hoạt tính enzyme amylase được tổng hợp bởi Asp .oryzae
3.2.4 Thí nghiệm 4: Khảo sát ảnh hưởng của việc bổ sung kết hợp nguồn nitơ và khoáng
khoáng đến khả năng sinh tổng hợp enzyme amylase
Mục đích: Xác định được tỷ lệ kết hợp nguồn nitơ và khống cho q trình sinh tổng
hợp enzyme amylase của Asp. oryzae.
Bố trí thí nghiệm
Nhân tố J: Hàm lượng nitơ (nguồn nitơ xác định ở thí nghiệm 2), %
Nhân tố K: Hàm lượng muối khoáng (nguồn khống xác định ở thí nghiệm 3), %
Bảng 7. Bố trí nghiệm thức thí nghiệm 4 Nhân tố J Nhân tố J Nhân tố K J1 J2 J3 J4 K1 J1K1 J2K1 J3K1 J4K1 K2 J1K2 J2K2 J3K2 J4K2 K3 J1K3 J2K3 J3K3 J4K3 K4 J1K4 J2K4 J3K4 J4K4
Số đơn vị thí nghiệm = 4 x 4 + 1 (mẫu đối chứng không bổ sung kết hợp nguồn khoáng và nitơ)
Tổng số đơn vị thí nghiệm = 17 x 3 = 51 (đvtn)
Tiến hành thí nghiệm: Nguyên liệu được phối trộn với tỷ lệ 75% cám, 25% trấu, loại
đường và hàm lượng ở thí nghiệm 1, trên cơ sở mỗi mẫu là 20 gam. Sau khi điểu chỉnh độ ẩm 55% và pH 5, môi trường được hấp tiệt trùng (121oC, 20-30 phút) và làm nguội (30-40oC) tiến hành bổ sung nguồn nitơ và khoáng kết hợp như bố trí trên và cấy giống ở điều kiện vơ trùng rồi đem ủ ở 30oC trong 50 giờ. Thêm 100 ml nước cất đã được giữ lạnh tiến hành xay nhuyễn để trích ly enzyme thơ.
Sơ đồ bố trí thí nghiệm
Hình 5. Sơ đồ bố trí thí nghiệm 4
Thu nhận kết quả
- Xác định được hoạt tính enzyme amylase (U/ml)
- Xác định hàm lượng kết hợp nguồn nitơ và khống thích hợp cho sinh tổng hợp amylase hoạt tính cao.
Đo hoạt tính enzyme amylase
J4K4 Môi trường nuôi cấy (cám, trấu, loại đường và hàm lượng ở thí nghiệm 1)
Bổ sung kết hợp nguồn nitơ và nguồn khoáng
J1K1 J1K2 …J1K4 J2K1… Hấp tiệt trùng Làm nguội Cấy vi sinh vật Thu nhận enzyme Asp.oryzae
Hình 6. Một số mẫu nấm mốc ni cấy trong các thí nghiệm C2 (Lactose 5%)
E2 (NH4NO3 0,3%)