d. Kết luận, đề nghị và điểm:
3.2 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3.2.1 Phƣơng pháp phân tích [1, 2, 3, 4]
a. Phƣơng pháp sắc ký lỏng cao áp (HPLC)
Nguyên tắc hoạt động
Sắc ký lỏng cao áp là kỹ thuật phân tích dựa trên cơ sở của sự phân tách các chất trên một pha tĩnh chứa trong cột, nhờ dòng di chuyển của pha động lỏng dƣới áp suất cao. Sắc ký lỏng dựa trên cơ chế hấp phụ, phân bố, trao đổi ion hay loại trừ là tùy thuộc vào pha tĩnh sử dụng. Khi phân tích sắc ký các chất đƣợc hịa tan trong dung mơi thích hợp và hầu hết sự phân tích đều xảy ra ở nhiệt độ thƣờng. Chính vì thế mà các thuốc không bền với nhiệt không bị phân hủy khi sắc ký. Ngày nay sắc ký lỏng cao áp đã và đang đƣợc sử dụng trong lĩnh vực phân tích hóa học nói chung cũng nhƣ trong kiểm tra chất lƣợng thuốc và phân tích sinh dƣợc học nói riêng.
Hình 3.1 Hệ thống HPLC
- Hệ thống dung mơi đóng vai trị là pha động đƣợc trộn với nhau theo tỷ lệ thích
hợp (điều khiển bằng máy tính) và có thể thay đổi thành phần bởi hệ thống gradient.
Định tính
Nguyên tắc của phân tích định tính theo kỹ thuật HPLC là: so sánh thời gian lƣu của các pick sắc ký trong mẫu phân tích với thời gian lƣu của pic sắc ký trong mẫu chuẩn, từ đó sẽ xác định đƣợc trong mẫu phân tích có những chất nào, nếu chúng có thời gian lƣu giữ đúng nhƣ thời gian lƣu của các pick trong mẫu chuẩn.
Định lƣợng
Hai mẫu chuẩn và thử đều đƣợc tiến hành sắc ký trong cùng một điều kiện. Sử dụng phƣơng pháp so sánh tỉ lệ giữa nồng độ và diện tích pick của mẫu chuẩn và mẫu phân tích ta thiết lập cơng thức tính hàm lƣợng các chất trong mẫu phân tích.
Cơng thức tính tỉ lệ: mau chuan mau chuan S S C C Với
Cchuan: là nồng độ của chất chuẩn
Cmau: là nồng độ của chất phân tích Schuan: là diện tích pick của chất chuẩn
Smau: là diện tích pick của chất phân tích
b. Phƣơng pháp phân tích thể tích
Nguyên tắc
Phƣơng pháp phân tích thể tích là phƣơng pháp phân tích định lƣợng dựa trên sự xác định thể tích của dung dịch thuốc thử đã biết chính xác nồng độ (gọi là dung dịch chuẩn) cần dùng để phản ứng hết với chất cần xác định (gọi là chất định phân) có trong dung dịch cần phân tích. Dựa vào thể tích và nồng độ của dung dịch chuẩn đã dùng để tính ra hàm lƣợng chất cần xác định có trong dung dịch phân tích.
Để tiến hành phân tích ta làm nhƣ sau: lấy dung dịch phân tích cho vào bình nón sạch, thêm chất chỉ thị thích hợp rồi thêm từ từ dung dịch chuẩn từ buret vào dung dịch định phân, q trình đó gọi là sự chuẩn độ. Thời điểm lƣợng thuốc thử thêm vào vừa đủ tác dụng toàn bộ chất định phân gọi là điểm tƣơng đƣơng. Để nhận biết điểm tƣơng đƣơng, ngƣời ta dùng những chất gây ra sự biến đổi có thể quan sát đƣợc ở sát điểm tƣơng đƣơng nhƣ sự thay đổi màu sắc của dung dịch, sự xuất hiện kết
tủa…Những chất nhƣ vậy đƣợc gọi là chất chỉ thị. Tại thời điểm mà ta quan sát thấy sự biến đổi màu dung dịch thì ngƣng chuẩn độ, thời điểm đó gọi là điểm cuối chuẩn độ.
Ứng dụng:
Phƣơng pháp đƣợc ứng dụng để định lƣợng.
Hàm lƣợng chất cần phân tích trong mẫu đƣợc xác định dựa trên định luật đƣơng lƣợng: “khi hai chất tác dụng vừa đủ thì số đƣơng lƣợng của hai chất phải bằng nhau”. Gọi: - V1 là thể tích dung dịch mẫu phân tích
- N1 là nồng độ chất cần phân tích trong mẫu
- V là thể tích dung dịch thuốc thử đã dùng để tác dụng vừa đủ với dung dịch mẫu phân tích - N là nồng độ thuốc thử Ta có phƣơng trình: N1V1=NV 1 1 V NV N
Từ giá trị nồng độ đƣơng lƣợng N1 ta có thể chuyển sang các loại nồng độ khác tùy theo yêu cầu sử dụng.
3.2.2 Tính và đánh giá chỉ số ngấu, chỉ số hƣ thối
Tỷ số 55% toanphan formon Nito Nito % 30 formon amoniac Nito Nito Chỉ số ngấu toanphan formon Nito Nito