như sau: 0 μg/L, 20 μg/L, 40 μg/L, 60 μg/L, 80 μg/L.
Bảng 2.4. Công thức pha môi trường ni cá với các nồng độ chì khảo sát NỒNG ĐỘ NỒNG ĐỘ
mPb/Vdd (µg/L)
CƠNG THỨC CHO 1L MƠI TRƯỜNG NI CÁ
0 1 l mơi trường Hanks
20 2 mL Stock B + 998 mL môi trường Hanks 40 4 mL Stock B + 996 mL môi trường Hanks 60 6 mL Stock B + 994 mL môi trường Hanks 80 8 mL Stock B + 992 mL môi trường Hanks
2.3.2.2. Chuẩn bị bể ni
Bố trí bể ni
Bể ni cá là bể thủy tinh chun dụng có kích thước 17cm x 18cm x 29cm, để tránh lãng phí, mỗi bể sẽ chứa khoảng 2 lít mơi trường Hanks. Pha Stock B của chì vào từng bể ni (đã có sẵn mơi trường Hanks) theo công thức bảng 2.4.
Để tạo nơi ẩn nấp cho cá, ta bỏ thêm rong vào bể ni. Ngồi ra, nhờ q trình quang hợp, rong cịn cung cấp thêm O2 cho môi trường sống của cá. Sử dụng máy sục khí cho mơi trường ni cá. Khi cá cịn nhỏ, nên sục khí ở mức nhẹ, tránh làm cá bị sốc do môi trường dao động liên tục (trên máy sục, có nút điều chỉnh hai cấp độ sục mạnh và yếu).
34
Các bể nuôi được đặt trong điều kiện ánh sáng đầy đủ. Khơng có sự chênh lệch về nhiệt độ, ánh sáng giữa các bể. Bên ngồi bể có dán nhãn ghi rõ các thơng số cần thiết (ngày thu phơi, nồng độ chì trong mơi trường).
Hình 2.11. Bố trí bể ni cá
Chuyển cá bột sang môi trường mới
Nguồn cung cấp cá là cá đã được nhiễm chì các nồng độ tương ứng từ giai đoạn phơi. Số cá này đạt 7 ngày tuổi tính từ sau ngày thu phôi.
Trong giai đoạn 7 ngày tuổi, cá bột còn tương đối khỏe mạnh. Mặc khác, để hạn chế sự xáo trộn môi trường nhiều lần dễ gây ảnh hưởng đến cá, ta tiến hành chuyển cá từ môi trường Hanks phôi (từ sau khi thu phôi cho đến 7 ngày tuổi, cá được giữ trong môi trường Hanks phôi) sang môi trường Hanks theo cách sau:
Bước 1: Chuẩn bị sẵn bể ni cá cùng hệ thống sục khí, mơi trường Hanks với các nồng độ tương ứng.
Bước 2: Rút bỏ môi trường Hanks phôi
- Trong tuần tuổi đầu tiên, cá bột được nuôi trong môi trường Hanks phơi, giữ trong các cốc becher (dung tích 1 lít).
35
- Dùng ống nhựa, mềm đường kính bên trong là 3 mm để rút bỏ từ từ môi trường Hanks phôi khỏi becher. Lưu ý: giữ lại một lượng môi trường trong becher cho cá bột.
Bước 3: Dùng tay cầm cả becher (trong đó có cá bột và một lượng môi trường Hanks phơi) để chuyển tồn bộ cá và mơi trường còn lại vào bể lớn.
2.3.3. Phương pháp nuôi cá
Để tạo điều kiện sống tốt nhất cho cá, trong q trình chăm sóc, cần chú ý những yêu cầu sau:
Thay nước:
Tiến hành thay nước cho bể cá hàng tuần. Đôi khi trong bể xuất hiện những chấm màu trắng, hay màu nước đục bất thường (trong bể ni cá thường có màu vàng nhạt do rong và những chất bẩn cho cá bài tiết); cần thay nước thường xuyên hơn (2 - 3 ngày) do có thể bể nước bị nhiễm khuẩn.
Cách thay nước:
Bước 1: Pha sẵn môi trường Hanks vào các becher 1 lít. Chuẩn độ pH bằng dung dịch chuẩn HCl và NaOH, đưa về giá trị 7,2.
Bước 2: Cho đầy nước vào ống nhựa. Một đầu ống tiếp xúc với môi trường nước trong bể. Đầu còn lại đặt vào cốc chứa nước bẩn, đặt thấp hơn so với mực nước trong bể. Nước trong bể sẽ được dẫn vào cốc chứa nước bẩn, nhờ vào lực mao dẫn và thế năng.
Bước 3: Di chuyển nhẹ nhàng đầu ống để hút sạch vụn bã do rong phân hủy, phân cá, thức ăn thừa hay các sinh vật lạ trong bể. Chú ý tránh gây ảnh hưởng đến cá.
Bước 4: Sau khi đã hút sạch chất bẩn và nước giảm khoảng 1/3 so với lượng nước ban đầu, tiến hành dẫn môi trường Hanks (đã pha sẵn, nồng độ chì tương ứng)
36
vào bể theo nguyên tắc mao dẫn. Lúc này, cốc đựng môi trường Hanks đặt cao hơn so với bể.
Cho ăn:
Cho cá ăn 2 - 3 lần/ ngày. Lượng thức ăn vừa phải, đảm bảo cá ăn hết trong vòng 5 phút để tránh gây nhiễm bẩn môi trường do thức ăn thừa.
2.3.4. Phương pháp theo dõi sinh trưởng của cá, thu mẫu và tách mẫu cá
2.3.4.1. Theo dõi sinh trưởng của cá
- Theo dõi khả năng sống của cá: thống kê tỉ lệ sống chết của cá trong từng bể, khoảng cách giữa các lần thống kê là 1 tuần.
- Theo dõi sự phát triển chiều dài của cá: Khoảng cách giữa các lần đo là 1 tuần.
2.3.4.2. Thu mẫu và tách mẫu cá
Sau khi cá đã đạt kích thước nhất định, tiến hành thu mẫu và tách mẫu cá. Các bước tiến hành như sau:
Chuẩn bị:
Chuẩn bị bộ dùng cụ mổ: dao, kéo, kẹp sạch.
Chuẩn bị eppendorf, ghi nhãn cho từng eppendorf (số thứ tự, ngày, lô, mẫu).
Cân khối lượng ban đầu của từng eppendorf.
Tiến hành:
Bước 1: Vớt cá.
Bước 2: Dùng giấy thấm thấm sạch nước bên ngoài cá. Đo các chỉ tiêu về chiều dài và cân nặng của từng con (hình 2.12).
37
Bước 3: Dùng kéo và kẹp, tách đầu cá
Bước 4: Dùng kéo, cắt dọc cơ phần bụng cá, tách nội tạng.
Bước 5: Dùng dao giải phẫu, kẹp tách riêng phần cơ và xương cá (hình 2.13). Bước 6: Đầu và xương đặt vào eppendorf thứ nhất, nội tạng đặt vào eppendorf thứ hai, cơ đặt vào eppendorf thứ ba.
Bước 7: Cân lại khối lượng của từng eppendorf.
A B
Hình 2.12. Đo các chỉ tiêu chiều dài (hình A) và cân nặng (hình B) của cá Ngựa vằn
38
Sau khi tách mẫu, tiến hành gửi mẫu cá đến Công ty Cổ phần Dịch vụ Khoa học công nghệ Sắc ký Hải Đăng, số 79 Trương Định, Quận 1, Tp. Hồ Chí Minh để phân tích nồng độ chì tích lũy trong từng phần: cơ, xương - đầu, nội quan.
2.3.5. Phương pháp phân tích và xử lý số liệu
Phần mềm xử lý số liệu: Excel - Microsoft Office 2010; Sigma Plot 11.0 Phương pháp xử lý số liệu:
- Phương pháp phân tích phương sai một nhân tố: ANOVA - One Way. - Phương pháp kiểm tra mức độ tương quan và vẽ tuyến tính.
- Phương pháp kiểm tra các nhóm dữ kiện: Tukey và Holm - Sidak.
Phương pháp kiểm tra Tukey: Phương pháp này được sử dụng cho tất cả các so sánh giá trị trung bình của các cặp trong nhóm.
Phương pháp Holm - Sidak: Phương pháp kiểm tra này có thể sử dụng được cho cả trường hợp so sánh giữa các cặp và so sánh với nhóm đối chứng (ĐC). Nó mạnh hơn so với các phương pháp kiểm tra khác (ví dụ như Tukey và Boferroni) và được khuyến cáo sử dụng cho các phép kiểm tra so sánh nhiều nhóm (nguồn: Sigma Plot).
39
Chương 3. KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN
3.1. TỈ LỆ SỐNG CỦA CÁ NGỰA VẰN Ở CÁC NỒNG ĐỘ KHÁC NHAU
Sau khi nhận cá bột đã nhiễm chì ở giai đoạn phơi, tiến hành theo dõi tỉ lệ cá sống sau từng tuần và thu được kết quả ở bảng 3.1.