- Rệp sáp hại cà phê ựược ni tại phịng thử sinh học của Trung sinh học
1. Phương pháp chọn chủng giống thuần tốt nhất
Chúng tôi tiến hành nuôi cấy 5 chủng nấm Beauveria bassiana ựó là : BR1, BR2, BR3, BR4, BR5 trên môi trường N1 có cơng thức như sau: Khoai tây, Glucose, KH2PO4, Pepton, MgSO4, Agar, H2O.
1.1 Phương pháp tiến hành:
Cân các thành phần môi trường như phần vật liệu ựã nêu, sau ựó ựun sơi mơi trường trên bếp ựiện. Môi trường ựã ựược ựun sôi sẽ ựược ựổ vào bình tam giác 250 ml cho vào nồi khử trùng. Tùy vào thành phần môi trường mà các môi trường khác nhau ựược khử trùng ở nhiệt ựộ khác nhau. đối với môi trường N1 ựược khử trùng ở 121○C, 1at trong 30 phút. Cùng khoảng thời gian ựó ta cắm ựèn cực tắm ựể khử trùng buồng cấy.
Môi trường sau khi khử trùng ựược ựể nguội tới 60○C trong buồng cấy sạch rồi ựổ ra ựĩa petri sạch ựã ựược sấy khử trùng (ắt nhất 3 giờ), ựể yên 1 - 1.5h ựể cố ựịnh bề mặt thạch. Khi bề mặt thạch ựã cứng ta tiến hành úp ngược ựĩa petri ựể nước ko hấp hơi lên nắp ựĩa.
Sau ựó tiến hành cấy giống theo phương pháp cấy ựiểm. Hé mở ựĩa petri ựựng môi trường, que cấy ựược vô trùng trên ngọn lửa ựèn cồn ựến khi nóng ựỏ, gạt que cấy trên nắp ựĩa petri cho nguội bớt mới cho que cấy vào ống giống lấy một lượng ắt bào tử rồi cấy một ựiểm duy nhất ở tâm ựĩa. Cấy xong ựặt ngược ựĩa petri và gói lại bằng giấy báo sạch rồi ựể trong buồng cấy.
1.2 Chỉ tiêu theo dõi:
+ Theo dõi sự phát triển của khuẩn lạc bằng mắt thường. đo ựường kắnh khuẩn lạc của nấm Beauveria bassiana sau 3, 5, 7, 10, 14 ngày nuôi cấy (ựo
bằng thước ựo cm ở mặt sau ựĩa petri).
+ đếm số lượng bào tử/ cm2 sau 7, 10, 14 ngày nuôi cấy ựể xác ựịnh chủng nấm sinh lượng bào tử nhiều nhất và xác ựịnh ựược thời gian thu sản phẩm tốt nhất.
để ựếm bào tử, chúng tôi ựã dùng buồng ựếm hồng cầu và ựược tiến hành như sau:
Nghiền 1 cm2 khuẩn lạc nấm vào 10 ml nước cất và lắc ựều, lấy 1 ml dịch