2.3.1. Nghiờn cứu một số đặc điểm dịch tễ bệnh cầu trựng bờ, nghộ ở ba huyện thuộc tỉnh Bắc Giang
2.3.1.1. Tỷ lệ và cường độ nhiễm cầu trựng ở bờ, nghộ
- Xỏc định loài cầu trựng ký sinh ở bờ, nghộ tại 3 huyện Yờn Thế, Tõn
Yờn và Yờn Dũng.
- Tỷ lệ và cƣờng độ nhiễm cầu trựng bờ, nghộ ở một số địa phƣơng.
2.3.1.2. Nghiờn cứu sự ụ nhiễm Oocyst cầu trựng bờ, nghộ ở ngoại cảnh
- Xỏc định sự ụ nhiễm Oocyst cầu trựng bờ, nghộ ở chuồng trại và khu
vực xung quanh chuồng trại.
- Xỏc định sự ụ nhiễm Oocyst cầu trựng ở bói chăn thả bờ, nghộ (ở đất bề mặt, ở vũng nƣớc trờn bói chăn thả).
2.3.2. Nghiờn cứu đặc điểm bệnh lý, lõm sàng của bệnh cầu trựng bờ, nghộ
- Vai trũ của cầu trựng trong hội chứng tiờu chảy ở bờ, nghộ.
- Tỷ lệ bờ nghộ cú những biểu hiện lõm sàng của bệnh cầu trựng.
- Sự thay đổi một số chỉ số huyết học của bờ, nghộ bị bệnh cầu trựng.
2.3.3. Nghiờn cứu biện phỏp phũng, trị cầu trựng cho bờ, nghộ
- Xỏc định cụng thức ủ phõn nhiệt sinh học cú khả năng sinh nhiệt tốt
để diệt Oocyst cầu trựng bờ, nghộ.
- Nghiờn cứu tỏc dụng của thuốc trị cầu trựng bờ, nghộ.
- Bƣớc đầu đề xuất quy trỡnh phũng, trị bệnh cầu trựng cho bờ, nghộ.
2.4. BỐ TRÍ THÍ NGHIỆM VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIấN CỨU
2.4.1. Bố trớ điều tra và phƣơng phỏp xỏc định tỡnh hỡnh nhiễm cầu trựng ở bờ, nghộ ở bờ, nghộ
2.4.1.1. Bố trớ thu thập mẫu phõn
Bố trớ thu thập mẫu theo phƣơng phỏp lấy mẫu chựm nhiều bậc, thu thập và xột nghiệm phõn của 1516 bờ, nghộ dƣới 1 năm tuổi tại 3 huyện của tỉnh Bắc Giang.
Việc thu thập, xột nghiệm mẫu phõn bờ, nghộ ở 3 huyện đƣợc bố trớ cụ thể nhƣ sau:
Địa phƣơng (huyện, xó) Số bờ, nghộ xột nghiệm phõn (con) Yờn Thế Bố Hạ 121 An Thƣợng 127 Canh Nậu 131 Đồng Hƣu 125 Tõn Yờn Lam Cốt 124 Việt Ngọc 126 Ngọc Chõu 119 Phỳc Sơn 134 Yờn Dũng Lóo Hộ 125 Tõn Mỹ 116 Hƣơng Giỏn 129 Tõn An 139 Tớnh chung 1516
2.4.1.2. Phƣơng phỏp định loài và xỏc định tỡnh hỡnh nhiễm cầu trựng ở bờ, nghộ
* Phương phỏp định loại cầu trựng
- Định loài cầu trựng theo khoỏ định loài của Ajayi J. A. (2004) [52], Daugschies A., Njadrowski M. (2005) [55] và Levine N. (Ed) (1985) [75], dựa trờn 2 căn cứ:
- Thời gian Oocyst sản sinh bào tử ở ngoại cảnh:
Đƣa Oocyst cầu trựng đó thu nhận đƣợc vào dung dịch Bicromate kali
2,5%, lắc nhẹ thƣờng xuyờn và theo dừi sự phỏt triển của Oocyst cầu trựng.
Ghi lại thời gian Oocyst phỏt triển thành Oocyst cú sức gõy bệnh. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
* Phương phỏp lấy mẫu, xột nghiệm và đỏnh giỏ cường độ nhiễm cầu trựng
- Phƣơng phỏp thu thập mẫu: Lấy mẫu theo phƣơng phỏp lấy mẫu chựm nhiều bậc.
Mẫu phõn: Thu thập ngẫu nhiờn ở bờ, nghộ nuụi ở nụng hộ, trại tập thể và gia đỡnh. Lấy mẫu phõn trực tiếp từ trực tràng con vật. Để riờng mỗi mẫu phõn vào một tỳi nilon nhỏ, mỗi tỳi đều cú nhón ghi: loại gia sỳc (bờ, nghộ), địa điểm, tuổi, trạng thỏi phõn, thời gian lấy mẫu và cỏc biểu hiện lõm sàng của bờ, nghộ (những thụng tin này cũng đƣợc ghi vào nhật ký đề tài). Trong quỏ trỡnh lấy mẫu, căn cứ vào yếu tố cần xỏc định cú liờn quan đến đặc điểm dịch tễ để lấy mẫu cho tƣơng đối đồng đều về cỏc yếu tố khỏc.
Cỏc mẫu đƣợc xột nghiệm ngay trong ngày (hoặc bảo quản ở nhiệt độ 2 - 4o
C và xột nghiệm trong thời gian khụng quỏ 3 ngày).
* Phương phỏp xỏc định tỷ lệ và cường độ nhiễm cầu trựng
- Phƣơng phỏp xỏc định tỷ lệ nhiễm cầu trựng: Tất cả cỏc mẫu phõn bờ,
nghộ đều đƣợc xột nghiệm bằng phƣơng phỏp Fulleborn với dung dịch muối
NaCl bóo hũa, tỡm Oocyst dƣới kớnh hiển vi (độ phúng đại x 100 và x 400).
- Phƣơng phỏp xỏc định cƣờng độ nhiễm cầu trựng: Cƣờng độ nhiễm cầu trựng đƣợc xỏc định bằng số lƣợng Oocyst/g phõn (đếm trờn buồng đếm
Mc.Master), nhƣ mụ tả của Nguyễn Thị Kim Lan và cs (2008) [15].
- Phƣơng phỏp làm: Cõn 4 gam phõn vào cốc thủy tinh, thờm 56 ml
1 cốc khỏc và khuấy đều. Trong khi khuấy, lấy cụng tơ hỳt hỳt lấy dung dịch phõn nhỏ đầy cả hai buồng đếm Mc. Master (mỗi buồng đếm cú dung tớch 0,5 ml). Để yờn 5 phỳt rồi kiểm tra dƣới kớnh hiển vi (độ phúng đại 10 x 10).
Đếm toàn bộ số Oocyst trong những ụ của hai buồng đếm, rồi tớnh theo
cụng thức:
Số Oocyst/gam phõn =
Tổng số Oocyst ở 2 buồng đếm x 60
4
(tổng số Oocyst ở 2 buồng đếm là số Oocyst cú trong 1 ml dung dịch phõn).
Căn cứ vào số Oocyst/gam phõn và biểu hiện lõm sàng của bờ, nghộ, quy
định mức cƣờng độ nhiễm nhƣ sau:
+ ≤ 500 Oocyst/g phõn: cƣờng độ nhiễm nhẹ (+).
+ 500 - 1000 Oocyst/g phõn: cƣờng độ nhiễm trung bỡnh (++).
+ 1000 - 5000 Oocyst/g phõn: cƣờng độ nhiễm nặng (+++).
+ 5000 Oocyst/g phõn: cƣờng độ nhiễm rất nặng (++++).
2.4.2. Phƣơng phỏp theo dừi và xỏc định tỷ lệ nhiễm cầu trựng theo tuổi bờ, nghộ bờ, nghộ
Quy định cỏc lứa tuổi bờ, nghộ
Tuổi bờ, nghộ đƣợc xỏc định bằng cỏch xem răng và hỏi chủ gia sỳc. Phõn tuổi bờ, nghộ thành 4 lứa tuổi:
2 thỏng tuổi.
2 - 4 thỏng tuổi. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
4 - 8 thỏng tuổi. > 8 - 12 thỏng tuổi.
* Phương phỏp bố trớ theo dừi
Chỳng tụi theo dừi bờ, nghộ ở 4 lứa tuổi và lặp lại 3 lần tại 3 huyện Yờn Thế, Tõn Yờn và Yờn Dũng. Bờ, nghộ cỏc lứa tuổi tƣơng đối đồng đều về tớnh biệt, điều kiện chăm súc nuụi dƣỡng, trong cựng một mựa vụ, đƣợc bố trớ theo sơ đồ sau:
Tuổi bờ, nghộ
(thỏng)
Địa phƣơng
(huyện)
Yờn Thế Tõn Yờn Yờn Dũng
2 72 69 74
2 - 4 106 110 108
> 4 - 8 135 138 137
8 - 12 191 186 190
Tớnh chung 504 503 509
* Phương phỏp xỏc định tỷ lệ nhiễm cầu trựng theo tuổi bờ, nghộ
Xột nghiệm phõn theo phƣơng phỏp đó trỡnh bày ở mục 2.4.1.2
2.4.3. Phƣơng phỏp theo dừi và xỏc định tỷ lệ nhiễm cầu trựng theo mựa vụ
* Mựa vụ trong năm được theo dừi gồm:
+ Vụ Xuõn - Hố: từ thỏng 2 đến thỏng 7.
+ Vụ Thu - Đụng: từ thỏng 8 đến thỏng 1 năm sau.
* Phương phỏp bố trớ lấy mẫu
Mẫu đƣợc thu thập theo sơ đồ sau:
Mựa vụ Số bờ, nghộ ở Yờn Thế (con) Số bờ, nghộ ở Tõn Yờn (con) Số bờ, nghộ ở Yờn Dũng (con) Xuõn - Hố 261 248 246 Thu - Đụng 243 255 263 Tớnh chung 504 503 509
* Phương phỏp xỏc định tỷ lệ nhiễm cầu trựng theo mựa vụ
Tiến hành theo phƣơng phỏp đó trỡnh bày ở mục 2.4.1.2
2.4.4. Bố trớ theo dừi sự ụ nhiễm Oocyst cầu trựng bờ, nghộ ở chuồng nuụi, khu vực xung quanh chuồng nuụi bờ, nghộ và khu vực bói chăn thả
* Phương phỏp bố trớ theo dừi
Lấy mẫu theo sơ đồ sau:
Địa phƣơng (huyện, xó) Mẫu nền chuồng Mẫu đất xung quanh chuồng Mẫu đất bói chăn Mẫu nƣớc đọng Yờn Thế 65 88 33 23 Bố Hạ 13 19 5 5 An Thƣợng 26 25 9 6 Canh Nậu 13 23 8 5 Đồng Hƣu 13 21 11 7 Tõn Yờn 51 60 49 35 Lam Cốt 13 17 13 8 Việt Ngọc 14 14 12 7 Ngọc Chõu 12 18 14 9 Phỳc Sơn 12 11 10 11 Yờn Dũng 75 90 34 27 Lóo Hộ 18 23 8 9 Tõn Mỹ 16 18 9 5 Hƣơng Giỏn 22 21 8 6
Phương phỏp thu thập mẫu
- Mẫu đất hoặc cặn nền chuồng nuụi bờ, nghộ: tại mỗi ụ chuồng, lấy mẫu đất (cặn) ở 4 gúc chuồng, trộn đều đƣợc một mẫu xột nghiệm (khoảng 100 gam/mẫu). Mỗi mẫu đƣợc để riờng trong tỳi nilon cú nhón ghi: loại mẫu, địa điểm và thời gian lấy mẫu. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
- Mẫu đất bề mặt khu vực xung quanh chuồng: lấy mẫu đất bề mặt tƣơng tự nhƣ cỏch lấy mẫu nền chuồng.
- Mẫu đất bề mặt ở khu vực bói chăn thả bờ, nghộ: tại khu vực chăn thả,
cứ khoảng 20 - 30 m2
lấy ngẫu nhiờn ở vị trớ 4 gúc và ở giữa, trộn đều đƣợc một mẫu xột nghiệm (khối lƣợng khoảng 100 g/mẫu). Mỗi mẫu đƣợc để riờng trong tỳi nilon cú nhón ghi: loại mẫu, địa điểm và thời gian lấy mẫu.
- Mẫu nƣớc ở những vũng nƣớc trờn khu vực bói chăn thả: dựng que khuấy đều vũng nƣớc, lấy cốc thủy tinh mỳc khoảng 80 - 100 ml/vũng, cho vào tỳi nilon, cú nhón ghi loại mẫu, địa điểm và thời gian lấy mẫu.
* Phương phỏp xột nghiệm mẫu: Xột nghiệm cỏc loại mẫu trờn bằng
phƣơng phỏp Fulleborn để phỏt hiện Oocyst cầu trựng.
2.4.5. Bố trớ xỏc định vai trũ của cầu trựng trong hội chứng tiờu chảy ở bờ, nghộ bờ, nghộ
Phương phỏp bố trớ
Thu thập mẫu phõn bờ, nghộ khỏe và bờ, nghộ tiờu chảy tƣơng đƣơng nhau về lứa tuổi, cựng mựa vụ, ở cỏc địa phƣơng cú địa hỡnh tƣơng tự nhau.
* Phương phỏp xỏc định: Xột nghiệm phõn bằng phƣơng phỏp Fulleborn để xỏc định tỷ lệ và cƣờng độ nhiễm cầu trựng bờ, nghộ. Từ đú đỏnh giỏ vai trũ của cầu trựng trong hội chứng tiờu chảy của bờ, nghộ dựa vào sự khỏc nhau về tỷ lệ và cƣờng độ nhiễm cầu trựng giữa bờ, nghộ khỏe và bờ, nghộ tiờu chảy.
2.4.6. Bố trớ theo dừi biểu hiện lõm sàng chủ yếu của bờ, nghộ bị bệnh cầu trựng cầu trựng
* Phương phỏp bố trớ
Trong quỏ trỡnh xột nghiệm phõn, đó phỏt hiện đƣợc những bờ, nghộ nhiễm cầu trựng. Chọn những bờ, nghộ chỉ nhiễm cầu trựng, khụng nhiễm bất cứ loại giun sỏn và bệnh truyền nhiễm nào khỏc, theo dừi cỏc biểu hiện lõm sàng của những bờ, nghộ này.
* Phương phỏp theo dừi
Sử dụng cỏc phƣơng phỏp chẩn đoỏn lõm sàng nhƣ: đo thõn nhiệt bằng nhiệt kế 430C, quan sỏt thể trạng, lụng, da; quan sỏt màu sắc cỏc niờm mạc; theo dừi màu sắc, trạng thỏi và mựi phõn, số lần đi ỉa trong ngày; tỡnh trạng ăn uống....
2.4.7. Phƣơng phỏp xột nghiệm mỏu của bờ, nghộ bị bệnh cầu trựng và bờ, nghộ khỏe bờ, nghộ khỏe
* Bố trớ xột nghiệm mỏu bờ, nghộ
Tiến hành hai đợt xột nghiệm mỏu của hai nhúm bờ, nghộ. Một nhúm gồm những bờ, nghộ nhiễm cầu trựng với mức độ nặng. Nhúm kia là bờ, nghộ khoẻ.
Lấy mẫu mỏu của bờ, nghộ khỏe và bờ, nghộ bị bệnh cầu trựng ở tĩnh mạch cổ (1ml/con) cho vào ống nghiệm cú trỏng chất chống đụng mỏu. Bố trớ thớ nghiệm theo sơ đồ sau:
Bờ, nghộ nhiễm cầu trựng Bờ, nghộ khỏe
Số con Số mẫu mỏu Số con Số mẫu mỏu
5 nghộ 10 5 nghộ 10
* Phương phỏp xỏc định
Xỏc định số lƣợng hồng cầu, số lƣợng bạch cầu, hàm lƣợng huyết sắc tố và cụng thức bạch cầu bằng mỏy Celldyn 3200.
2.4.8. Bố trớ thớ nghiệm xỏc định cụng thức ủ phõn cú khả năng sinh nhiệt tốt để diệt Oocyst cầu trựng tốt để diệt Oocyst cầu trựng
Chỳng tụi đó thực hiện thớ nghiệm với 3 cụng thức ủ, nhằm lựa chọn đƣợc một cụng thức cú khả năng sinh nhiệt tốt nhất.
* Phương phỏp bố trớ thớ nghiệm
- Chuẩn bị nguyờn liệu ủ, bố trớ ủ theo 3 cụng thức sau:
Cụng thức 1: Cỏc nguyờn liệu ủ đƣợc chuẩn bị theo tỷ lệ: + Phõn chuồng: 800 - 1000 kg. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
+ Lỏ xanh băm nhỏ: 200 kg. + Tro bếp: 60 kg.
Cụng thức 2: Cỏc nguyờn liệu ủ đƣợc bố trớ theo tỷ lệ: + Phõn chuồng: 800 - 1000 kg.
+ Lỏ xanh băm nhỏ: 200 kg. + Vụi bột: 50 kg.
Cụng thức 3: Cỏc nguyờn liệu ủ đƣợc bố trớ theo tỷ lệ: + Phõn chuồng: 800 - 1000 kg.
+ Tro bếp: 60 kg.
+ Lỏ xanh băm nhỏ: 200 kg. + Vụi bột: 50 kg.
- Cỏch ủ phõn: Trộn đều cỏc nguyờn liệu theo tỷ lệ của mỗi cụng thức
ủ, cho vào mỗi bao nilon 20 kg hỗn hợp nguyờn liệu đó trộn của mỗi cụng thức trờn.
Cũng trộn đều 5 kg phõn của bờ, nghộ nhiễm cầu trựng nặng với cỏc nguyờn liệu khỏc (lỏ xanh băm nhỏ, tro bếp, vụi bột) theo tỷ lệ nhƣ 3 cụng thức, sau đú chia vào cỏc tỳi vải nhỏ (mỗi tỳi 10 - 15 g), đặt vào trong cỏc bao phõn ủ (ở cỏc vị trớ khỏc nhau). Buộc miệng bao để tạo mụi trƣờng yếm khớ trong bao.
* Phương phỏp theo dừi khả năng sinh nhiệt và tỏc dụng diệt Oocyst của 3 cụng thức ủ
Hàng ngày dựng nhiệt kế 1000C đo nhiệt độ phõn ủ, đồng thời lấy từ mỗi
bao 1 tỳi vải để xột nghiệm Oocyst cầu trựng. Từ đú xỏc định đƣợc khả năng
sinh nhiệt của mỗi cụng thức ủ và tỏc dụng diệt Oocyst cầu trựng bờ, nghộ.
2.4.9. Phƣơng phỏp đỏnh giỏ hiệu lực của thuốc trị cầu trựng bờ, nghộ
Thử nghiệm thuốc trị cầu trựng với bờ, nghộ đƣợc thực hiện ở những bờ, nghộ nhiễm cầu trựng cƣờng độ từ trung bỡnh đến rất nặng (qua xột nghiệm phõn) ở 3 huyện theo sơ đồ sau:
Lụ thớ nghiệm Tờn thuốc, liều lƣợng Số bờ, nghộ dựng thuốc (con) Thời gian xột nghiệm phõn bờ, nghộ (ngày) Bờ Nghộ Lụ I Vinacoc. ACB (30 mg/kg TT) 55 52 Ngày thứ 15 Lụ II RTD-Coccistop (136 mg/kg TT) 56 49 Ngày thứ 15 Lụ III NOVA-COC 5% (25 mg/kg TT) 51 48 Ngày thứ 15
* Phương phỏp xỏc định khối lượng bờ, nghộ để tớnh liều lượng thuốc
Dựng cõn xỏc định khối lƣợng những bờ, nghộ nhỏ để tớnh liều lƣợng thuốc, với những bờ, nghộ cú khối lƣợng lớn thỡ xỏc định khối lƣợng bằng cỏch đo và tớnh theo cụng thức:
- Nghộ: KL (kg) = 88,4 x (vũng ngực)2 x dài thõn chộo (m).
- Bờ: KL (kg) = 89,8 x (vũng ngực)2 x dài thõn chộo (m).
* Phương phỏp đỏnh giỏ hiệu lực của thuốc trị cầu trựng bờ, nghộ
Trƣớc khi dựng thuốc, xỏc định cƣờng độ nhiễm bằng cỏch đếm số lƣợng Oocyst/g phõn. Sau khi dựng thuốc 15 ngày, xỏc định hiệu lực thuốc bằng phƣơng phỏp xột nghiệm lại phõn bờ, nghộ tỡm
lực triệt để với cầu trựng; nếu vẫn thấy Oocyst trong phõn nhƣng số lƣợng
Oocyst/g phõn giảm rừ rệt thỡ đỏnh giỏ thuốc cú hiệu lực với cầu trựng nhƣng chƣa triệt để; nếu thấy số lƣợng Oocyst/g phõn vẫn khụng giảm so với trƣớc khi dựng thuốc hoặc giảm khụng đỏng kể thỡ đỏnh giỏ thuốc khụng cú hiệu lực với cầu trựng.
2.4.10. Phƣơng phỏp xỏc định độ an toàn của thuốc
Độ an toàn của thuốc đƣợc đỏnh giỏ bằng kết quả theo dừi trạng thỏi cơ thể, sự vận động, ăn uống và một số chỉ tiờu sinh lý (thõn nhiệt, nhịp thở) của bờ, nghộ trƣớc và sau khi dựng thuốc 1 giờ.
Từ đú chọn đƣợc loại thuốc trị cầu trựng cho bờ, nghộ cú hiệu quả cao và an toàn.
2.4.11. Đề xuất quy trỡnh phũng trừ tổng hợp bệnh cầu trựng bờ, nghộ
Từ kết quả thu đƣợc về một số đặc điểm dịch tễ và kết quả thử nghiệm thuốc trị cầu trựng, kết quả xỏc định cụng thức ủ phõn phự hợp, đề xuất quy trỡnh phũng trừ tổng hợp bệnh cầu trựng cho bờ, nghộ.
2.5. PHƢƠNG PHÁP XỬ Lí SỐ LIỆU (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Số liệu thu đƣợc đƣợc xử lý bằng phƣơng phỏp thống kờ sinh học (Nguyễn Văn Thiện, 1997) [36], trờn phần mềm Excel 2003.
2.5.1. Đối với cỏc tớnh trạng định tớnh nhƣ: tỷ lệ nhiễm, cƣờng độ nhiễm cầu trựng,… đƣợc tớnh theo cụng thức:
- Số trung bỡnh cộng: m
P = n
- Sai số của số trung bỡnh:
p. q p (1 - p) mp = mq = ± = ± n n Trong đú: Trong đó: m: Số bê, nghé nhiễm.
mp và mq : Sai số của p và q.
p và q : Tỷ lệ % bờ, nghộ nhiễm và khụng nhiễm cầu trựng. n : Dung lƣợng mẫu.
2.5.2. Đối với cỏc tớnh trạng định lƣợng nhƣ số lƣợng Oocyst cầu trựng, số lƣợng hồng cầu, số lƣợng bạch cầu, ... đƣợc tớnh theo cụng thức:
- Số trung bỡnh cộng: - Độ lệch tiờu chuẩn: x2- (x)2 n Sx = n - 1
- Sai số của số trung bỡnh:
+ Với n 30: x x S m n - 1 + Với n > 30: x x S m n
2.5.3. So sỏnh mức độ sai khỏc giữa hai số trung bỡnh
* Đối với cỏc tớnh trạng định lƣợng, cỏc bƣớc tiến hành nhƣ sau:
x
X = n
Trong đó: x: Tổng các giá trị của x. n: Dung l-ợng mẫu.
Trong đó: mx: Sai số của số trung bình. Sx: Độ lệch tiêu chuẩn. n: Dung l-ợng mẫu.