Chƣơng 3 : PHƢƠNG TIỆN & PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3.3. PHƢƠNG PHÁP TIẾN HÀNH THÍ NGHIỆM
3.3.1.3. Tiến hành thí nghiệm
Bƣớc 1: cân 2 gDM mẫu thức ăn đã có cơng thức khẩu phần theo các bảng lƣợng cân các nghiệm thức ứng với từng mức độ axit tannic khi đem đi thí
nghiệm, cẩn thận không đƣợc vƣơng vảy mẫu, sau khi cân xong cho mẫu vào keo ủ tối màu.
Bƣớc 2: pha dung dịch đệm. Dung dịch đệm đƣợc sử dụng trong thí
nghiệm là theo mơ tả của Tilley and Terry (1963).
Bảng 3-6: Lƣợng cân các hóa chất có trong 1 lít dung dịch đệm
STT Hóa chất Lƣợng cân (g/lít) 1 NaHCO3 9.80 2 KCl 0.57 3 CaCl2 0.04 4 Na2HPO4.12H2O 9.30 5 NaCl 0.47 6 MgSO4.7H2O 0.12 7 Cystein 0.25
Công thức pha đƣợc trình bày trong bảng 4-12. Dung dịch sau khi pha xong đƣợc sục khí CO2 cho đến khi chuyển từ đục sang trong suốt. Chúng ta có thể làm ấm dung dịch đệm bằng cách cho thùng chứa dung dịch vào bồn ủ khoảng 15 phút, nhiệt độ nƣớc trong bồn ủ đƣợc kiểm soát ở 38ºC trƣớc khi sử dụng để tạo điều kiện nhiệt độ tốt, tránh sốc nhiệt cho vi sinh vật dạ cỏ.
Bƣớc 3: thu thập dịch dạ cỏ. Bò đƣợc cho ăn cùng một loại khẩu phần cố
định trƣớc khi lấy mẫu thơng qua lỗ dị đã đƣợc mổ trên cơ thể (hình 4-1), dịch dạ cỏ đƣợc thu thập và đƣợc giữ ấm trong thùng đá sau đó nhanh chóng chuyển lên phịng thí nghiệm. Tại đây dịch dạ cỏ đƣợc lọc qua 4 lớp vải muslin vào lọ, bơm khí CO2 rồi đậy kín tạo yếm khí và ủ ấm ở nhiệt độ 38ºC trƣớc khi dùng để thực hiện thí nghiệm. Dựa vào số lƣợng đơn vị thí nghiệm và lƣợng thực liệu khi đem ủ là bao nhiêu từ đó ta cũng tính đƣợc lƣợng dung dịch dạ cỏ cần thí nghiệm là bao nhiêu. Đối với 1 gDM thực liệu ta cần 20 ml dung dịch dạ cỏ.
Bƣớc 4: trộn dịch dạ cỏ đã lấy vào dung dịch đệm tạo hỗn hợp dung dịch
đệm và dịch dạ cỏ, khuấy đều cho lƣợng vi sinh vật trong dịch dạ cỏ phân bố đều trƣớc khi chia ra từng keo ủ. Dùng ống đong, đong 200 ml hỗn hợp dịch dạ cỏ và dung dịch đệm cho vào keo ủ đã có sẵn 2 gDM thực liệu, dùng đũa thủy tinh khuấy đều cho thực liệu thấm ƣớt hồn tồn, tránh để thực liệu dính trên thành keo ủ, dùng bình tia chứa nƣớc cất rửa thực liệu bị dính trên đũa thủy tinh vào
trong keo ủ, tránh thất thoát mẫu ảnh hƣởng đến kết quả, đậy kính nắp keo ủ, dùng đất sét làm kín xung quanh kẽ hở giữa nắp keo và miệng keo ngăn khơng cho khơng khí đi vào (hình 4-5).
Dùng ống nhựa loại 2.54mm, chiều dài 1m nối keo ủ thực liệu với bình đo thể tích khí sinh ra thơng qua 2 ru ngồi của ống đƣợc vặn kính hồn tồn vào 2 nắp của keo ủ và keo đo khí.
Dùng bơm tiêm 50 ml/cc lấy khơng khí ra khỏi hệ thống thông qua van 3 ngã đƣợc nối vào ống nhựa sao cho mực nƣớc trong bình tia khi đó dâng lên ở mức 100 ml, ngƣng lấy khơng khí, khóa van ngăn khơng cho khơng khí đi vào và đảm bảo khí lƣu thơng đƣợc giữa keo ủ và bình đo thể tích khí.
Sắp xếp tất cả các keo ủ thực liệu vào khung inox cho vào bồn ủ, nhiệt độ ủ ở 38ºC, tiến hành ủ và theo dõi lƣợng khí sinh ra tƣơng ứng với mực nƣớc hạ xuống trong bình tia sau 24 giờ.
Hình 3-5: Làm kín keo ủ bằng đất sét
Hình 3-6: Lấy khí từ E103.1 Hình 3-7: Xếp keo ủ vào khung