2.1.2.2 .Thiết bị thí nghiệm
2.2. PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.2.6.2. Phương pháp phân lập các chất
a. Sắc ký lớp mỏng
Kiểm tra độ tinh khiết của các chất phân lập đƣợc bằng sắc ký lớp mỏng. Phƣơng pháp sắc kí lớp mỏng bao gồm pha tĩnh là một lớp mỏng các chất hấp phụ là silicagel. Pha động bao gồm dung dịch cần phân tích đƣợc hịa tan trong một dung mơi thích hợp và đƣợc hút lên bản sắc kí bởi mao dẫn, tách dung dịch thí nghiệm dựa trên tính phân cực của các thành phần trong dung dịch.
Sau khi chạy sắc ký xong phát hiện chất trên bản mỏng bằng đèn tử ngoại ở hai bƣớc sóng 254nm và 368nm hoặc dùng thuốc thử là dung dịch H2SO4 10% đƣợc phun đều lên bản mỏng, sấy khô rồi hơ trên bếp điện từ từ đến khi hiện màu.
b. Sắc ký cột
Phân lập hoạt chất từ các phân đoạn có tác dụng hạ đƣờng huyết bằng kỹ thuật sắc ký cột mở pha thƣờng và pha đảo. Nguyên tắc của sắc ký là dựa trên sự phân bố các chất giữa 2 pha: một cố định và một di động. Trong đó, pha tĩnh đƣợc nhồi vào một cột thủy tinh, pha lỏng là dung môi dùng để chiết cho chảy qua cột. Mẫu đƣợc tách đƣợc đƣa vào một đầu của cột. Các phần khác nhau của mẫu sẽ đi qua cột với tốc độ khác nhau, các phân tử có kích thƣớc nhỏ sẽ đi sâu vào mạng lƣới của chất nhồi, cịn các phân tử có kích thƣớc lớn hơn sẽ chỉ thâm nhập ở mức độ nhất định, các phân tử có khối lƣợng rất lớn sẽ khơng di chuyển đƣợc vào các mao quản. Kết quả là thứ tự các chất ra khỏi cột theo khối lƣợng phân tử giảm dần [115].