2.1.2.2 .Thiết bị thí nghiệm
2.2. PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.2.5. Phƣơng pháp làm tiêu bản đúc cắt gan chuột
Mẫu sau khi đƣợc cố định 12-24 giờ trong dung dịch Boin đƣợc rửa dƣới vòi nƣớc chảy từ 6-12 giờ để khử chất cố định trong mẫu, sau đó đƣợc chuyển qua cồn tăng dần nồng độ 700, 800, 900, 960, 1000I, 1000II để khử nƣớc, mỗi lọ cồn để mẫu 2 giờ. Tiếp tục cho mẫu qua lần lƣợt cồn 1000 + Toluen với các tỷ lệ 3:1, 1:1, 1:3, Toluen I, Toluen II, mỗi cốc để khoảng 4 giờ để khử cồn và làm trong mẫu. Sau đó cho mẫu lần lƣợt qua Toluen + Parafin tỷ lệ 3:1, 1:1, 1:3 để trong tủ ấm 370C khoảng 12 giờ để cho mẫu ngấm dần parafin rồi cho Parafin I, Parafin II trong tủ ấm 56-580C trong thời gian 4 giờ.
Mẫu đƣợc đúc trong Parafin chứa 3-5% sáp ong và đƣợc cắt trên máy cắt microtom quay tay của Mỹ với chiều dày lát cắt là 7 micromet. Các lát cắt đƣợc gắn trên lam kính đã đƣợc bơi 1 lớp albumin mỏng, sau đó đƣợc chuyển tiêu bản vào trong tủ ấm khoảng 12 giờ để cho mẫu gắn chặt vào lam kính.
Nhuộm tiêu bản bằng phƣơng pháp nhuộm kép Hematocylin-Eosin theo trình tự sau: Cho tiêu bản lần lƣợt qua Toluen I (20 phút), Toluen II (15 phút) để khử Parafin sau đó lần lƣợt qua cồn + Toluen tỷ lệ 1:1, cồn 1000, cồn 900, cồn 800 và cồn 700, mỗi cốc để 5 phút để khử Toluen và ngấm nƣớc vào mẫu. Sau đó rửa tiêu bản qua nƣớc cất rồi cho tiêu bản vào Hematocylin trong thời gian từ 7-10 phút, tráng tiêu bản qua nƣớc cất rồi nhuộm tiếp bằng Eosin trong thời gian khoảng 20 phút. Tráng qua nƣớc cất hoặc chuyển tiêu bản trực tiếp qua cồn tăng dần nồng độ 700, 800, 900, 960, 1000I, 1000II, mỗi lần 3 phút để khử nƣớc trong tiêu bản. Tiếp tục cho tiêu bản qua cồn + Toluen tỷ lệ 1:1, Toluen I, Toluen II trong 3 phút để khử cồn. Dán Lamelle lên tiêu bản bằng bôm Canada và sau đó chuyển tiêu bản vào trong tủ ấm để bảo quản mẫu. Phân tích tiêu bản và chụp ảnh trên kính hiển vi Olympus. Thí nghiệm thực hiện tại Bộ môn Tế bào- Mô phôi-Lý sinh, Khoa Sinh học, Trƣờng Đại học Khoa học tự nhiên.