3. Ý NGHĨA KHOA HỌC VÀ THỰC TIỄN CỦA ĐỀ TÀI
2.1. ĐỐI TƢỢNG, VẬT LIỆU, ĐỊA ĐIỂM, THỜI GIAN NGHIÊN CỨU
2.1.1. Đối tƣợng nghiên cứu
- Trâu, bò các lứa tuổi nuôi tại một số xã thuộc huyện Phú Bình và Võ Nhai - tỉnh Thái Nguyên.
- Trứng và ấu trùng giun xoăn dạ múi khế. - Bệnh giun xoăn dạ múi khế ở trâu, bò.
2.1.2. Vật liệu nghiên cứu
- Mẫu phân tƣơi của trâu, bò, bê, nghé.
- Mẫu đất bề mặt, mẫu nƣớc, mẫu cỏ ở bãi chăn thả trâu, bò.
- Mẫu đất (cặn) nền chuồng và khu vực xung quanh chuồng trâu, bò. - Nguyên liệu ủ nhiệt sinh học (phân trâu, bò, lá xanh, tro bếp, vôi bột, bùn ao).
- Dung dịch nƣớc nuối NaCl bão hòa, kính hiển vi quang học Labophot – 2 gắn máy ảnh và màn hình, buồng đếm Mc. Master, máy ly tâm, hóa chất và các dụng cụ thí nghiệm khác.
- Thuốc phòng, trị giun xoăn dạ múi khế: Benvet 600, Hamectin-25, Levasol 7,5%.
2.1.3. Địa điểm nghiên cứu
- Địa phƣơng triển khai đề tài: 2 huyện Phú Bình (gồm các xã: Điềm Thụy, Nhã Lộng, Bảo Lý, Nga My) và huyện Võ Nhai (gồm các xã: Dân Tiến, Tràng Xá, Liên Minh và Phú Thƣợng) - tỉnh Thái Nguyên.
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc-tnu.edu.vn
+ Phòng thí nghiệm Khoa chăn nuôi thú y - Trƣờng Đại học Nông Lâm Thái Nguyên.
+ Phòng ký sinh trùng - Viện Sinh thái và Tài nguyên sinh vật (Viện khoa học công nghệ Việt Nam).
- Địa điểm thử nghiệm biện pháp phòng trị: xã Điềm Thụy, Nhã Lộng, Bảo Lý, Nga My thuộc huyện Phú Bình - tỉnh Thái Nguyên.
2.1.4. Thời gian nghiên cứu
- Từ năm 2008 đến năm 2010.
2.2. NỘI DUNG NGHIÊN CỨU
2.2.1. Nghiên cứu một số đặc điểm dịch tễ bệnh giun xoăn dạ múi khế trâu, bò ở hai huyện của tỉnh Thái Nguyên. trâu, bò ở hai huyện của tỉnh Thái Nguyên.
- Thành phần loài giun xoăn dạ múi khế ký sinh ở trâu, bò nuôi tại hai huyện Phú Bình và Võ Nhai.
- Tỷ lệ và cƣờng độ nhiễm giun xoăn dạ múi khế trâu, bò tại một số địa phƣơng.
- Tỷ lệ và cƣờng độ nhiễm giun xoăn dạ múi khế theo tuổi trâu, bò. - Tỷ lệ và cƣờng độ nhiễm giun xoăn dạ múi khế theo mùa vụ. - Tỷ lệ và cƣờng độ nhiễm giun xoăn dạ múi khế ở trâu và bò.
2.2.2. Nghiên cứu tình trạng ô nhiễm trứng và ấu trùng giun xoăn dạ múi khế trâu, bò ở ngoại cảnh.
- Xác định tình trạng ô nhiễm trứng và ấu trùng giun xoăn dạ múi khế ở chuồng trại, khu vực xung quanh chuồng trại .
- Xác định sự lƣu hành trứng và ấu trùng giun xoăn dạ múi khế ở bãi chăn thả trâu, bò (ở đất bề mặt, ở vũng nƣớc trên bãi chăn, ở cỏ mọc trên bãi chăn).
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc-tnu.edu.vn
2.2.3. Nghiên cứu sự phát triển của trứng và khả năng tồn tại của ấu trùng cảm nhiễm H. contortus ở ngoại cảnh trùng cảm nhiễm H. contortus ở ngoại cảnh
- Sự phát triển của trứng H. contortus trong phân thành ấu trùng có sức gây bệnh.
- Sự phát triển của trứng và khả năng tồn tại của ấu trùng cảm nhiễm
H. contortus trong đất ở các ẩm độ khác nhau.
2.2.4. Biểu hiện lâm sàng của trâu, bò bị bệnh giun xoăn dạ múi khế.
- Vai trò của giun xoăn dạ múi khế trong hội chứng tiêu chảy ở trâu, bò, bê nghé.
- Triệu chứng lâm sàng của trâu, bò bị bệnh giun xoăn dạ múi khế .
2.2.5. Nghiên cứu hiệu quả của một số biện pháp phòng trị bệnh giun xoăn dạ múi khế cho trâu, bò xoăn dạ múi khế cho trâu, bò
- Hiệu quả của biện pháp ủ phân nhiệt sinh học diệt trứng và ấu trùng giun xoăn dạ múi khế
- Hiệu lực của thuốc tẩy giun xoăn dạ múi khế cho trâu, bò
2.2.6. Thử nghiệm biện pháp phòng trị trên thực địa và đề xuất quy trình phòng trị trình phòng trị
- Xác định tỷ lệ và cƣờng độ nhiễm giun xoăn dạ múi khế của bò ở lô thử nghiệm và lô đối chứng trƣớc khi thử nghiệm
- Xác định tỷ lệ và cƣờng độ nhiễm giun xoăn dạ múi khế của lô thử nghiệm và lô đối chứng sau 2 tháng thử nghiệm
- Xác định tỷ lệ và cƣờng độ nhiễm giun xoăn dạ múi khế của lô thử nghiệm và lô đối chứng sau 4 tháng thử nghiệm
- Bƣớc đầu đề xuất quy trình phòng trừ tổng hợp bệnh giun xoăn dạ múi khế cho trâu, bò
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc-tnu.edu.vn
2.3. PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.3.1. Nghiên cứu một số đặc điểm dịch tễ bệnh giun xoăn dạ múi khế
2.3.1.1. Phương pháp xác định thành phần loài giun xoăn dạ múi khế ký sinh ở trâu, bò
Mổ khám, thu thập giun ký sinh ở dạ múi khế và ruột non của trâu, bò; bảo quản giun trong dung dịch Barbagallo.
* Chuẩn bị mẫu vật giun để định loại
Các mẫu vật sau khi thu về đều đƣợc thay dung dịch bảo quản để tránh hƣ hỏng. Trƣớc khi định loại, ngâm giun trong dung dịch Lactophenol để làm trong giun.
* Định loại
Đặt giun đã làm trong lên phiến kính, quan sát dƣới kính hiển vi hình thái các bộ phận: đầu, miệng, phễu miệng, gai cổ, túi đầu, thực quản, túi đuôi, gai giao hợp (giun đực); âm hộ, cơ quan thải trứng (giun cái). Từ đó phân loại giun theo khóa định loại của Skrjabin và cs (1963) [45], Nguyễn Thị Lê và cs (1996) [25]; chụp ảnh hình thái các bộ phận chủ yếu của giun trong quá trình định loại.
Sau khi định loại tại phòng ký sinh trùng - viện Sinh thái và Tài nguyên sinh vật, mẫu vật đƣợc bảo quản tại phòng thí nghiệm Ký sinh trùng - Khoa Chăn nuôi Thú y - Trƣờng Đại học Nông Lâm Thái Nguyên.
2.3.1.2. Phương pháp xác định tuổi trâu, bò
Kết hợp xem răng và hỏi chủ gia súc để xác định tuổi trâu, bò.
2.3.1.3. Phương pháp thu thập mẫu và xét nghiệm mẫu phân trâu, bò
- Phƣơng pháp thu thập mẫu phân trâu, bò:
Thu thập ngẫu nhiên ở trâu, bò nuôi tại nông hộ, trại tập thể và gia đình. Lấy phân trực tiếp từ trực tràng con vật vào buổi sáng sớm, để riêng mỗi mẫu phân vào một túi nilon nhỏ, mỗi túi đều có nhãn ghi: loại gia súc (trâu, bò), địa điểm, tuổi, trạng thái phân, thời gian lấy mẫu và các biểu hiện lâm sàng của trâu, bò (Những thông tin này cũng đƣợc ghi vào nhật ký đề
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc-tnu.edu.vn
tài). Ngoài ra, căn cứ vào yếu tố cần xác định có liên quan đến đặc điểm dịch tễ để lấy mẫu cho tƣơng đối đồng đều về các yếu tố khác.
- Mẫu đƣợc xét nghiệm ngay trong ngày, những mẫu chƣa xét nghiệm đƣợc bảo quản ở nhiệt độ 2 - 40
C, không quá 3 ngày.
* Phƣơng pháp xét nghiệm mẫu
Sử dụng phương pháp Fulleborn :
- Nguyên lý: Sử dụng dung dịch NaCl bão hòa để làm trứng giun tròn
Trichostrongylidae nổi lên trên bề mặt của dung dịch.
- Cách tiến hành: Lấy 5 - 10g phân cho vào cốc thuỷ tinh rồi cho khoảng 40 - 50 ml nƣớc muối bão hoà, dùng đũa thuỷ tinh khuấy cho tan phân, lọc qua lƣới thép bỏ bớt cặn bã. Cho nƣớc lọc vào lọ nhỏ sao cho đầy đến miệng lọ, đặt phiến kính lên cho tiếp xúc với bề mặt dung dịch. Để yên khoảng 30 phút, trứng giun sẽ nổi lên dính vào phiến kính. Lấy phiến kính soi dƣới kính hiển vi (độ phóng đại 100 lần) tìm trứng giun xoăn dạ múi khế.
2.3.1.4. Phương pháp xác định trâu, bò nhiễm và cường độ nhiễm giun xoăn dạ múi khế ở một số xã thuộc huyện Phú Bình - tỉnh Thái Nguyên
* Phƣơng pháp xác định trâu, bò nhiễm: Xét nghiệm tất cả mẫu phân thu thập bằng phƣơng pháp Fulleborn. Những mẫu phân phát hiện thấy có trứng giun xoăn dạ múi khế đƣợc đánh giá là nhiễm giun tròn này. Những mẫu phân không phát hiện thấy trứng đƣợc đánh giá là không nhiễm.
* Phƣơng pháp xác định cƣờng độ nhiễm giun xoăn dạ múi khế:
Cƣờng độ nhiễm đƣợc xác định bằng phƣơng pháp đếm trứng giun xoăn dạ múi khế trên buồng đếm Mc. Master (Theo tài liệu của Jorgen Hansen và Brian Perry (1994) [49]).
Cho 3g phân vào cốc thuỷ tinh có vạch chia độ, rồi đổ từ từ dung dịch NaCl bão hoà vào tới mức 100ml, dùng đũa thuỷ tinh khuấy cho tan phân,
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc-tnu.edu.vn
lọc qua lƣới thép bỏ bớt cặn. Khuấy đều nƣớc lọc, dùng pipet hút 1ml nhỏ vào hai buồng đếm. Để yên khoảng 15-20 phút để trứng đƣợc đẩy lên bề mặt buồng đếm. Đếm tất cả số trứng giun xoăn dạ múi khế trên hai buồng đếm. Từ đó tính ra số trứng giun xoăn dạ múi khế trên 1g phân theo công thức:
Tổng số trứng ở 2 buồng đếm
Số trứng/gam phân = x 100 3
Căn cứ vào kết quả đếm số trứng/gam phân và biểu hiện lâm sàng của trâu bò, quy định 4 mức cƣờng độ nhiễm:
500 trứng/g phân : Cƣờng độ nhiễm nhẹ (+).
>500-800 trứng/g phân : Cƣờng độ nhiễm trung bình (++). >800-1000 trứng/g phân : Cƣờng độ nhiễm nặng (+++).
>1000 trứng/g phân : Cƣờng độ nhiễm rất nặng (++++).
2.3.2. Phƣơng pháp nghiên cứu sự ô nhiễm trứng và ấu trùng giun xoăn dạ múi khế ở chuồng nuôi, khu vực xung quanh chuồng nuôi và trên bãi dạ múi khế ở chuồng nuôi, khu vực xung quanh chuồng nuôi và trên bãi chăn thả trâu, bò
2.3.2.1. Phương pháp nghiên cứu sự ô nhiễm trứng và ấu trùng giun xoăn dạ múi khế ở chuồng nuôi, khu vực xung quanh chuồng nuôi trâu, bò
* Phương pháp thu thập mẫu
- Mẫu đất hoặc cặn nền chuồng nuôi trâu bò: Tại mỗi ô chuồng, lấy mẫu đất (cặn) ở 4 góc chuồng và ở giữa chuồng, trộn đều đƣợc một mẫu xét nghiệm (khoảng 80 - 100g/mẫu). Mỗi mẫu đƣợc để riêng trong túi nilon có nhãn ghi địa điểm và thời gian lấy mẫu.
- Mẫu đất bề mặt khu vực xung quanh chuồng: Trong khoảng cách 5m xung quang chuồng nuôi trâu bò, cứ 10 - 15m2 lấy 1 mẫu đất bề mặt (1 mẫu khối lƣợng 80 - 100 g, đƣợc phối hợp bởi 4 mẫu ở 4 góc và 1 mẫu ở giữa).
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc-tnu.edu.vn
Các mẫu thu thập đƣợc xét nghiệm ngay trong ngày, những mẫu chƣa xét nghiệm ngay thì đƣợc bảo quản ở nhiệt độ 2 - 40
C, thời gian bảo quản không quá 3 ngày.
* Phương pháp xét nghiệm mẫu
Áp dụng phƣơng pháp Fullerborn để phát hiện trứng, áp dụng phƣơng pháp Baerman để phát hiện ấu trùng giun xoăn dạ múi khế.
2.3.2.2. Phương pháp nghiên cứu sự ô nhiễm trứng và ấu trùng giun xoăn dạ múi khế ở khu vực bãi chăn thả
* Phương pháp thu thập mẫu ở khu vực bãi chăn thả trâu, bò
- Mẫu đất bề mặt ở khu vực bãi chăn thả trâu, bò: Tại mỗi khu vực chăn thả, cứ khoảng 20 - 30 m2
lấy ngẫu nhiên ở vị trí 4 góc và ở giữa, trộn đều đƣợc một mẫu xét nghiệm, khối lƣợng khoảng 80 - 100g/mẫu.
- Mẫu nƣớc ở những vũng nƣớc trên khu vực bãi chăn thả: Dùng que khuấy đều vũng nƣớc, lấy cốc thuỷ tinh múc khoảng 200 - 300 ml/vũng.
- Mẫu cỏ mọc trên khu vực bãi chăn thả: Dùng kéo cắt ngẫu nhiên cỏ ở các vị trí khác nhau trên bãi chăn, cắt cách mặt đất khoảng 1- 2 cm, cứ 20 - 30m2 thu một mẫu ở 5 vị trí khác nhau (4 góc và ở giữa), trộn đều đƣợc 1 mẫu (khoảng 150 - 200g/mẫu). Mỗi loại mẫu trên đều đƣợc để riêng mỗi mẫu vào một túi nilon nhỏ, có nhãn ghi địa điểm và thời gian lấy mẫu.
* Phương pháp xét nghiệm mẫu: Xét nghiệm mẫu bằng phƣơng pháp
Fullerborn để phát hiện trứng, bằng phƣơng pháp Baerman để phát hiện ấu trùng giun xoăn dạ múi khế.
Riêng đối với mẫu nƣớc: ly tâm mẫu mẫu nƣớc với vận tốc 3000 vòng/phút trong 5 phút, gạn nƣớc giữ lại cặn. Cho dung dịch muối Nacl bão hòa vào khuấy tan cặn. Để yên 20 phút rồi dùng vòng thép vớt lớp váng nổi trên bề mặt, soi kính hiển vi tìm trứng giun xoăn dạ múi khế.
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc-tnu.edu.vn
2.3.3. Phƣơng pháp nghiên cứu sự phát triển của trứng và khả năng sống của ấu trùng cảm nhiễm H. contortus ở ngoại cảnh sống của ấu trùng cảm nhiễm H. contortus ở ngoại cảnh
* Phương pháp thu thập mẫu phân bò chỉ nhiễm H. contortus:
Cách xác định trâu bò chỉ nhiễm giun H. contortus đƣợc thực hiện nhƣ sau: Trong quá trình thu thập mẫu phân trâu bò để xác định tỷ lệ và cƣờng độ nhiễm giun xoăn dạ múi khế, chúng tôi thấy một số trâu bò chỉ nhiễm một loài giun xoăn dạ múi khế. Bằng phƣơng pháp nuôi cấy, phân lập và xác định loài giun qua đặc điểm hình thái và cấu tạo, chúng tôi đã xác định đƣợc những trâu bò chỉ nhiễm H. contortus, trong khi phần lớn trâu bò thƣờng nhiễm hỗn hợp các loài . Chúng tôi đã mua 2 bò nhiễm H. contortus với cƣờng độ nặng, nuôi cách ly tại chuồng và thu thập phân của 2 bò này. Sau khi đã thu thập giun ở dạ múi khế và ruột non, rồi định loài trên giun trƣởng thành tại phòng Ký sinh trùng - viện Sinh thái và tài nguyên sinh vật. Theo kết quả định loài thì loài giun đó chính là H. contortus.
* Phương pháp thu nhận trứng và ấu trùng
- Thu nhận trứng H. contortus từ những mẫu phân của 2 bò bằng phƣơng pháp Darling.
- Thu nhận ấu trùng H. contortus, cảm nhiễm từ những mẫu phân đã nuôi cấy trứng bằng phƣơng pháp phân ly ấu trùng Baerman.
2.3.3.1. Nghiên cứu sự phát triển của trứng H. contortus trong phân bò
* Phương pháp bố trí thí nghiệm: Thí nghiệm đƣợc tiến hành 2 đợt,
đợt I vào mùa Hè, đợt II vào mùa Đông.
- Nuôi trứng H. contortus trong những mẫu phân ở phòng thí nghiệm. Mỗi mẫu để trong 1 chậu nhựa đƣờng kính 20cm, cao 10 cm. Mỗi ngày lấy 3 - 5 gam phân/mẫu, xét nghiệm bằng phƣơng pháp Fullerborn để kiểm tra sự phát triển của trứng. Mô tả sự phát triển của trứng trong quá trình theo dõi.
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc-tnu.edu.vn
- Sử dụng phƣơng pháp Baerman để phân ly ấu trùng. Ghi thời gian trứng nở thành ấu trùng, mô tả hình thái và đo kích thƣớc ấu trùng. Từ đó xác định đƣợc thời gian phát triển của trứng H. contortus trong phân thành ấu trùng cảm nhiễm.
2.3.3.2. Nghiên cứu sự phát triển của trứng và khả năng sống của ấu trùng cảm nhiễm H. contortus có sức gây bệnh trong lớp đất bề mặt có ẩm độ khác nhau
* Phương pháp bố trí thí nghiệm: Bố trí 2 đợt thí nghiệm theo dõi, đợt
I vào mùa Hè, đợt II vào mùa Đông.
- Lấy mẫu đất bề mặt (trong khoảng từ bề mặt xuống 2 - 3cm) ở khu vực xung quang chuồng nuôi và ở khu vực bãi chăn thả trâu, bò. Trộn đều 2 loại đất theo tỷ lệ 1:1, sau đó chia vào các chậu nhựa đƣờng kính 35 cm, cao 15 cm. Bổ sung nƣớc hàng ngày để duy trì ẩm độ đất ở các chậu khác nhau: dƣới 5%, 5 - 10%, 10 - 20%, 20 - 30%, 30 - 40%, trên 40%.
* Phương pháp xác định và duy trì độ ẩm đất
Xác định ẩm độ của đất trƣớc khi thí nghiệm theo tài liệu của Lê Văn Khoa và cs (1996) [12]. Độ ẩm của đất đƣợc xác định bằng cách: Lấy một lƣợng đất khoảng 20 - 30g, sấy ở 1050C cho đến khi khối lƣợng giữa các lần cân không đổi thì dừng lại và tính ẩm độ theo công thức:
Wt(%) = (a/b)x 100
Trong đó: a : lƣợng nƣớc mất sau khi sấy (g)
b : khối lƣợng đất trƣớc khi sấy (g) Wt : độ ẩm của đất (%)
Hằng ngày kiểm tra độ ẩm của đất ở các chậu bằng phƣơng pháp cảm