chanrô cail s hã pig
1.5.4 Đo phổ hồng ngoai infrared (IR) spectroscopy.
Phổ hồng ngoại IR là một trong những kỹ thuật phổ được sử dụng rộng rãi nhất, là phương pháp đo độ hấp thụ của mẫu thử ở cấc bước sóng khác nhau của tia hồng ngoại. Mục đích chính của việc phân tích phổ ĨR là xác định các nhóm chức hóa học có trong mẫu thử. Những nhóm chức khác nhau sẽ hấp thụ
những bước sóng riêng biệt. Với nhiều thiết bị phụ tùng, máy phổ hồng ngoại có thể làm việc với nhiều dạng mẫu từ khí, lỏng đến rắn. Phân tích phổ IR là một cơng cụ phổ biến và quan trọng để làm sáng tỏ cấu trúc và xác định các hợp chất.
Hình ỉ. 12 Phổ hồng ngoại collagen trong dung dịch axit
Collagen trên phổ hồng ngoại có thể thấy trên hình. Nhóm amide A phát hiện ở peak có cường độ 3330 cm'1, nhóm amide B được thấy ở peak có cường độ 3080 em'1. Trên quang phổ còn thấy xuất hiện sự dao động của amide bậc ĩ ở 1650 crrf , amide bậc Tĩ ở
1545 cm'1và amit bậc III ở 1237 cm'1, cấu trúc của protein và amide bậc III chứng minh sự tồn tại của kết cấu có hình xoắn ốc (Surewicz và Mantsch, 1988, Muyonga, 2004).
CHƯƠNG 2: CÁC PHƯƠNG PHÁP SẢN XUAT COLLAGEN
Trong các cơng trình nghiên cứu, qui trình thu nhận collagen gồm 3 giai đoạn chính :
❖ Giai đoạn phá vỡ tế bào:
- Các phân tử collagen khơng có khả năng đi qua màng tế bào, vì vậy cần
phá vỡ cấu trúc tế bào để chuyển collagen vào dung dịch. Các biện pháp được sử dụng có thể là các biện pháp cơ học như tiến hành ngiền với bột thủy tinh hoặc cát thạch anh, sau đó tiến hành đồng hóa (homogenizator). Thiết bị này có chày thủy tinh gắn với motor quay và có thể điều chỉnh tốc độ quay theo yêu cầu. Các tế bào nằm giữa chày thủy tinh và thành cốì sẽ bị phá vỡ.
- Sử dụng các dung mơi hữu cơ như butanol, acetone kết hợp với các chất tẩy rửa. Các hóa chất này giúp cho việc phá vỡ các bào quan của tế bào.
❖ Giai đoạn tách chiết collagen:
- Sau khi phá vỡ cấu trúc tế bào, việc tách chiết collagen được tiến hành dễ dàng hơn, collagen có thể được chiết tách bằng acid hoặc bằng enzyme, quá trình tách chiết collagen được thực hiện trong các reactor ở nhiệt độ lạnh và trong điều kiện vô trùng, kết hợp khuấy trộn liên tục để đảm bảo collagen thu được có chất lượng tốt.
❖ Giai đoạn tinh sạch collagen:
- Trong dịch chiết thơ, ngồi collagen cịn có cácprotein tạp, các lipid, mi khống, để loại các thành phần này cần sử dụng các biện pháp khác nhau.
- Đê’ loại mi khống thường dùng phương pháp thẩm tích. Thẩm tích là sự khuyếch tán vi phân qua màng vốn khơng thấm đơi với những chất keo hịa tan ( protein, một số polysaccaride...) nhưng thấm đôi với các dung dịch tinh thể ( các muôi của hợp chất hữu cơ có trọng lượng phân tử thấp,...). Để loại các protein tạp có thể tiến hành kết tủa phân đoạn bằng mi trung tính hoặc các dung mơi hữu cơ hay dùng các phương pháp sắc ký trao đổi ion, điện di, phương pháp lọc gel,...
2.1 CẤC CỐNG TRÌNH NGHIÊN cứu TRÊN THỂ GIỚI2.1.1 Qui trình chiết tách collagen từ da heo [6]