3.2.1 .Gây chuột nhắt ĐTĐ type 2
3.3.2.1 .Khối lượng cao chiết phân đoạn lá vối
3.3.4. Xác định hoạt tính ức chế enzym α-glucosidase
Chúng tôi đã thử hoạt tính ức chế enzym α-glucosidase của các chất tinh sạch nhằm xác định cơ chế hạ đƣờng huyết của chúng. Với 8 chất tinh sạch đã xác định đƣợc 05 chất thể hiện hoạt tính, kết quả đƣợc trình bày theo thứ tự hoạt tính ức chế enzym α-glucosidase giảm dần (IC50 tăng dần). Hoạt tính ức chế enzym α- glucosidase của Acarbose đƣợc xác định với IC50 là 0,12 mg/ml. Bảng 3.14 là kết quả chi tiết về hoạt tính ức chế enzym α-glucosidase của các chất tinh sạch.
Bảng 3.14. Hoạt tính ức chế enzym α-glucosidase của 5 chất tinh sạch từ lá vối, lá chè đắng
Stt Tên chất CTPT IC50 (μg/ml ) IC50 (mol/l)
1 24-methyl(3-hydroxy-lup-20(29)-en-24-
oic acid)ester (H4) C31H50O3 3,4 ± 0,7 71x10
-8
2 3β-hydroxy-lup-20(29)-en-28-oic acid (C3) C30H44O3 3,6±0,5 79,3x10-8
3 2’,4’-dihydroxy-6’-methoxy-3’,5’- dimethylchalcon (H6) C18H18O3 4,3±0,2 153x10 -7 4 2,3β,23-trihydroxy-urs-12en-28-oic acid (LVE4) C30H48O5 5,7±0,5 117x10 -7 5 3-hydroxy-olean-12(13)-en-28-oic acid (LVE2) C30H48O3 6,1±0,3 133x 10 -7
Đây là một điểm mới mà đề tài luận án chúng tôi đã thực hiện đƣợc khi nghiên cứu về cơ chế hạ đƣờng huyết trên hai đối tƣợng lá vối và lá chè đắng. So với các giá trị IC50 của các hợp chất trong bảng tổng hợp 1.4, cũng nhƣ IC50 của Acarbose, chúng tôi nhận thấy IC50 của các chất tinh sạch này là tƣơng đối thấp,
điều này khẳng định hoạt tính ức chế enzym α-glucosidase của các chất tinh sạch là khá mạnh [71]. Theo nhóm tác giả Trần Tuyết Mai đã nhận thấy khả năng ức chế enzym α-glucosidase của cao chiết nƣớc mẫu nụ vối Cleistocalyx operculatus
(Roxb.) Merr and Perry, nghiên cứu khả năng ức chế maltase và sucrase tách chiết từ ruột chuột cống invitro xác định đƣợc giá trị IC50 tƣơng ứng là 0,70 and 0,47
mg/ml [80]. Hiện chƣa có cơng bố nào trên thế giới về khả năng ức chế enzym α- glucosidase của các hoạt chất chiết xuất từ lá vối. Hình 3.23 là hình ảnh thử khả năng ức chế enzym α-glucosidase.
Hình 3.23. Khả năng ức chế enzym α-glucosidase của một số hoạt chất
Chú thích : ống nghiệm màu đỏ đối chứng (+); ống nghiệm màu hồng nhạt: mẫu (+)
Có thể khẳng định khả năng hạ đƣờng huyết của các cao chiết phân đoạn nói riêng và cao tổng nƣớc nói chung đƣợc quyết định bởi các thành phần hóa học này. Theo tham khảo, các chất tinh sạch có một số hoạt tính khác nhƣ chống khối u, kháng khuẩn, chống oxi hóa. Với hai chất bentulinic acid và oleanoic acid đã đƣợc khẳng định có hoạt tính ức chế enzym α-glucosidase khá tốt [48]. Tuy các chất tinh sạch này không phải là lần đầu tiên đƣợc phân lập tuy nhiên với cơng bố về hoạt tính ức chế enzym α-glucosidase của 04 chất tinh sạch đƣợc từ lá vối là tính mới của luận án.
Kết quả ức chế enzym α-glucosidase của chất 24-methyl (3-hydroxy-lup- 20(29)-en-24-oic acid) ester tách chiết từ CHe lá chè đắng là công bố đầu tiên trong những nghiên cứu trên thế giới về lá chè đắng. Nếu so sánh với 04 hợp chất phân lập từ lá vối thì hoạt tính ức chế enzym α-glucosidase của 24-methyl (3-hydroxy- lup-20(29)-en-24-oic acid) ester từ lá chè đắng mạnh nhất. Hoạt tính ức chế enzym
α-glucosidase của CHe lá chè đắng: ức chế 55% hoạt tính của α-glucosidase tại nồng độ 7,84 ±0,3 μg/ml. Đây cũng là kết quả nghiên cứu đầu tiên về khả năng ức chế enzym α-glucosidase của cao chiết phân đoạn lá chè đắng.