Tỡnh trạng đục giỏc mạc Số mắt Tỷ lệ (%)
Trong 43 29,4
Đục nhẹ 56 38,4
Đục trắng 47 32,2
Tổng 146 100
Ở 146 mắt nghiờn cứu đường kớnh ngang giỏc mạc trung bỡnh là 13,06±0,85mm, lớn nhất là 16,0mm và nhỏ nhất là 11,5mm. Đường kớnh dọc giỏc mạc trung bỡnh là 12,20±0,82mm, lớn nhất là 15,0mm và nhỏ nhất là 11,0mm.
Chỉ cú 15 mắt cú vết Habb’s (10,3%) và 131 mắt khụng cú vết Habb’s (89,7%).
Tiền phũng: soi gúc tiền phũng được thực hiện ở 20/43 mắt cú giỏc mạc trong (46,5%) thấy toàn bộ cỏc mắt quan sỏt được đều thấy tiền phũng sõu, chõn mống mắt bỏm cao và khụng quan sỏt được cỏc thành phần của gúc. 56 mắt giỏc mạc đục lờ quan sỏt thấy tiền phũng sõu nhưng khụng soi rừ gúc tiền phũng.
Đĩa thị: nghiờn cứu quan sỏt được tỡnh trạng đĩa thị của 61/146 mắt bị bệnh
(39,7%), mức độ lừm đĩa trung bỡnh là 0,72±0,21 (0,2 - 0,9).
3.2. Kết quả xỏc định đột biến gen CYP1B1 và mối liờn quan với lõm sàng
3.2.1. Kết quả tỏch chiết DNA
DNA của cỏc bệnh nhõn, cựng cỏc đối chứng nam và nữ được tỏch chiết theo quy trỡnh phenol/chloroform. Sau khi tỏch chiết, cỏc mẫu DNA được kiểm tra nồng độ và độ tinh sạch bằng phương phỏp đo mật độ quang trờn mỏy Nano-drop.
Kết quả cho thấy, tất cả cỏc mẫu DNA đều cú độ tinh sạch cao với tỷ số mật độ quang ở bước súng 260/280nm nằm trong khoảng 1,7–2,0 và nồng độ mẫu tỏch chiết đạt từ 101,0–233,2ng/àL khi đo trờn mỏy Nanodrop ở bước súng 260/280. Như vậy, những mẫu DNA được tỏch chiết đều đảm bảo chất lượng, đủ điều kiện cho cỏc thớ nghiệm tiếp theo (Phụ lục 5).
3.2.2. Kết quả xỏc định đột biến gen CYP1B1 bằng kỹ thuật giải trỡnh tự
3.2.2.1. Kết quả PCR
Kết quả khuếch đại gen CYP1B1
Sử dụng cặp mồi đặc hiệu cho gen CYP1B1 để khuếch đại DNA sau tỏch chiết từ mẫu mỏu của bệnh nhõn.
MK (+) 1 2 3 4 5 (-)
449 bp
A) MK (+) 1 2 3 4 (-)
885 bp
B)
Hỡnh 3.1. Sản phẩm PCR exon 2 (A), exon 3 (B) của gen CYP1B1 (+) mẫu đối chứng dương, (-) mẫu đối chứng õm,
Sản phẩm PCR thu được chỉ cú 1 băng đặc hiệu, rừ nột, khụng cú sản phẩm phụ đảm bảo cho phản ứng giải trỡnh tự tiếp theo phỏt hiện đột biến điểm.
3.2.2.2. Phõn bố đột biến điểm gen CYP1B1
Nghiờn cứu bằng kỹ thuật giải trỡnh tự toàn bộ chiều dài gen CYP1B1 đó phỏt hiện được 17 bệnh nhõn mang đột biến điểm, với 12 vị trớ đột biến khỏc nhau trờn DNA.
Phõn bố 12 đột biến điểm trờn gen như sau: đột biến điểm được tỡm thấy chủ yếu trờn exon 2 với 11/12 đột biến chiếm tỷ lệ 91,7%. Cú 1 đột biến trờn exon 3 chiếm tỷ lệ 8,3%.
Cú 12 đột biến vị trớ điểm được phỏt hiện trong tổng số 18 bệnh nhõn khụng cú quan hệ huyết thống mang đột biến với 25 allen. Trong đú đột biến sai nghĩa p.E229K chiếm tỷ lệ allen cao nhất với 6/24 trường hợp (25%), sau đú đột biến p.Q86K 4/24 trường hợp (16,7%). Đột biến p.Q159X tạo mó kết thỳc sớm và p.D218H được tỡm thấy ở 3/24 trường hợp (12,5%). Cỏc đột biến cũn lại chỉ được tỡm thấy ở 1 trường hợp.
3.2.2.3. Cỏc đột biến điểm trờn gen CYP1B1
Trong số cỏc đột biến điểm cú 3 đột biến gen CYP1B1 đó được cụng bố gõy bệnh trờn ngõn hàng dữ liệu GeneBank là p.G61E, p.V198I, p.E229K, 9 đột biến điểm mới được phỏt hiện là p.Q86K, p.Q159X, p.Q164X, p.D218H, p.L191Sfs*4, p.A133T, p.L27Q, p.D242N, p.G365E. Tất cả cỏc đột biến mới này khụng tỡm thấy trờn 50 mẫu DNA đối chứng của người bỡnh thường.
â
E229K
Hỡnh 3.2. Hỡnh ảnh cấu trỳc gen CYP1B1 với đột biến p.E229K Hỡnh ảnh minh họa bệnh nhõn cú đột biến mới xúa 1 nucleotid Hỡnh ảnh minh họa bệnh nhõn cú đột biến mới xúa 1 nucleotid
g.6290 DelC (p.L191Sfs*4) g.6290
Người bỡnh thường Bệnh nhõn mó số G15
Hỡnh 3.3. Hỡnh ảnh đột biến gen của bệnh nhõn mó G15
Đõy là hỡnh ảnh giải trỡnh tự exon 2 thấy bệnh nhõn mó số G15 cú đột biến mất 1 nucleotid C tại vị trớ nucleotid 571 trờn cDNA. Hệ quả của đột biến mất 1 nucleotid này là sự thay đổi khung dịch mó, biến đổi acid amin thứ 191 Leucine thành Serine.
Hỡnh ảnh minh họa bệnh nhõn cú 03 đột biến mới, trong đú 2 đột biến vụ nghĩa, 01 đột biến sai nghĩa.
g.6188C>T (Q159X) g.6203C>T (Q164X) Người bỡnh thường Bệnh nhõn mó số G09 g.6203C g.6188C g.6365G>C (D218H) g.6365G Người bỡnh thường Bệnh nhõn mó số G09
Hỡnh 3.4. Hỡnh ảnh đột biến gen của bệnh nhõn mó G09
Đõy là hỡnh minh họa cho một bệnh nhõn cú đột biến vụ nghĩa. Giải trỡnh tự exon 2 gen CYP1B1 phỏt hiện bệnh nhõn mó số G09 cú đột biến thay thế nucloetid tại vị trớ nucleotid 475 và vị trớ nucleotid 490, C thành T dẫn đến codon 159 CAG mó húa Glutamine chuyển thành mó kết thỳc sớm TAG.
Hỡnh ảnh minh họa bệnh nhõn cú đột biến mới sai nghĩa
Hỡnh 3.5. Hỡnh ảnh đột biến gen của bệnh nhõn mó G24
c.724G>A (D242N) c.724G
Đõy là hỡnh ảnh đại diện cho kết quả đột biến p.D242N tại exon 2 gen CYP1B1 bằng kỹ thuật giải trỡnh tự gen. So sỏnh mẫu DNA bệnh nhõn với DNA mẫu chứng, phỏt hiện đột biến thay thế nucleotid G thành A tại vị trớ 724 trờn cDNA, dẫn đến sự thay đổi acid amin Aspartate thành Asparagine tại codon 242. Đõy là đột biến mới chưa được cụng bố.
3.2.2.4. Kết quả dự đoỏn gõy bệnh của cỏc đột biến