hoạt tính enzyme amylase được tổng hợp bởi Asp .oryzae
3.3.3 Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng của nguồn khoáng bổ sung riêng lẻ đến hoạt
tính enzyme amylase được tổng hợp bởi Asp.oryzae
Mục đích: Xác định loại nguồn khống và hàm lượng thích hợp cho việc sinh tổng
hợp enzyme amylase bởi Asp.oryzae
Bố trí thí nghiệm
Nhân tố G: Hàm lượng KCl bổ sung, %
G1: KCl 0,1 G2: KCl 0,3 G3: KCl 0,5 G4: KCl 0,7 Nhân tố H: Hàm lượng CaCl2 bổ sung, %
H1: CaCl2 0,1 H2: CaCl2 0,3 H3: CaCl2 0,5 H4: CaCl2 0,7 Môi trường nuôi cấy (cám, trấu,loại đường và hàm lượng ở thí nghiệm 1)
Bổ sung nguồn nitơ
Hấp tiệt trùng
Làm nguội
Cấy vi sinh vật
Thu nhận enzyme
Đo hoạt tính enzyme amylase
D1 D2… E1 E2 … F4
Nhân tố I: Hàm lượng MgSO4.7H2O bổ sung, %
I1: MgSO4.7H2O 0,1 I2: MgSO4.7H2O 0,3 I3: MgSO4.7H2O 0,5 I4: MgSO4.7H2O 0,7
Số nghiệm thức = 4 + 4 + 4 +1 (mẫu đối chứng khơng bổ sung nguồn khống) Tổng số đơn vị thí nghiệm = 13 x 3 = 39 (đvtn)
Tiến hành thí nghiệm: Nguyên liệu được phối trộn với tỷ lệ 75% cám, 25% trấu, loại
đường và hàm lượng xác định ở thí nghiệm 1, trên cơ sở mỗi mẫu là 20 gam. Sau khi điểu chỉnh độ ẩm 5 và pH 5, môi trường được hấp tiệt trùng (121oC, 20-30 phút) và làm nguội (30-40oC), tiến hành cấy giống ở điều kiện vô trùng rồi đem ủ (30oC trong 50 giờ). Sau đó thêm 100ml nước cất đã được giữ lạnh tiến hành xay nhuyễn để trích ly dịch enzyme thơ.
Sơ đồ bố trí thí nghiệm
Hình 4. Sơ đồ bố trí thí nghiệm 3
Môi trường nuôi cấy (cám, trấu,loại đường và hàm lượng ở thí nghiệm 1)
Bổ sung muối khoáng
G1 G2… H1 H2 … I4
Hấp tiệt trùng
Làm nguội
Cấy vi sinh vật
Thu nhận enzyme
Đo hoạt tính enzyme amylase
Thu nhận kết quả
- Xác định được hoạt tính enzyme amylase (U/ml)
- Xác định loại nguồn khoáng khống và hàm lượng thích hợp cho sinh tổng hợp amylase hoạt tính cao, làm cơ sở cho thí nghiệm 4.