Chương 1 : TỔNG QUAN TÀI LIỆU
1.3. Anti – Mullerian Hormone (AMH)
1.3.3. Cỏc loại xột nghiệm AMH
1.3.3.1. Xột nghiệm DSL, IOT
Xột nghiệm AMH được bỏo cỏo đầu tiờn vào những năm 1990 [87], được cải tiến độ nhạy và bỏn ra thị trường qua cụng ty Berman Couter với tờn gọi là IOT (Immunoassays) với ngưỡng phỏt hiện là 0,14ng/ml. Cựng lỳc này, một xột nghiệm định lượng AMH khỏc cũng được phỏt triển và đưa vào sử dụng qua cụng ty Diagnostic Systems Lab (DSL) với ngưỡng phỏt hiện là 6,3pmol/l (hệ số qui đổi: 1ng/ml = 7,14pmol/l) [88],[89]. Cỏc xột nghiệm này khỏc nhau chủ yếu ở cỏc loại khỏng thể nhận dạng phõn tử AMH trong huyết thanh, do đú giỏ trị định lượng được khỏc nhau nhiều, và phần lớn cỏc nghiờn cứu cho thấy giỏ trị AMH định lượng theo hệ thống IOT cao hơn DSL [90].
1.3.3.2. Xột nghiệm AMH Gen II
Do cũn cú nhiều hạn chế về độ nhạy, giỏ trị AMH khụng tương đương nhau giữa DSL và IOT, năm 2010, cụng ty Beckman Coulter đó hợp nhất 2 loại xột nghiệm này thành hệ thống AMH Gen II Elisa sử dụng DSL Gen I antibody với tiờu chuẩn IOT [88] và đạt được độ nhạy là 0,08ng/ml [91].
So sỏnh giỏ trị AMH được thực hiện bằng xột nghiệm AMH Gen II với giỏ trị AMH được thực hiện bằng IOT, DSL, cỏc nghiờn cứu [88],[92] chỉ ra rằng cú mối tương quan tốt giữa 3 loại xột nghiệm này, tuy nhiờn Raymond (2012) [92] cho thấy nồng độ AMH thực hiện bằng AMH Gen II cao hơn thực hiện bằng IOT khoảng 38% và cao hơn thực hiện bằng DSL khoảng 33%.
Từ 2010, AMH Gen II được sử dụng rộng rói trong nghiờn cứu và thực tế lõm sàng. Tuy nhiờn, nhiều nghiờn cứu cho thấy, kết quả định lượng AMH bằng AMH Gen II khụng ổn định và đó chỉ ra một số nguyờn nhõn: (1) tương tỏc của bổ thể trong quỏ trỡnh xột nghiệm, (2) kết quả AMH thực hiện trong mỏu toàn phần kộm ổn định so với trong huyết thanh, (3) điều kiện lưu mẫu xột nghiệm cú tỏc động tới kết quả xột nghiệm do bổ thể bị suy biến trong quỏ trỡnh lưu mẫu [93],[94]. Từ đú, qui trỡnh bảo quản đó được điều chỉnh và khuyến cỏo nhằm giảm sai số của xột nghiệm AMH Gen II, gồm: (1) mẫu mỏu phải được tỏch huyết thanh và thực hiện trong vũng 8h khi để ở nhiệt độ phũng, (2) nếu khụng được thực hiện ngay thỡ mẫu huyết thanh phải được trữ lạnh ở nhiệt độ từ -200C đến -800C trong khụng quỏ 7 ngày, (3) qui trỡnh xột nghiệm cần pha thuốc thử với mẫu huyết thanh trước khi cho tiếp xỳc với khỏng thể nhận dạng [89].
1.3.3.3 Xột nghiệm Ansh Labs Ultra – Sensitive AMH và Pico AMH
Mặc dự đó được cải thiện qui trỡnh để hạn chế sai số, tuy nhiờn việc đỏp ứng những điều kiện bảo quản mẫu và qui trỡnh thực hiện AMH Gen II làm
cho tớnh khả thi và thực hiện của xột nghiệm thấp, cụng ty Ansh Labs đưa ra 2 loại xột nghiệm mới cho nghiờn cứu và thực hiện lõm sàng là Ansh Labs Ultra – Sensitive AMH (ỏp dụng khi ước lượng AMH nằm trong ranh giới chuẩn, ước khoảng 1 – 62 pmol/l) và Pico AMH sử dụng cho cỏc mẫu cú nồng độ AMH thấp (khoảng 0,05 – 5pmol/l) [93].
Một đặc điểm nổi bật của hệ thống xột nghiệm này là sử dụng AMH protein người tỏi tổ hợp cú thể giỳp xột nghiệm ổn định theo thời gian. Kết quả nghiờn cứu của Welsh và cộng sự năm 2014 [93] so sỏnh AMH Gen II và Ansh Labs cho thấy: cú độ tương quan mạnh giỏ trị AMH giữa 2 hệ thống xột nghiệm này nhưng giỏ trị AMH theo Ansh Labs Ultra – Sensitive AMH cao hơn khoảng 40% so với AMH Gen II và Pico AMH rất cú giỏ trị, là xột nghiệm siờu nhạy khi nồng độ AMH ở ngưỡng rất thấp [93].
1.3.3.4. Xột nghiệm AMH tự động hoàn toàn Elecsys và Access 2
Mặc dự cỏc cụng ty khụng ngừng nghiờn cứu và đưa ra cỏc loại xột nghiệm tốt nhất nhằm giảm thiểu sai số, ngưỡng phỏt hiện thấp, tuy nhiờn vẫn chưa cú những tiờu chuẩn và kỹ thuật chung giữa cỏc phương phỏp xột nghiệm, dẫn đến sự hoài nghi về kết quả và nồng độ AMH [90]. AMH Gen II là xột nghiệm đang sử dụng rộng rói nhất và đến Ansh Labs cho độ nhạy rất cao, dự đó được hiệu chỉnh để tăng độ chớnh xỏc và hạn chế sai số nhưng đõy vẫn là cỏc xột nghiệm làm bằng tay nờn khụng thể trỏnh được những sai số do con người làm [94].
Từ thỏng 9 năm 2014, 2 loại xột nghiệm tự động hoàn toàn định lượng AMH được đưa vào nghiờn cứu và sử dụng cú tờn là Access 2 IA AMH (cụng ty Beckman Coulter) và Elecsys AMH (cụng ty Roche). Cả 2 xột nghiệm này đều sử dụng khỏng thể như AMH Gen II, tuy nhiờn việc gắn kết và phỏt tớn hiệu của khỏng thể nhận dạng đều xảy ra trong dung dịch mà khụng gắn kết với bổ thể nờn trỏnh được cỏc khiếm khuyết của AMH Gen II [96],[97].
- Tớnh ưu việt của Access 2 được Beckman Coulter thụng bỏo [98]: + Kết quả thống nhất và chuẩn húa với AMH Gen II thụng qua việc sử dụng cỏc khỏng thể giống hệt nhau và bộ định chuẩn.
+ Nõng cao khả năng đỏnh giỏ chức năng sinh sản thụng qua việc tăng độ nhạy và độ chớnh xỏc vào giới hạn thấp của dải xột nghiệm.
+ Cải thiện tớnh chớnh xỏc từ bộ định chuẩn với AMH người tỏi tổ hợp. + Tốc độ và sự linh hoạt thụng qua cỏc thiết bị hoàn toàn tự động. + Tăng tớnh ổn định từ cỏc bộ định chuẩn đụng khụ.
- Tớnh ưu việt và giỏ trị của Elecsys được Emma đưa ra trong một tổng quan về Elecsys [99]:
+ Phương phỏp xột nghiệm hoàn toàn tự động để đo nồng độ AMH trong huyết thanh và plasma.
+ Thời gian xột nghiệm ngắn.
+ Độ nhạy và độ chớnh xỏc cao với dải đo rộng.
+ Cú mối tương quan tốt với cỏc xột nghiệm AMH làm bằng tay và AFC + Cung cấp một phương phỏp tốt đỏnh giỏ khả năng sinh sản cho phụ nữ. - Kể từ khi đưa vào ứng dụng, đó cú nhiều nghiờn cứu so sỏnh giỏ trị của AMH được làm bằng 2 hệ thống xột nghiệm tự động hoàn toàn và AMH Gen II, cỏc nghiờn cứu ghi nhận giỏ trị định lượng bằng xột nghiệm tự động Elecsys cú tương quan thuận và mạnh với AMH Gen II [90],[100] nhưng thấp hơn 24 – 28% [90]. Nghiờn cứu của Nelson và cộng sự (2015) so sỏnh nồng độ AMH cú được từ cỏc hệ thống Access 2, Elecsys và AMH Gen II chỉ ra rằng, cú sự tương quan chặt chẽ giữa nồng độ AMH xột nghiệm bằng Access2 và Elecsys nhưng thấp hơn xột nghiệm bằng AMH Gen II khoảng 22% [101].
Như vậy cho đến nay cú nhiều phương phỏp định lượng AMH đó được sử dụng và nghiờn cứu, Iliodrimiti (2014) đó đưa ra bảng túm tắt đặc điểm cỏc loại xột nghiệm đang được sử dụng và nghiờn cứu như sau: (Bảng 1.4) [89].
Bảng 1.4: Đặc điểm cỏc loại xột nghiệm AMH [89]. Immunotech Immunotech AMH (Beckman Coulter, 2012) AMH Gen II (Beckman Coulter, 2010, 2013) AnshLabs Ultrasensitive AMH (AnshLabs, 2014) AnshLabs pico AMH (AnshLabs, 2014) Elecsys AMH (Roche, 2014) Access2 IA AMH (Beckman Coulter, 2014)
Loại XN Bằng tay Bằng tay Bằng tay Bằng tay Tự động Tự động
Mức Sai số < 14% < 8% <6% <6% 1,8-2% 2,87-4,34%
Mẫu sử dụng Huyết thanh
Huyết tương Huyết thanh Huyết tương Huyết thanh Huyết tương Huyết thanh Huyết tương Huyết thanh Huyết tương Li-heparin Huyết thanh Huyết tương Li-heparin Thể tớch mẫu tối thiểu 25àl 20 àl 50 àl 100 àl 50 àl 20 àl Thời gian ủ mẫu 3h <3h 2,5h 4,5h 18phỳt 39phỳt Ngưỡng phỏt hiện 0,14ng/ml 0,08ng/ml 0,023ng/ml 0,0012ng/ml 0,01ng/m1 < 0,02ng/ml Ngưỡng định lượng 0,35ng/ml 0,16ng/ml 0,06ng/ml 0,0039ng/ml 0,03ng/ml <0,08ng/ml Khoảng đo lường 0,42 – 21,0 ng/ml 0,16-22,5 ng/ml 0,16-11,6 ng/ml 0,003-0,75 ng/ml 0,01-23 ng/ml 0,02-24 ng/ml