Nƣớc ta cú điều kiện thời tiết khớ hậu thuận lợi cho Oocyst cầu trựng phỏt triển. Cầu trựng thƣờng nhiễm và gõy nhiều thiệt hại cho trõu, bũ ở nƣớc ta. Chớnh vỡ vậy, cú nhiều tỏc giả đó và đang nghiờn cứu bệnh cầu trựng.
Phạm Sỹ Lăng (2003) [20] cho biết: Ngoài một số bệnh truyền nhiễm, bệnh ký sinh trựng cũng gõy nhiều tỏc hại cho bũ sữa, trong đú cú bệnh cầu trựng.
Nguyễn Đức Tõn và cs (2004) khi khảo sỏt 708 bờ ở cỏc địa phƣơng
Nam Trung Bộ và Tõy Nguyờn thấy tỷ lệ nhiễm cầu trựng (Eimeria) là tƣơng
đối cao (56,78%). Đoàn Văn Phỳc và Lƣơng Tố Thu (1982) cho biết: bờ lai ở Ba Vỡ nhiễm 34,32% và Phự Đổng là 30,26%. Gần đõy, theo Phan Lục (1995), bũ cỏc tỉnh phớa Bắc nhiễm cầu trựng 14,2%.
Nguyễn Đức Tõn và cs (2005) [28] đó thu thập 433 mẫu phõn bờ từ 5 huyện, thành phố của 3 tỉnh: Đắc Lắc, Phỳ Yờn và Khỏnh Hoà, kiểm tra
Oocyst cầu trựng, kết quả đó xỏc định đƣợc 4 loài cầu trựng thuộc giống
Eimeria ký sinh ở bờ là: E. zuernii, E. bovis, E. ellipsoidalis và E. bukidnonensis. Từ kết quả nghiờn cứu trờn, cỏc tỏc giả đó kết luận: Oocyst cầu
trựng bờ cú thể tồn tại ở nhiệt độ 300C và độ ẩm 80% trong điều kiện phũng
thớ nghiệm tới 24 ngày; trong khi ở điều kiện tự nhiờn dƣới ỏnh sỏng mặt trời, chỳng chỉ tồn tại 2 ngày.
Lõm Thị Thu Hƣơng (2006) [10] đó xột nghiệm phõn của 620 bờ, cho thấy cú 272 mẫu nhiễm cầu trựng Eimeria (43,87%). Bờ dƣới 1 thỏng tuổi chƣa nhiễm cầu trựng, tỷ lệ nhiễm cầu trựng tăng dần đến mức cao nhất (60,89%) vào lỳc bờ 8 thỏng tuổi.
Khi phõn tớch tỷ lệ nhiễm cầu trựng theo trạng thỏi phõn, cỏc tỏc giả trờn cho biết: tỷ lệ nhiễm cầu trựng ở bờ bị tiờu chảy cao hơn bờ khụng tiờu chảy (54,16% so với 34,93%), kết quả bờ bị tiờu chảy nhiễm cầu trựng cao hơn so với nghiờn cứu của Lờ Minh Hà và cs (2000) [6] tại nụng trƣờng Phựng Thƣợng, Ninh Bỡnh (33,30%).
Về thành phần loài cầu trựng: qua việc định danh, cỏc tỏc giả này đó ghi nhận đƣợc sự cú mặt của 8 loài cầu trựng, đều là cỏc loài thƣờng gặp trờn bờ, nghộ. Trong cỏc mẫu phõn bị tiờu chảy, loài E. bovis hiện diện với tỷ lệ cao nhất (52,43%).
Phan Lục (2006) [25] đó dựng một số thuốc sau để điều trị bệnh cầu trựng bờ, nghộ:
- Sulfadimerazin 10 - 12 mg/kgTT, cho uống trong 4 ngày. Thụt nƣớc thuốc tớm 0,1% vào trực tràng.
- Rigecoccin: 10 mg/kgTT mỗi ngày. Cho uống 6 tuần liền. - Amprolium: 10 mg/kgTT mỗi ngày. Cho uống 4 ngày liền. - Sulfaquinoxalin: 15 mg/kgTT, cho uống 4 ngày liền.
Ngoài ra, cú thể dựng những thuốc sau: Monensis, Lasalocid, Nitrofurazone, Decoquinate, Toltrazuril và Dicrazulin.
Tiếp theo cụng trỡnh nghiờn cứu của cỏc tỏc giả trờn, Giang Hoàng Hà và cs (2008) [5] đó thu thập 146 mẫu phõn bũ sữa từ cỏc hộ chăn nuụi tại Hà Nội và vựng phụ cận, sử dụng phƣơng phỏp xột nghiệm ký sinh trựng thƣờng quy, kết quả cho thấy: tỡnh hỡnh nhiễm cầu trựng ở bũ sữa tại cỏc địa bàn điều tra cũng khỏ cao (78,77%). Trong đú, bờ cú tỷ lệ nhiễm cao (93,22%), cao hơn so với bũ (68,97%).
Ở cỏc vựng khỏc nhau thỡ tỷ lệ nhiễm bệnh cầu trựng trờn bũ cũng khỏc nhau. Tỡnh trạng nhiễm cầu trựng với tỷ lệ cao ở cỏc đàn bũ sữa đƣợc kiểm tra cho thấy, vấn đề vệ sinh cho bũ sữa chƣa đƣợc chỳ trọng, phõn khụng đƣợc thu gom, nền chuồng khụng đƣợc cọ rửa sạch trƣớc khi cho ăn. Ngƣời chăn nuụi chƣa cú ý thức trong việc giữ vệ sinh cho đàn bũ.
Chƣơng 2
NỘI DUNG, VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIấN CỨU 2.1. ĐỐI TƢỢNG VÀ VẬT LIỆU NGHIấN CỨU
Đối tƣợng nghiờn cứu:
- Bờ, nghộ dƣới 1 năm tuổi nuụi tại cỏc nụng hộ và cỏc trại tập thể ở 3 huyện Yờn Thế, Tõn Yờn và Yờn Dũng thuộc tỉnh Bắc Giang.
- Bệnh cầu trựng bờ, nghộ.
Vật liệu nghiờn cứu:
- Mẫu phõn tƣơi của bờ, nghộ; mẫu đất bề mặt, mẫu nƣớc, mẫu cỏ ở bói
chăn thả và mẫu đất (cặn) nền chuồng và khu vực xung quanh chuồng nuụi bờ, nghộ.
- Mẫu mỏu (để xỏc định sự thay đổi một số chỉ số huyết học).
- Oocyst cầu trựng (để xỏc định sự phỏt triển và tồn tại của Oocyst ở ngoại cảnh).
- Phõn bờ, nghộ, lỏ xanh, tro bếp và vụi bột (để theo dừi khả năng sinh
nhiệt của cụng thức ủ và tỏc dụng diệt Oocyst cầu trựng trong phõn ủ nhiệt
sinh học).
- Mụi trƣờng đất với cỏc độ ẩm: 10%, 10 - 20%, 20 - 30%, 30 - 40%,
40%.
- Kớnh hiển vi quang học, dung dịch muối NaCl bóo hoà, buồng đếm Mc. Master, hoỏ chất và cỏc dụng cụ thớ nghiệm khỏc.
- Thuốc trị cầu trựng:
+ Vinacoc. ACB (100 g cú: Sulfachorpyrasin sodium 30 g; Lactose 70 g), liều 30 mg/kgTT/ngày.
+ RTD-Coccistop (100 g cú: Sulfadimethoxin 28 g; Trimethoprim 6 g, tỏ dƣợc vừa đủ), liều 136 mg/kgTT/ngày.
+ NOVA-COC 5% (100 ml dung dịch cú: Toltrazuril 5 g, tỏ dƣợc vừa đủ), liều 25 mg/kgTT/ngày.
2.2. ĐỊA ĐIỂM VÀ THỜI GIAN NGHIấN CỨU
Địa điểm nghiờn cứu - Địa điểm thu thập mẫu:
+ Đề tài đƣợc thực hiện ở cỏc xó thuộc 3 huyện của tỉnh Bắc Giang (huyện Yờn Thế, Tõn Yờn và Yờn Dũng).
- Địa điểm xột nghiệm mẫu:
+ Phũng thớ nghiệm Khoa Chăn nuụi Thỳ y - Trƣờng Đại học Nụng Lõm Thỏi Nguyờn.
+ Bộ mụn Bệnh lý - truyền nhiễm, Khoa Thỳ y - Trƣờng Đại học Nụng nghiệp Hà Nội.
Thời gian nghiờn cứu: Từthỏng 8 năm 2010 đến thỏng 8 năm 2011.
2.3. NỘI DUNG NGHIấN CỨU
2.3.1. Nghiờn cứu một số đặc điểm dịch tễ bệnh cầu trựng bờ, nghộ ở ba huyện thuộc tỉnh Bắc Giang
2.3.1.1. Tỷ lệ và cường độ nhiễm cầu trựng ở bờ, nghộ
- Xỏc định loài cầu trựng ký sinh ở bờ, nghộ tại 3 huyện Yờn Thế, Tõn
Yờn và Yờn Dũng.
- Tỷ lệ và cƣờng độ nhiễm cầu trựng bờ, nghộ ở một số địa phƣơng.
2.3.1.2. Nghiờn cứu sự ụ nhiễm Oocyst cầu trựng bờ, nghộ ở ngoại cảnh
- Xỏc định sự ụ nhiễm Oocyst cầu trựng bờ, nghộ ở chuồng trại và khu
vực xung quanh chuồng trại.
- Xỏc định sự ụ nhiễm Oocyst cầu trựng ở bói chăn thả bờ, nghộ (ở đất bề mặt, ở vũng nƣớc trờn bói chăn thả).
2.3.2. Nghiờn cứu đặc điểm bệnh lý, lõm sàng của bệnh cầu trựng bờ, nghộ
- Vai trũ của cầu trựng trong hội chứng tiờu chảy ở bờ, nghộ.
- Tỷ lệ bờ nghộ cú những biểu hiện lõm sàng của bệnh cầu trựng.
- Sự thay đổi một số chỉ số huyết học của bờ, nghộ bị bệnh cầu trựng.
2.3.3. Nghiờn cứu biện phỏp phũng, trị cầu trựng cho bờ, nghộ
- Xỏc định cụng thức ủ phõn nhiệt sinh học cú khả năng sinh nhiệt tốt
để diệt Oocyst cầu trựng bờ, nghộ.
- Nghiờn cứu tỏc dụng của thuốc trị cầu trựng bờ, nghộ.
- Bƣớc đầu đề xuất quy trỡnh phũng, trị bệnh cầu trựng cho bờ, nghộ.
2.4. BỐ TRÍ THÍ NGHIỆM VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIấN CỨU
2.4.1. Bố trớ điều tra và phƣơng phỏp xỏc định tỡnh hỡnh nhiễm cầu trựng ở bờ, nghộ ở bờ, nghộ
2.4.1.1. Bố trớ thu thập mẫu phõn
Bố trớ thu thập mẫu theo phƣơng phỏp lấy mẫu chựm nhiều bậc, thu thập và xột nghiệm phõn của 1516 bờ, nghộ dƣới 1 năm tuổi tại 3 huyện của tỉnh Bắc Giang.
Việc thu thập, xột nghiệm mẫu phõn bờ, nghộ ở 3 huyện đƣợc bố trớ cụ thể nhƣ sau:
Địa phƣơng (huyện, xó) Số bờ, nghộ xột nghiệm phõn (con) Yờn Thế Bố Hạ 121 An Thƣợng 127 Canh Nậu 131 Đồng Hƣu 125 Tõn Yờn Lam Cốt 124 Việt Ngọc 126 Ngọc Chõu 119 Phỳc Sơn 134 Yờn Dũng Lóo Hộ 125 Tõn Mỹ 116 Hƣơng Giỏn 129 Tõn An 139 Tớnh chung 1516
2.4.1.2. Phƣơng phỏp định loài và xỏc định tỡnh hỡnh nhiễm cầu trựng ở bờ, nghộ
* Phương phỏp định loại cầu trựng
- Định loài cầu trựng theo khoỏ định loài của Ajayi J. A. (2004) [52], Daugschies A., Njadrowski M. (2005) [55] và Levine N. (Ed) (1985) [75], dựa trờn 2 căn cứ:
- Thời gian Oocyst sản sinh bào tử ở ngoại cảnh:
Đƣa Oocyst cầu trựng đó thu nhận đƣợc vào dung dịch Bicromate kali
2,5%, lắc nhẹ thƣờng xuyờn và theo dừi sự phỏt triển của Oocyst cầu trựng.
Ghi lại thời gian Oocyst phỏt triển thành Oocyst cú sức gõy bệnh.
* Phương phỏp lấy mẫu, xột nghiệm và đỏnh giỏ cường độ nhiễm cầu trựng
- Phƣơng phỏp thu thập mẫu: Lấy mẫu theo phƣơng phỏp lấy mẫu chựm nhiều bậc.
Mẫu phõn: Thu thập ngẫu nhiờn ở bờ, nghộ nuụi ở nụng hộ, trại tập thể và gia đỡnh. Lấy mẫu phõn trực tiếp từ trực tràng con vật. Để riờng mỗi mẫu phõn vào một tỳi nilon nhỏ, mỗi tỳi đều cú nhón ghi: loại gia sỳc (bờ, nghộ), địa điểm, tuổi, trạng thỏi phõn, thời gian lấy mẫu và cỏc biểu hiện lõm sàng của bờ, nghộ (những thụng tin này cũng đƣợc ghi vào nhật ký đề tài). Trong quỏ trỡnh lấy mẫu, căn cứ vào yếu tố cần xỏc định cú liờn quan đến đặc điểm dịch tễ để lấy mẫu cho tƣơng đối đồng đều về cỏc yếu tố khỏc.
Cỏc mẫu đƣợc xột nghiệm ngay trong ngày (hoặc bảo quản ở nhiệt độ 2 - 4o
C và xột nghiệm trong thời gian khụng quỏ 3 ngày).
* Phương phỏp xỏc định tỷ lệ và cường độ nhiễm cầu trựng
- Phƣơng phỏp xỏc định tỷ lệ nhiễm cầu trựng: Tất cả cỏc mẫu phõn bờ,
nghộ đều đƣợc xột nghiệm bằng phƣơng phỏp Fulleborn với dung dịch muối
NaCl bóo hũa, tỡm Oocyst dƣới kớnh hiển vi (độ phúng đại x 100 và x 400).
- Phƣơng phỏp xỏc định cƣờng độ nhiễm cầu trựng: Cƣờng độ nhiễm cầu trựng đƣợc xỏc định bằng số lƣợng Oocyst/g phõn (đếm trờn buồng đếm
Mc.Master), nhƣ mụ tả của Nguyễn Thị Kim Lan và cs (2008) [15].
- Phƣơng phỏp làm: Cõn 4 gam phõn vào cốc thủy tinh, thờm 56 ml
1 cốc khỏc và khuấy đều. Trong khi khuấy, lấy cụng tơ hỳt hỳt lấy dung dịch phõn nhỏ đầy cả hai buồng đếm Mc. Master (mỗi buồng đếm cú dung tớch 0,5 ml). Để yờn 5 phỳt rồi kiểm tra dƣới kớnh hiển vi (độ phúng đại 10 x 10).
Đếm toàn bộ số Oocyst trong những ụ của hai buồng đếm, rồi tớnh theo
cụng thức:
Số Oocyst/gam phõn =
Tổng số Oocyst ở 2 buồng đếm x 60
4
(tổng số Oocyst ở 2 buồng đếm là số Oocyst cú trong 1 ml dung dịch phõn).
Căn cứ vào số Oocyst/gam phõn và biểu hiện lõm sàng của bờ, nghộ, quy
định mức cƣờng độ nhiễm nhƣ sau:
+ ≤ 500 Oocyst/g phõn: cƣờng độ nhiễm nhẹ (+).
+ 500 - 1000 Oocyst/g phõn: cƣờng độ nhiễm trung bỡnh (++).
+ 1000 - 5000 Oocyst/g phõn: cƣờng độ nhiễm nặng (+++).
+ 5000 Oocyst/g phõn: cƣờng độ nhiễm rất nặng (++++).
2.4.2. Phƣơng phỏp theo dừi và xỏc định tỷ lệ nhiễm cầu trựng theo tuổi bờ, nghộ bờ, nghộ
Quy định cỏc lứa tuổi bờ, nghộ
Tuổi bờ, nghộ đƣợc xỏc định bằng cỏch xem răng và hỏi chủ gia sỳc. Phõn tuổi bờ, nghộ thành 4 lứa tuổi:
2 thỏng tuổi.
2 - 4 thỏng tuổi.
4 - 8 thỏng tuổi. > 8 - 12 thỏng tuổi.
* Phương phỏp bố trớ theo dừi
Chỳng tụi theo dừi bờ, nghộ ở 4 lứa tuổi và lặp lại 3 lần tại 3 huyện Yờn Thế, Tõn Yờn và Yờn Dũng. Bờ, nghộ cỏc lứa tuổi tƣơng đối đồng đều về tớnh biệt, điều kiện chăm súc nuụi dƣỡng, trong cựng một mựa vụ, đƣợc bố trớ theo sơ đồ sau:
Tuổi bờ, nghộ
(thỏng)
Địa phƣơng
(huyện)
Yờn Thế Tõn Yờn Yờn Dũng
2 72 69 74
2 - 4 106 110 108
> 4 - 8 135 138 137
8 - 12 191 186 190
Tớnh chung 504 503 509
* Phương phỏp xỏc định tỷ lệ nhiễm cầu trựng theo tuổi bờ, nghộ
Xột nghiệm phõn theo phƣơng phỏp đó trỡnh bày ở mục 2.4.1.2
2.4.3. Phƣơng phỏp theo dừi và xỏc định tỷ lệ nhiễm cầu trựng theo mựa vụ
* Mựa vụ trong năm được theo dừi gồm:
+ Vụ Xuõn - Hố: từ thỏng 2 đến thỏng 7.
+ Vụ Thu - Đụng: từ thỏng 8 đến thỏng 1 năm sau.
* Phương phỏp bố trớ lấy mẫu
Mẫu đƣợc thu thập theo sơ đồ sau:
Mựa vụ Số bờ, nghộ ở Yờn Thế (con) Số bờ, nghộ ở Tõn Yờn (con) Số bờ, nghộ ở Yờn Dũng (con) Xuõn - Hố 261 248 246 Thu - Đụng 243 255 263 Tớnh chung 504 503 509
* Phương phỏp xỏc định tỷ lệ nhiễm cầu trựng theo mựa vụ
Tiến hành theo phƣơng phỏp đó trỡnh bày ở mục 2.4.1.2
2.4.4. Bố trớ theo dừi sự ụ nhiễm Oocyst cầu trựng bờ, nghộ ở chuồng nuụi, khu vực xung quanh chuồng nuụi bờ, nghộ và khu vực bói chăn thả
* Phương phỏp bố trớ theo dừi
Lấy mẫu theo sơ đồ sau:
Địa phƣơng (huyện, xó) Mẫu nền chuồng Mẫu đất xung quanh chuồng Mẫu đất bói chăn Mẫu nƣớc đọng Yờn Thế 65 88 33 23 Bố Hạ 13 19 5 5 An Thƣợng 26 25 9 6 Canh Nậu 13 23 8 5 Đồng Hƣu 13 21 11 7 Tõn Yờn 51 60 49 35 Lam Cốt 13 17 13 8 Việt Ngọc 14 14 12 7 Ngọc Chõu 12 18 14 9 Phỳc Sơn 12 11 10 11 Yờn Dũng 75 90 34 27 Lóo Hộ 18 23 8 9 Tõn Mỹ 16 18 9 5 Hƣơng Giỏn 22 21 8 6
Phương phỏp thu thập mẫu
- Mẫu đất hoặc cặn nền chuồng nuụi bờ, nghộ: tại mỗi ụ chuồng, lấy mẫu đất (cặn) ở 4 gúc chuồng, trộn đều đƣợc một mẫu xột nghiệm (khoảng 100 gam/mẫu). Mỗi mẫu đƣợc để riờng trong tỳi nilon cú nhón ghi: loại mẫu, địa điểm và thời gian lấy mẫu.
- Mẫu đất bề mặt khu vực xung quanh chuồng: lấy mẫu đất bề mặt tƣơng tự nhƣ cỏch lấy mẫu nền chuồng.
- Mẫu đất bề mặt ở khu vực bói chăn thả bờ, nghộ: tại khu vực chăn thả,
cứ khoảng 20 - 30 m2
lấy ngẫu nhiờn ở vị trớ 4 gúc và ở giữa, trộn đều đƣợc một mẫu xột nghiệm (khối lƣợng khoảng 100 g/mẫu). Mỗi mẫu đƣợc để riờng trong tỳi nilon cú nhón ghi: loại mẫu, địa điểm và thời gian lấy mẫu.
- Mẫu nƣớc ở những vũng nƣớc trờn khu vực bói chăn thả: dựng que khuấy đều vũng nƣớc, lấy cốc thủy tinh mỳc khoảng 80 - 100 ml/vũng, cho vào tỳi nilon, cú nhón ghi loại mẫu, địa điểm và thời gian lấy mẫu.
* Phương phỏp xột nghiệm mẫu: Xột nghiệm cỏc loại mẫu trờn bằng
phƣơng phỏp Fulleborn để phỏt hiện Oocyst cầu trựng.
2.4.5. Bố trớ xỏc định vai trũ của cầu trựng trong hội chứng tiờu chảy ở bờ, nghộ bờ, nghộ
Phương phỏp bố trớ
Thu thập mẫu phõn bờ, nghộ khỏe và bờ, nghộ tiờu chảy tƣơng đƣơng nhau về lứa tuổi, cựng mựa vụ, ở cỏc địa phƣơng cú địa hỡnh tƣơng tự nhau.
* Phương phỏp xỏc định: Xột nghiệm phõn bằng phƣơng phỏp Fulleborn để xỏc định tỷ lệ và cƣờng độ nhiễm cầu trựng bờ, nghộ. Từ đú đỏnh giỏ vai trũ của cầu trựng trong hội chứng tiờu chảy của bờ, nghộ dựa vào sự khỏc nhau về tỷ lệ và cƣờng độ nhiễm cầu trựng giữa bờ, nghộ khỏe và bờ, nghộ tiờu chảy.
2.4.6. Bố trớ theo dừi biểu hiện lõm sàng chủ yếu của bờ, nghộ bị bệnh cầu trựng cầu trựng
* Phương phỏp bố trớ
Trong quỏ trỡnh xột nghiệm phõn, đó phỏt hiện đƣợc những bờ, nghộ nhiễm cầu trựng. Chọn những bờ, nghộ chỉ nhiễm cầu trựng, khụng nhiễm bất cứ loại giun sỏn và bệnh truyền nhiễm nào khỏc, theo dừi cỏc biểu hiện lõm sàng của những bờ, nghộ này.
* Phương phỏp theo dừi
Sử dụng cỏc phƣơng phỏp chẩn đoỏn lõm sàng nhƣ: đo thõn nhiệt bằng nhiệt kế 430C, quan sỏt thể trạng, lụng, da; quan sỏt màu sắc cỏc niờm mạc; theo dừi màu sắc, trạng thỏi và mựi phõn, số lần đi ỉa trong ngày; tỡnh trạng ăn uống....
2.4.7. Phƣơng phỏp xột nghiệm mỏu của bờ, nghộ bị bệnh cầu trựng và bờ, nghộ khỏe bờ, nghộ khỏe
* Bố trớ xột nghiệm mỏu bờ, nghộ
Tiến hành hai đợt xột nghiệm mỏu của hai nhúm bờ, nghộ. Một nhúm gồm những bờ, nghộ nhiễm cầu trựng với mức độ nặng. Nhúm kia là bờ, nghộ khoẻ.
Lấy mẫu mỏu của bờ, nghộ khỏe và bờ, nghộ bị bệnh cầu trựng ở tĩnh mạch cổ (1ml/con) cho vào ống nghiệm cú trỏng chất chống đụng mỏu. Bố trớ thớ nghiệm theo sơ đồ sau:
Bờ, nghộ nhiễm cầu trựng Bờ, nghộ khỏe