CHƢƠNG 2 : LƢỢC KHẢO TÀI LIỆU
2.4 GIỚI THIỆU VỀ MÁY HPLC[4]
2.4.3. Nguyên tắc của quá trình sắc ký trong cột
- Pha tĩnh là một yếu tố quan trọng quyết định bản chất của quá trình sắc ký và loại sắc ký .
- Nếu pha tĩnh là chất hấp phụ thì ta có sắc ký hấp phụ pha thuận hoặc pha đảo . - Nếu pha tĩnh là chất trao đổi ion thì ta có sắc ký trao đổi ion
- Nếu pha tĩnh là chất lỏng thì ta có sắc ký phân bố hay sắc ký chiết - Nếu pha tĩnh là gel thì ta có sắc ký gel hay rây phân tử
- Cùng với pha tĩnh để rửa giải chất phân tích ra khỏi cột, chúng ta cần có một pha động .
- Nhƣ vậy nếu chúng ta nạp mẫu phân tích gồm hỗn hợp chất phân tích A,B,C .. Vào cột phân tích, kết quả các chất A,B,C.. Sẽ đƣợc tách ra nhau sau khi đi qua cột. Quyết định hiệu quả của sự tách sắc ký ở đây là tổng hợp các tƣơng tác.
Hình 2.8 Sự tƣơng tác trong sắc ký cột
Tổng của 3 tƣơng tác này sẽ quyết định chất nào đƣợc rửa giải ra khỏi cột trƣớc tiên khi lực lƣu giữ trên cột là nhỏ nhất ( F1) .và ngƣợc lại .
Đối với mỗi chất, sự lƣu giữ đƣợc qui định bởi 3 lực F1, F2, F3. Trong đó F1 và F2
giữ vai trị quyết định. Cịn F3 là yếu tố ảnh hƣởng khơng lớn .
Ở đây F1 là lực giữ chất phân tích trên cột. F2 là lực kéo của pha động đối với chất phân tích ra khỏi cột. F3 lực tƣơng tác giữa pha động và pha tĩnh
Nhƣ vậy với các chất khác nhau thì F1 và F2 là khác nhau, kết quả là các chất khác nhau sẽ di chuyển trong cột với tốc độ khác nhau và tách ra khỏi nhau khi ra khỏi cột.
Chất phân tích A + B + C Pha động (MP) Pha tĩnh (SP) F1 F 2 F3
Hình 2.9 Phần minh họa quá trình tách các chất A và B trong cột tách sắc ký
Giải thích:
- 1: bắt đầu nạp mẫu chứa hỗn hợp (A, B) vào cột tách sắc ký
- 2, 3: ta cho pha động chạy trong cột sắc ký. Ta thấy quá trình tách hai chất A, B xảy ra trong cột.
- Giả sử : Chất A là màu hồng Chất B là màu đen
- Lúc này thì chất A bị giữ lại trên cột lâu hơn chất B. Do đó chất B sẽ ra trƣớc chất A.
- 4: chất B ra khỏi cột chỉ còn chất A - 5: chất A ra khỏi cột
- 6: quá trình tách các chất trong cột đã xong
1 2 3 4 5 6
Hỗn hợp chất A và chất B