V: thể tích cấy/đĩa(ml)
PHƯƠNG PHÁP NGUYÊN LÝ TIẾN HÀNH CÁC TÍNHCHẤT ĐIỂN HÌNH TRÊN MTCL NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ
d: độ pha loãng của dung dịch được chọn thứ nhất
PHƯƠNG PHÁP NGUYÊN LÝ TIẾN HÀNH CÁC TÍNHCHẤT ĐIỂN HÌNH TRÊN MTCL NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ
KẾT QUẢ
TÍNH KẾT QỦA
PHÂN LẬP
Xác định các khuẩn lạc điển hình trên mơi trường chọn lọc, có các phản ứng sinh hoá và huyết thanh đặc trưng trong phép thử khẳng định
Dùng nước đệm pepton để tiền tăng sinh
Dùng RV và selenit cystin cho bước tăng sinh chọn lọc
Phát triển hiếu khí Có hay khơng có Salmonella Trả lời KQ Có mặt hay khơng có mặt Salmonella /25g (25ml) mẫu thử
Tiền tăng sinh: 25g (25ml) + 225 ml đệm pepton Ủ 35-370C/16-20h Tăng sinh chọn lọc: -0,1ml + 10ml RV. Ủ 420C/24h -10ml +100ml selenit cystin. Ủ 35-370C/24 và 48h
Từ RV cấy lên thạch đĩa Hektoen enteric.
Ủ ở 35-370C/18 – 24h
KLĐH trên thạch Hektoen enteric: dạng S, trong, màu xanh, có tâm đen hoặc khơng Từ selenit cystin, cấy lên thạch
đỏ phenol lục sáng, Chọn 5 KLĐH/đĩa. Cấy lên thạh dinh dưỡng.
Ủ 35-370C/18 – 24h
KLĐH trên thạch đỏ phenol lục sáng: dạng S, đục, thay đổi màu MT từ hồng sang đỏ
Chọn 5 KLĐH/đĩa. Cấy lên thạh
dinh dưỡng. Ủ 35-370C/18 –
24h để thử SVHH
Làm phản ứng ngưng kết với kháng huyết thanh đặc hiệu O và H
Lên men đường glucose(+) ,lactose (-)
- H2S (+)
-Phân giải Ure (-) -Phản ứng VP (-) - Indol (-)
-ONPG(-), LDC(+)Ngưng kết KHT O(+), Ngưng kết KHT O(+), KHT H(+)
Mơn: Kỹ thuật phân tích Vi sinh – nấm thực phẩm II ATTP 4
PHƯƠNG PHÁP NGUYÊN LÝ TIẾN HÀNH ĐIỂN HÌNH TRÊN CÁC TÍNHCHẤT MTCL MTCL NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ TÍNH KẾT QỦA PHÂN LẬP VÀ XÁC ĐỊNH L.MONOCYTOGENES Phương pháp định tính Phát hiện những VSV tạo thành khuẩn lạc điển hình trên mơi trường thạch chọn lọc, có những đặc tính về hình thái, TC sinh hoá phù hợp trong phép thử khẳng định
Sử dụng canh thang Fraser cho bước tăng sinh
-Tăng sinh lần 1: 25g(25ml) + 225ml CT Fraser, ủ 300C/ 24h
Phát triển cả trong điều kiện
hiếu khí và vi hiếu khí Có hay khơng có
L.monocytogenes Trả lời KQ Có mặt hay khơng có mặt L.monocytogenes /25g (25ml) mẫu thử -Tăng sinh lần 2:
Cấy 1ml CT tăng sinh lần 1 vào 10 ml CT FraserỦ 35-370C/48 ±2h
Cấy chuyển lên hai MT thạch chọn lọc:
-Oxford: 1 đĩa ria cấy, một đĩa cấy trải, ủ ấm ở 30
0C, 35 0C hoặc 37 0C từ 18 – 24 h trong điều kiện
hiếu khí
Trên thạch Oxford: sau 24h
KLĐH nhỏ, ĐK 1mm, màu xám, có quầng đen bao quanh. Sau 48h, KL sẫm màu, hoặc lục sáng, ĐK 2mm, có quầng đen, tâm lõm
-PALCAM: một đĩa ria
cấy, một đĩa cấy trải, ủ ấm ở 300 C, 35 0C hoặc 37 0C từ 18 – 24 h trong điều kiện vi hiếu khí.
Trên thạch PALCAM: sau
24h KLĐH nhỏ, ĐK 1,5-2 mm, màu lục hoặc vàng lục, có quầng đen bao quanh, đơi khi tâm đen. Sau 48h, KL xanh lá cây, ĐK 1,5 - 2mm, có quầng đen, tâm lõm
Từ mỗi đĩa chọn 5 KLĐH cấy lên MT thạch TSYE, ủ 30 0C, 35 0C hoặc 37 0C từ 18 – 24 h để thử tính chất SVHH -TK Gram(+) -Catalase (+) -Di động hình ơ ở 250C/48h -Tan máu cừu dạng ß Rhamnose(+),Xylose(+) - CAMP test(+)
Mơn: Kỹ thuật phân tích Vi sinh – nấm thực phẩm II ATTP 4
PHƯƠNG PHÁP NGUYÊN LÝ TIẾN HÀNH ĐIỂN HÌNH TRÊN CÁC TÍNHCHẤT MTCL MTCL NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ TÍNH KẾT QỦA PHÂN LẬP VÀ XÁC ĐỊNH CAMPYLOBACTER Phương pháp định tính Sử dụng canh thang Preston để tăng sinh
Phát triển trong điều
kiện vi hiếu khí Có hay khơng có
Campylobacter Trả lời KQ Có mặt hay khơng có mặt Campylobacter /25g (25ml) mẫu thử 25g +225ml Preston Ủ vi hiếu khí/420C/24 – 48h KLĐH dẹt, bóng, xám kem nhạt đến xám xanh, thường lan Cấy chuyển lên thạch
chọn lọc CCD
Ủ vi hiếu khí/420C/24 – 48h
Cấy chuyến KLĐH lên thạch máu và thạch dinh dưỡng. Ủ vi hiếu khí/420C/24 – 48h để thử các tính chất SVHH -VK Gram(-) -Hình lượn sóng, cánh chim… -Catalase (+) -Oxydase(+)
- Thủy phân Hippurate (+): C.jejuni (+): C.jejuni
Mơn: Kỹ thuật phân tích Vi sinh – nấm thực phẩm II ATTP 4