Chương 2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.3. Phương pháp nghiên cứu
2.3.2.1. Chuẩn bị môi trường Hanks
Mơi trường được chọn để ni cá trong thí nghiệm này là mơi trường Hanks, với những nguyên nhân sau:
(1) nếu sử dụng nước máy: khó kiểm sốt được thành phần các chất có trong nước máy, độ pH không đồng nhất, ngay cả khi đã được sục khí để khử clo. Điều này gây ảnh hưởng đến kết quả phân tích.
(2) nếu sử dụng nước cất: trong nước cất, hầu như chỉ có một thành phần duy nhất là “nước”. Trong khi đó, cá chỉ sinh trưởng tốt khi mơi trường sống có một số ion nhất định. Trong trường hợp bổ sung muối biển vào nước cất để nuôi cá cũng khơng kiểm sốt được các thơng số và thành phần trong môi trường.
(3) môi trường Hanks được xây dựng dựa trên những nhu cầu thiết yếu nhất của cá (hay động vật nói chung); tạo mơi trường có thành phần các ion, khoáng chất, độ pH phù hợp để cá sinh trưởng và phát triển.
Có thể pha môi trường Hanks một cách nhanh chóng từ những dung dịch Stock đã chuẩn bị trước.
Chuẩn bị dung dịch Stock
o Dung dịch Hanks Stock
Các dung dịch Hanks Stock được pha sẵn (công thức: xem phụ lục 1) và bảo quản trong lọ nhỏ bằng thủy tinh để hạn chế biến tính hóa chất và tiện sử dụng.
32
Hình 2.10. Các lọ dung dịch Stock
Dung dịch Stock #1, #2, #4, #5 có thể bảo quản nhiệt độ phòng trong 2 - 3 tuần, bảo quản trong nhiệt độ lạnh (tủ lạnh) trong vài tháng. Riêng Stock #6 có thành phần là NaHCO3 (sodium bicarbonate) không thể bảo quản lâu. Để Stock #6 giữ được đặc tính của nó, ta nên pha nó ngay khi cần sử dụng hoặc không để lâu quá một tuần.
o Dung dịch Stock chì
Để thuận tiện cho việc pha mơi trường nhiễm chì với các nồng độ khác nhau, ta chuẩn bị sẵn các Stock chì.
Stock chì được pha từ Pb(NO3)2 (tinh thể); ta có thể phân biệt thành Stock A - Stock mẹ; và Stock B - Stock con.
Stock A (1g Pb/ 1L dd) : pha 0,15985g Pb(NO3)2 vào 100 mL nước cất (công thức: xem phụ lục 1).
Stock B (Stock A pha loãng 100 lần): hút lấy 1 mL Stock A pha với 99 mL nước cất.
Pha môi trường
33
- 10 mL Final Hanks (xem phụ lục 1) - 90 mL nước cất.
Sau khi đã pha xong môi trường Hanks, tiến hành chuẩn độ pH để tạo điều kiện sống tốt cho cá. cá Ngựa vằn thích hợp với pH khoảng 7,2.
Dụng cụ chuẩn độ là máy đo pH, pipetman. Dung dịch chuẩn độ là HCl và NaOH (xem phần 2.2.)
Thí nghiệm tiến hành trên các nồng độ (khối lượng chì/ thể tích mơi trường) như sau: 0 μg/L, 20 μg/L, 40 μg/L, 60 μg/L, 80 μg/L.
Bảng 2.4. Công thức pha môi trường ni cá với các nồng độ chì khảo sát NỒNG ĐỘ NỒNG ĐỘ
mPb/Vdd (µg/L)
CƠNG THỨC CHO 1L MÔI TRƯỜNG NUÔI CÁ
0 1 l môi trường Hanks
20 2 mL Stock B + 998 mL môi trường Hanks 40 4 mL Stock B + 996 mL môi trường Hanks 60 6 mL Stock B + 994 mL môi trường Hanks 80 8 mL Stock B + 992 mL môi trường Hanks