Nguyên lý của phản ứng: có một số loại kháng nguyên ( virus )có khả năng gây ngưng kết với hồng cầu. Ví dụ như virus dịch tả gà (Newscatle) gây ngưng kết hồng cầu ngựa, mèo, chuột, bò, heo, gà, vịt ...
44
Lợi dụng tính chất gây ngưng kết này mà người ta tiến hành phản ứng ngưng kết để chẩn đốn và chứng minh sự có mặt của virus và xác định hiệu giá virus gây phản ứng ngưng kết.
Còn trong phản ứng ngăn trở ngưng kết hồng cầu là xác định hàm lượng kháng thể chống bệnh Newscatle trên gà.
Chuẩn bị hồng cầu gà, kháng nguyên và kháng huyết thanh:
Chế hồng cầu gà 1%: Dùng ống tiêm (seringe) sạch tráng qua dung dịch thuốc chống đông Citrat Natri 5%. Lấy 10 ml máu ở tỉnh mạch gà khỏe (gà không được tiêm vaccin và không nằm trong ổ dịch ) bơm vào ống nghiệm có chứa sẵn thuốc chống đông, trộn đêù và ly tâm với vận tốc 1000 vòng/phút trong 5 phút. Gạn bỏ phần nước trong phía trên, sau đó cho một lượng nước sinh lý mặn 9%o tương đương vào. Trộn đều và đem ly tâm tiếp tục.
Làm như vậy trong khoảng 2_3 lần cho hồng cầu sạch. Hồng cầu pha thành dung dịch 1% trong nước sinh lý mặn 9%o dung dich hồng cầu này để tủ lạnh có thể sử dụng được 1 tuần.
Chuẩn bị kháng nguyên (virus ): chuẩn bị nước trứng có virus Newscatle Thường sử dụng giống virus Newcastle chủng Lasota (chủng F, hoặc chủng B1). Lấy vaccin Newscatle pha thành dung dịch 1/10 tiêm 0,1ml vào xoang niệu mô của trứng gà ấp 10 ngày tuổi, sau 2-3 ngày phôi chết, để ở tủ lạnh 0 -40C trong 4 giờ. Mổ phôi gà hút lấy nước trứng giữ trong tủ đá sử dụng dần (3 tháng).
Kháng huyết thanh: Là huyết thanh của gà cần xét nghiệm.
Máu được cho vào trong ống nghiệm nằm nghiêng, đem để ở nhiệt độ phòng hoặc ở 40 C. Sau khi máu đông tách lấy phần huyết thanh. Nếu có lẫn hồng cầu đem ly tâm để tách huyết thanh riêng.
+ Tiến hành phản ứng
Muốn tiến hành phản ứng HI được thì phải tiến hành phản ứng HA trước để chuẩn độ kháng nguyên cho phản ứng HI.
4.1. Phản ứng ngưng kết hồng cầu HA
Phản ứng có thể tiến hành trong ống nghiệm hoặc trong tấm nhựa (tấm kính) có lỗ sẵn.
Phản ứng dương tính: hồng cầu ngưng kết lợn cợn, thành quầng rạn nứt dưới đáy ống nghiệm.
Phản ứng âm tính, như hồng cầu lắng xuống đáy ống nghiệm thành cục tròn giống như ống số 9 (ống đối chứng).
45
Hình 5.2: Phản ứng ngưng kết hồng cầu
Lưu ý : Khi đọc kết quả kkhông được cầm lên làm xáo trộn sự ngưng kết. Sau khi có kết quả ngưng kết thì ghi hiệu giá ngưng kết ở ống cuối cùng và ký hiệu là n để sau này tiến hành phản úng HI người ta sử dụng kháng nguyên có hiệu giá n-3 để có kết quả chắc chắn.
Sau khi hồng cầu đã ngưng kết thì hiện tượng này sẽ bị phá hủy dần theo thời gian nên cần phải theo dõi chặt chẽ.
4.2. Phản ứng ngăn trở ngưng kết hồng cầu HI
Cũng được tiến hành tương tự như phản úng trên nhưng khác ở chỗ kháng nguyên và kháng thể tác động với nhau thành phức hợp kháng nguyên-kháng thể làm hồng cầu khơng cịn kháng nguyên tự do để gây hiện tượng ngưng kết và lắng xuống đáy ống nghiệm.
Trong phản ứng này kháng nguyên dùng là kháng nguyên có hiệu giá (n-3) và kháng thể sẽ được pha loãng theo sơ đồ phản ứng sau.
Bảng 5.1: Phản ứng ngăn trở ngưng kết hồng cầu
0,5ml
0,5ml bỏ Ống nghiệm số 1 2 3 4 5 6 7 8
(ĐC)
46
Nước sinh lý (ml) 0,9 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 Độ pha loãng KT 1/10 1/20 1/40 1/80 _ _ _ _
Kháng nguyên (ml) 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 Lắc đều - để yên 15 - 30 phút cho kháng nguyên tác động với kháng thể
HC gà 1% (ml) 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5
Tổng số dd (ml) 1,5 1,5 1,5 1,5 1,5 1,5 1,5 1,5 1,5
Trộn đều, để yên 15 -30 phút, đọc kết quả.
Phản ứng dương tính: Hồng cầu lắng xuống đáy thành cục trịn.
Phản ứng âm tính: Hồng cầu bị ngưng kết lợn cợn dưới đáy ống nghiệm thành quầng rạn nứt giống ống đối chứng số 9.
Lưu ý :
Nếu kết quả phản ứng khơng rõ thì tăng lượng kháng thể lên gấp đơi để trung hịa hết với kháng nguyên có thể bị dư trong phản ứng.
Kết quả phản ứng HI chạy ngược chiều với HA.
5. Thực hành
- Phản ứng ngưng kết hồng cầu (HA).
- Phản ứng ngăn trở ngưng kết hồng cầu (HI).
5.1. Chuẩn bị dụng cụ và mẫu vật
Hồng cầu gà, kháng nguyên và kháng huyết thanh.
5.2. Phương pháp tiến hành
Giáo viên hướng dẫn cho sinh viên cách thực hiện.
5.3. Nội dung thực hành
Thực hiện từng bước theo sự hướng dẫn của giáo viên.
5.4. Tổng kết nhận xét và đánh giá
Đánh giá kết quả thực hành dựa vào việc kiểm tra lại kiến thức sinh viên ghi nhận trong buổi thực hành.
47
Ghi chép đầy đủ, chính xác những thơng tin cần thiết. Sinh viên tham gia đầy đủ.
Tinh thần thái độ học tập nghiêm túc. Viết bài phúc trình.
CÂU HỎI ƠN TẬP
1. Ngun lý và ưng dụng phản ứng kháng nguyên-kháng thể? 2. Phân loại các phản ứng KN-KT?
3. Phản ứng kết tủa trong môi trường lỏng, Phản ứng kết tủa trong môi trường đặc?
4. Phản ứng ngưng kết nhanh. Phản ứng ngưng kết chậm?
CHƯƠNG 6
VẮC-XIN VÀ HUYẾT THANH MH15-06
Giới thiệu:
Vaccine là chế phẩm sinh học có tính kháng ngun, có nguồn gốc từ vi sinh vật (có thể tồn thân hoặc một phần hoặc có cấu trúc tương tự) dùng để tạo miễn dịch đặc hiệu chủ động, nhằm tăng sức đề kháng của cơ thể đối với một số tác nhân gây bệnh cụ thể.
Huyết thanh miễn dịch hay kháng huyết thanh còn gọi là globulin miễn dịch hay immunoglobulin là một lượng kháng thể có nguồn gốc từ người hoặc động vật, giúp cho cơ thể có kháng thể để dự phịng, điều trị bệnh, điều trị phối hợp và điều trị thay thế để chống lại các căn bệnh nguy hiểm, nhất là những căn bệnh về truyền nhiễm.
Mục tiêu: -Kiến thức:
+ Trình bày được định nghĩa về Vắc-xin và huyết thanh.
+ Giải thích về phương pháp sử dụng, bảo quản và chương trình tiêm chủng vắc-xin cho gia súc gia cầm.
48
+ Ứng dụng tiêm Vắc-xin, huyết thanh trong thực tế.
+ Phân loại và nhận biết được vắc-xin, huyết thanh cho gia súc gia cầm.
-Năng lực tự chủ và trách nhiệm: Rèn luyện tính cẩn thận, tỉ mỉ trong công tác
miễn dịch.