Thu nhận kết quả
- Xác định được hoạt tính enzyme amylase (U/ml)
- Xác định loại nguồn nitơ vơ cơ và hàm lượng thích hợp cho sinh tổng hợp amylase hoạt tính cao, làm cơ sở cho thí nghiệm 4.
3.3.3 Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng của nguồn khoáng bổ sung riêng lẻ đến hoạt
tính enzyme amylase được tổng hợp bởi Asp.oryzae
Mục đích: Xác định loại nguồn khống và hàm lượng thích hợp cho việc sinh tổng
hợp enzyme amylase bởi Asp.oryzae
Bố trí thí nghiệm
Nhân tố G: Hàm lượng KCl bổ sung, %
G1: KCl 0,1 G2: KCl 0,3 G3: KCl 0,5 G4: KCl 0,7 Nhân tố H: Hàm lượng CaCl2 bổ sung, %
H1: CaCl2 0,1 H2: CaCl2 0,3 H3: CaCl2 0,5 H4: CaCl2 0,7 Môi trường nuôi cấy (cám, trấu,loại đường và hàm lượng ở thí nghiệm 1)
Bổ sung nguồn nitơ
Hấp tiệt trùng
Làm nguội
Cấy vi sinh vật
Thu nhận enzyme
Đo hoạt tính enzyme amylase
D1 D2… E1 E2 … F4
Nhân tố I: Hàm lượng MgSO4.7H2O bổ sung, %
I1: MgSO4.7H2O 0,1 I2: MgSO4.7H2O 0,3 I3: MgSO4.7H2O 0,5 I4: MgSO4.7H2O 0,7
Số nghiệm thức = 4 + 4 + 4 +1 (mẫu đối chứng khơng bổ sung nguồn khống) Tổng số đơn vị thí nghiệm = 13 x 3 = 39 (đvtn)
Tiến hành thí nghiệm: Nguyên liệu được phối trộn với tỷ lệ 75% cám, 25% trấu, loại
đường và hàm lượng xác định ở thí nghiệm 1, trên cơ sở mỗi mẫu là 20 gam. Sau khi điểu chỉnh độ ẩm 5 và pH 5, môi trường được hấp tiệt trùng (121oC, 20-30 phút) và làm nguội (30-40oC), tiến hành cấy giống ở điều kiện vô trùng rồi đem ủ (30oC trong 50 giờ). Sau đó thêm 100ml nước cất đã được giữ lạnh tiến hành xay nhuyễn để trích ly dịch enzyme thơ.
Sơ đồ bố trí thí nghiệm