STT cDNA acid amin Thay đổi Số trường hợp Phõn tớch in silico
Dị hợp Đồng hợp Loại đột biến PolyPhen 2 Điểm
1 c.80T>A p.L27Q 1 0 Gõy bệnh Cú khả năng gõy bệnh 0,992
2 c.256C>A p.Q86K 4 0 Gõy bệnh Cú khả năng gõy bệnh 0,995
3 c.397G>A p.A133T 1 0 Gõy bệnh Khả năng lành tớnh 0,244
4 c.475C>T p.Q159X 3 0 Gõy bệnh
5 c.490C>T p.Q164X 1 0 Gõy bệnh
6 c.652G>C p.D218H 3 0 Gõy bệnh Cú khả năng gõy bệnh 1,000
7 c.724G>A p.D242N 0 1 Gõy bệnh Cú khả năng gõy bệnh 1,000
8 c.571delC p.L191Sfs*4 0 1 Gõy bệnh
9 c.1094G>A p.G365E 1 0 Gõy bệnh Cú khả năng gõy bệnh 0,997
Bảng 3.7 cho thấy kết quả phõn tớch in silico dự đoỏn khả năng gõy
bệnh của cỏc đột biến mới trờn gen CYP1B1. Cỏc đột biến mới cú khả năng gõy bệnh gồm p.L27Q, p.Q86K, p.D218H, p.D242N, p.G365E (điểm 0,992- 1,000). Ngoài ra cỏc đột biến mới p.L191Sfs*4 gõy thay đổi khung dịch mó và đột biến p.Q159X, p.Q164X tạo mó kết thỳc sớm cũng là cỏc đột biến gõy bệnh. Đột biến mới p.A133T được dự bỏo là lành tớnh với điểm 0,244.
p.D242N p.D218H
p.G365E p.Q86K
Hỡnh 3.6. Hỡnh ảnh cấu trỳc gen CYP1B1 với 04 đột biến mới (p.D242N, p.D218H, p.Q86K, p.G365E) (p.D242N, p.D218H, p.Q86K, p.G365E)
Ngoài 12 đột biến mụ tả trờn, nghiờn cứu cũn tỡm thấy cỏc đa hỡnh gen đó cụng bố trước đõy: p.R48G,p.A119S và p.L432V (bảng 3.8).
Bảng 3.6. Cỏc đa hỡnh SNP của gen CYP1B1 trờn bệnh nhõn nghiờn cứu
Exon
Đột biến Số bệnh nhõn
Tần suất alen(%) Chỳ thớch
cDNA Acid amin Dị hợp Đồng hợp
2 c.142C>G p.R48G 30 3 C(68,8%) G(21,2%) rs10012
2 c.355G>T p.A119S 15 4 G(86,5%) T(13,5%) rs1056827
3.2.3. Kết quả xỏc định đột biến gen CYP1B1 bằng kỹ thuật MLPA
Tất cả cỏc bệnh nhõn đều được tiến hành kỹ thuật MLPA để xỏc định đột biến đồng hợp tử xúa đoạn hoặc đột biến dị hợp tử xúa đoạn. Bệnh nhõn cú đột biến xúa đoạn đồng hợp tử khi khụng xuất hiện đỉnh tương ứng với exon bị xúa đoạn và đột biến xúa đoạn dị hợp tử khi chiều cao đỉnh bằng ẵ so với chiều cao đỉnh của mẫu đối chứng.
Nghiờn cứu đó phỏt hiện 2/86 trường hợp cú đột biến xúa đoạn, chiếm tỷ lệ 2,3%. CYP1B1 - 3 CYP1B1 - 1 CYP1B1 - 3 CYP1B1 - 1 MS G40 MS G2 CYP1B1 CYP1B1 MS G40 MS G2
Hỡnh 3.7.Hỡnh ảnh MLPA (hỡnh trỏi) và kết quả tớnh toỏn (Relative Peak Area) bằng phần mềm coffalyser (hỡnh phải) của bệnh nhõn G40 và G02.
Kết quả MLPA cho thấy bệnh nhõn mó số G40 khụng cú đột biến xúa đoạn trong khi đú bệnh nhõn G02 bị đột biến xúa đoạn hoàn toàn gen CYP1B1 bởi khụng xuất hiện cỏc đỉnh tương ứng với cỏc exon 1-3 của gen CYP1B1 khi so sỏnh với kết quả của mẫu bệnh nhõn MS G40.
Hỡnh 3.8.Hỡnh ảnh MLPA (hỡnh trỏi) và kết quả tớnh toỏn (Relative Peak Area) bằng phần mềm coffalyser (hỡnh phải) của bệnh nhõn G45 và G56.
Kết quả MLPAcho thấy bệnh nhõn mó số G45 khụng cú đột biến xúa đoạn trong khi đú bệnh nhõn G56 bị đột biến xúa đoạn gen exon 1 đến exon 3 gen CYP1B1 bởi khụng xuất hiện cỏc đỉnh tương ứng với cỏc exon 1-3 của gen CYP1B1 khi so sỏnh với kết quả của mẫu bệnh nhõn G45.
Đột biến xúa đoạn mới gặp ở 2 bệnh nhõn được xỏc định bằng kỹ thuật MLPA là xúa đoạn hoàn toàn exon 1 đến exon 3.
3.2.4. Tỷ lệ đột biến chung của gen CYP1B1
Bằng 2 phương phỏp giải trỡnh tự gen và MLPA nghiờn cứu đó xỏc địnhđược 19/86 bệnh nhõn mang đột biến gen CYP1B1 chiếm tỷ lệ 22,1%, trong đú 17/86 trường hợp cú đột biến điểm (19,8%) và 2/86 bệnh nhõn mang đột biến xúa đoạn (2,3%).
Bảng 3.7. Đặc điểm bệnh nhõn mang đột biến trờn gen CYP1B1
Mó số Exon
Đột biến
Dạng đột biến Thể đột biến Chỳ thớch phỏt hiện Tuổi Triệu chứng cơ năng
Nhón ỏp
(mmHg) Dấu hiệu thực thể
cDNA Acid amin
MP MT
Giỏc mạc ngang giỏc mạc Đường kớnh (mm)
Tiền
phũng Mức độ lừm đĩa MP MT MP MT MP MT MP MT
G02 2 Xúa đoạn toàn bộ exon1-3 Đồng hợp Đột biến mới 2,5 thỏng Chúi, chảy nước mắt, sợ ỏnh sỏng 38 35 Đục trắng trắng Đục 13 13
G08 2 c.256C>A Q86K Sai nghĩa Dị hợp Đột biến mới Ngay sau sinh Chúi, chảy nước mắt, sợ ỏnh sỏng 33 29 Đục Trong 15 14 sõu sõu 0,7 0,7 G09
2 c.475C>T Q159X Vụ nghĩa Dị hợp Đột biến mới
1 thỏng MP: Chúi, chảy nước mắt, sợ ỏnh sỏng 25 12 Đục Trong 12,5 12 sõu sõu 0,8 2 c.490C>T Q164X Vụ nghĩa Dị hợp Đột biến mới
2 c.652G>C D218H Sai nghĩa Dị hợp Đột biến mới
G10 2 c.475C>T Q159X Vụ nghĩa Dị hợp Đột biến mới Ngay sau sinh Chúi, chảy nước mắt, sợ ỏnh sỏng 24 26 Đục Đục 12,8 12,5 sõu sõu 2 c.652G>C D218H Sai nghĩa Dị hợp Đột biến mới
G11 2 c.256C>A Q86K Sai nghĩa Dị hợp Đột biến mới 3 thỏng 24 24 Đục trắng trắng 13,5 Đục 13,5 sõu sõu 0,9 0,7 2 c.475C>T Q159X Vụ nghĩa Dị hợp Đột biến mới
G15 2 c.571DelC L191Sfs*4 Thay đổi khung dịch mó Đồng hợp Đột biến mới 3 tuần Chảy nước mắt, sợ ỏnh sỏng 48 33 Đục trắng trắng Đục 13 13 G19 2 c.397G>A A133T Sai nghĩa Dị hợp Đột biến mới Ngay sau sinh Chúi, sợ ỏnh sỏng 22 38 Đục trắng trắng Đục 12 12
G20 2 c.80T>A L27Q Sai nghĩa Dị hợp Đột biến mới 2 thỏng Chúi, chảy nước mắt, sợ ỏnh sỏng 9 12 Đục Đục 12 12 sõu sõu 0,9 0,7 2 c.182G>A G61E Sai nghĩa Dị hợp Đột biến gõy bệnh
G21 2 c.256C>A Q86K
Sai nghĩa Dị hợp Đột biến mới
3 thỏng Chúi, chảy nước mắt, sợ ỏnh sỏng 32 42 Đục trắng trắng Đục 14 14 2 c.592G>A V198I Sai nghĩa Dị hợp Đột biến gõy bệnh
Mó số Exon
Đột biến
Dạng đột biến Thể đột biến Chỳ thớch phỏt hiện Tuổi Triệu chứng cơ năng
Nhón ỏp
(mmHg) Dấu hiệu thực thể
cDNA Acid amin
MP MT
Giỏc mạc ngang giỏc mạc Đường kớnh (mm)
Tiền
phũng Mức độ lừm đĩa MP MT MP MT MP MT MP MT
G24 2 c.685G>A E229K Sai nghĩa Dị hợp Đột biến gõy bệnh Ngay sau
sinh Chúi, chảy nước mắt, sợ ỏnh sỏng 25 26 Đục trắng trắng Đục 13 13 2 c.724G>A D242N Sai nghĩa Đồng hợp Đột biến mới
G40 2 c.652G>C D218H Sai nghĩa Dị hợp Đột biến mới Ngay sau
sinh MT:Chúi, chảy nước mắt, sợ ỏnh sỏng 23 24 Đục trắng Đục 14 14 sõu 2 c.685G>A E229K Sai nghĩa Dị hợp Đột biến gõy bệnh
G43 2 c.256C>A Q86K Sai nghĩa Dị hợp Đột biến mới 3,5 thỏng Chúi, chảy nước mắt 24 40 Trong Đục 12 12 sõu sõu G44 3 c.1094G>A G365E Sai nghĩa Dị hợp Đột biến mới Ngay sau sinh Chúi, chảy nước mắt, sợ ỏnh sỏng 28 27 Đục Đục 14 14 sõu sõu 0,9 0,9
G56 Xúa đoạn toàn
bộ exon1-3 Đồng hợp Đột biến mới Ngay sau sinh Chúi, chảy nước mắt, sợ ỏnh sỏng 28 23 Đục trắng trắng Đục 14 14
G70 2 c.685G>A E229K Sai nghĩa Dị hợp Đột biến gõy bệnh Ngay sau sinh Chúi, chảy nước mắt, sợ ỏnh sỏng 23 29 Đục Đục 13,2 12,8 sõu sõu 0,7 0,4 G74 2 c.685G>A E229K Sai nghĩa Dị hợp Đột biến gõy bệnh Ngay sau sinh Chúi, chảy nước mắt, sợ ỏnh sỏng 30 40 Trong Trong 14,5 14 sõu sõu 0,6 0,6 G84 2 c.685G>A E229K Sai nghĩa Dị hợp Đột biến gõy bệnh 6 thỏng MP:Chúi, chảy nước mắt, sợ ỏnh sỏng 12 Trong 13 sõu 0,7 G85 2 c.685G>A E229K Sai nghĩa Dị hợp Đột biến gõy bệnh Ngay sau sinh Chúi, chảy nước mắt, sợ ỏnh sỏng 32 36 Đục trắng trắng Đục 14 14
G86 2 c.685G>A E229K Sai nghĩa Dị hợp Đột biến gõy bệnh Ngay sau sinh MT:Chúi, chảy nước mắt, sợ ỏnh sỏng 23 36 Trong Đục trắng 14 14 sõu
Trong nghiờn cứu này, cú 2 bệnh nhõn là anh em ruột nờn khi đỏnh giỏ cỏc dạng đột biến ở những bệnh nhõn khụng cú quan hệ huyết thống, số bệnh nhõn đột biến là 18 trong tổng số 85 bệnh nhõn, phõn bố như sau: