2.4.1. Lịch sử
HPLC là chữ viết tắt của 4 chữ cái đầu bằng tiếng Anh của phƣơng pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (High Performance Liquid Chromatography), trƣớc kia gọi là phƣơng pháp sắc ký lỏng cao áp (High Pressure Liquid Chromatography).
Phƣơng pháp này ra đời từ năm 1967-1968 trên cơ sở phát triển và cải tiến từ phƣơng pháp sắc ký cột cổ điển. Hiện nay phƣơng pháp HPLC ngày càng phát triển và hiện đại hố cao nhờ sự phát triển nhanh chóng của ngành chế tạo máy phân tích. Hiện nay HPLC còn đƣợc áp dụng trong nhiều ngành kiểm nghiệm đặc biệt là ứng dụng cho ngành kiểm nghiệm thuốc. Hiện nó là cơng cụ đắc lực trong phân tích các thuốc đa thành phần, cho phép định tính và định lƣợng.
2.4.2. Khái niệm
Sắc ký lỏng hiệu năng cao là một phƣơng pháp chia tách trong đó pha động là chất lỏng và pha tĩnh chứa trong cột là chất rắn đã đƣợc phân chia dƣới dạng tiểu phân hoặc một chất lỏng phủ lên một chất mang rắn, hay một chất mang đã đƣợc biến đổi bằng liên kết hoá học với các nhóm chức hữu cơ. Q trình sắc ký lỏng dựa trên cơ chế hấp phụ, phân bố, trao đổi ion hay phân loại theo kích cỡ.
2.4.3. Nguyên tắc của quá trình sắc ký trong cột
- Pha tĩnh là một yếu tố quan trọng quyết định bản chất của quá trình sắc ký và loại sắc ký .
- Nếu pha tĩnh là chất hấp phụ thì ta có sắc ký hấp phụ pha thuận hoặc pha đảo . - Nếu pha tĩnh là chất trao đổi ion thì ta có sắc ký trao đổi ion
- Nếu pha tĩnh là chất lỏng thì ta có sắc ký phân bố hay sắc ký chiết - Nếu pha tĩnh là gel thì ta có sắc ký gel hay rây phân tử
- Cùng với pha tĩnh để rửa giải chất phân tích ra khỏi cột, chúng ta cần có một pha động .
- Nhƣ vậy nếu chúng ta nạp mẫu phân tích gồm hỗn hợp chất phân tích A,B,C .. Vào cột phân tích, kết quả các chất A,B,C.. Sẽ đƣợc tách ra nhau sau khi đi qua cột. Quyết định hiệu quả của sự tách sắc ký ở đây là tổng hợp các tƣơng tác.