫu sán lấy ra từ cồn 700 được cho vào thuốc nhuộm Carmin từ 10 - 15 phút, rồi chuyển sang cồn 700, 800, 960, 1000 với thời gian 15 - 30 phút (tùy kích thước từng mẫu); rồi làm trong bằng xylen.
+ Chuẩn bị lamen và lam kính, nhỏ 1 - 2 giọt Baume-Canada lên lam kính, sau đó lấy que gắp sán đặt lên giọt Baume-Canada, đậy lamen lên.
Sau một ngày đem ra soi kính hiển vi.
+ Sau khi làm xong mẫu, điền đầy đủ thông tin về mẫu lên một đầu lam kính.
* Phương pháp xác định cường độ nhiễm sán dây:
Cường độ nhiễm sán dây được xác định bằng số lượng sán dây ký sinh/chó bằng phương pháp mổ khám, thu thập và đếm số lượng sán ký sinh ở mỗi chó.
3.3.2.3. Phương pháp nghiên cứu và xác định tương quan giữa tỷ lệ nhiễm ấu trùng Cysticercus tenuicollis ở lợn và tỷ lệ nhiễm sán dây Taenia hydatigena ở chó
Xác định tỷ lệ nhiễm ấu trùng Cysticercus tenuicollis ở lợn và tỷ lệ nhiễm sán dây Taenia hydatigena ở chó tại từng xã, sau đó nhập số liệu vào phần mềm Minitab 14.0 để xác định hệ số tương quan và vẽ đồ thị.
3.3.3. Phương pháp bố trí và xét nghiệm máu của lợn bị nhiễm ấu trùng Cysticercus tenuicollis và lợn khỏe
* Bố trí xét nghiệm máu lợn:
Lấy mẫu máu của lợn khỏe và lợn bị nhiễm ấu trùng Cysticercus tenuicollis (1 ml/con) vào ống nghiệm có tráng chất chống đông máu.
* Phương pháp xét nghiệm:
Các chỉ tiêu số lượng hồng cầu, số lượng bạch cầu, hàm lượng huyết sắc tố, tỷ khối hồng cầu, sức đề kháng của hồng cầu và công thức bạch cầu được xác định bằng máy Osmetech OPTI - CCA/Blood Gas Analfzen tại bệnh viện Đa khoa tỉnh Thái Nguyên.
3.4. Phương pháp xử lý số liệu
Số liệu thu được được xử lý bằng phương pháp thống kê sinh học (Nguyễn Văn Thiện, 2008) [19], và trên phần mềm thống kê Minitab 14.0.