STT
Hàm lƣợng các dạng As (ppb) tính đƣợc và sai số (SS%) Hàm lƣợng các dạng Se (ppb) tính đƣợc và sai số (SS%) As(III) SS% As(V) SS% DMA SS% MMA SS% Se(IV) SS% Se(VI) SS% DMDSe SS% SeMet SS%
1 2,4 -2,2 8,4 -6,1 6,6 -5,2 2,3 -7,4 1,00 +0,0 12,04 +3,7 0,35 +20,7 2,00 -0,3 2 3,0 +0,0 9,7 +7,4 6,7 -4,8 2,9 -2,4 0,98 +1,8 12,08 +3,4 0,30 +19,2 4,00 -0,2 3 3,3 -6,6 9,1 +14,3 4,3 +7,4 3,4 -3,8 0,96 +3,6 12,11 +3,1 0,26 +27,8 6,00 -0,2 4 3,8 -4,1 9,2 -7,6 1,9 -6,6 4,1 +3,4 1,01 -1,8 12,02 +3,8 0,85 -20,5 1,00 -0,5 5 4,0 +0,3 9,2 -7,6 1,1 +5,3 4,4 -2,7 1,01 -1,1 12,04 +3,7 2,81 +6,3 1,00 -0,5 6 4,7 -5,3 11,1 -7,6 1,6 -18,7 5,1 +2,9 1,03 -3,4 12,03 +3,7 3,77 +5,6 1,00 +0,0 7 2,1 +6,2 5,1 +2,9 1,1 +8,6 2,3 -8,5 1,00 +0,0 12,07 +3,4 5,75 +4,2 1,00 -0,5 8 1,3 -11,1 6,6 -5,1 8,0 -0,6 1,0 +0,6 2,29 +8,5 1,67 +16,2 0,54 -9,1 4,92 +1,5 9 1,5 -0,2 5,5 -8,6 4,7 -5,4 1,4 -8,2 4,29 +4,6 1,63 +18,4 0,65 -21,8 4,93 +1,4 10 1,3 -13,5 6,2 +2,5 7,1 +1,2 1,0 +1,8 6,29 +3,2 1,58 -5,8 0,77 -24,4 4,93 +1,4 11 2,9 -3,0 7,1 +19,2 1,7 +13,9 3,1 -10,8 8,01 -0,1 1,88 +6,0 0,79 +21,1 5,01 -0,2 12 3,3 +9,9 8,0 -6,0 1,7 +14,1 3,5 +1,3 12,01 -0,1 1,79 +10,5 1,02 -2,5 5,02 -0,3 13 3,1 +3,9 7,3 +4,5 1,1 +10,3 3,4 -3,3 1,98 +1,1 2,05 -2,7 1,93 +3,7 5,00 +0,0 14 3,4 -2,0 7,8 -2,5 0,7 +40,0 3,8 -6,0 1,97 +1,3 4,07 -1,7 1,90 +5,0 5,00 -0,1 15 1,8 +19,7 7,1 +1,3 6,8 -3,3 1,6 +5,8 1,97 +1,5 6,08 -1,4 1,87 +6,3 5,00 -0,2 16 2,4 -2,4 6,6 -5,5 2,8 +10,4 2,5 +1,5 1,96 +1,7 8,09 -1,2 1,85 +7,6 5,01 -0,3 17 3,3 +10,0 8,1 -4,8 1,9 -4,7 3,5 +1,2 1,96 +1,9 10,10 -1,1 1,82 +8,9 5,01 -0,4 18 2,3 -6,0 7,3 +22,2 4,7 +4,5 2,3 -7,1 6,01 -0,2 0,92 +8,3 1,19 -19,7 5,00 +0,0 19 3,1 +4,0 8,1 +16,4 2,9 -4,7 3,3 +9,5 6,00 -0,1 0,93 +7,1 2,17 -8,8 5,00 +0,0 20 4,7 +4,2 10,7 +7,1 1,0 +2,2 5,1 +2,6 6,00 +0,0 0,94 +5,9 3,64 +8,9 5,00 +0,0 21 1,8 -12,3 5,3 -12,0 3,1 +3,0 1,8 -12,0 6,00 +0,0 0,96 +3,7 5,11 +7,0 5,00 +0,0 22 2,0 -0,4 5,7 +13,6 2,8 -5,1 2,0 +1,9 1,04 -3,9 10,01 -0,2 0,31 +38,5 4,99 +0,1 23 1,7 +12,9 5,4 +8,1 3,6 +4,3 1,7 +10,5 3,13 -4,3 9,87 +1,3 0,45 +10,7 4,97 +0,5 24 4,1 +3,7 10,1 +1,0 2,2 +11,9 4,5 -0,9 5,22 +5,1 9,72 -2,4 0,58 -17,1 4,95 +0,9 25 3,8 -4,8 9,0 +12,4 1,5 -2,7 4,1 +3,2 7,30 +2,6 9,58 -0,8 0,72 +27,5 4,94 +1,3 26 2,4 -4,6 8,5 +6,6 7,1 +1,3 2,2 -11,1 9,40 +1,1 9,43 +0,7 0,86 +13,6 4,91 +1,7
3.3. Đánh giá phƣơng pháp phân tích dạng As và Se trong mẫu tự tạo 3.3.1. Giới hạn phát hiện và giới hạn định lƣợng của phƣơng pháp 3.3.1. Giới hạn phát hiện và giới hạn định lƣợng của phƣơng pháp
Để đánh giá khả năng áp dụng thực tế của phƣơng pháp HG – AAS - PCR, các thí nghiệm xác định giá trị LOD, LOQ đƣợc thực hiện với các mẫu trắng nhƣ đã đề cập ở mục 2.2.4, các môi trƣờng để thực hiện phản ứng khử là các dung dịch đã lựa chọn đƣợc ở bảng 3.9. Kết quả tính tốn sau khi nhập các thơng số vào phần mềm rồi chạy chƣơng trình tính tốn theo các câu lệnh ở mục 2.2.4.3 đƣợc tóm tắt ở bảng 3.23. Để đảm bảo có thể xác định hàm lƣợng các dạng ở hầu hết các môi trƣờng, giá trị LOD và LOQ là các giá trị lớn nhất tính đƣợc.
Bảng 3. 22. Kết quả xác định giá trị LOD và LOQ theo mơ hình hồi quy đa biến
Giá trị LOD LOQ LOD LOQ LOD LOQ LOD LOQ
Môi trƣờng As(III) ppb As(V) ppb DMA ppb MMA ppb
HCl 6M 0,04 0,15 0,20 0,60 0,15 0,50 0,06 0,30
HCl 1M 0,04 0,15 0,20 0,62 0,05 0,15 0,04 0,12
Đệm tatric/tatrat pH=2 0,06 0,20 0,30 0,72 0,04 0,12 0,07 0,22 Đệm tatric/tatrat pH=3 0,08 0,22 0,34 0,79 0,05 0,14 0,09 0,22 Đệm tatric/tatrat pH=4 0,10 0,34 0,60 1,80 0,06 0,20 0,10 0,34
Môi trƣờng Se(IV) ppb Se(VI) ppb DMDSe ppb SeMet ppb
HCl 6M 0,10 0,21 0,40 0,80 0,17 0,46 0,07 0,22
HCl 4M 0,12 0,32 0,61 0,79 0,19 0,49 0,05 0,16
HCl 2M 0,16 0,38 0,72 0,98 0,07 0,26 0,03 0,07
HCl 1M 0,25 0,51 0,78 1,21 0,03 0,12 0,01 0,03
HCl pH = 2 0,32 0,75 0,96 2,10 0,12 0,28 0,06 0,19
Giá trị LOD, LOQ của phƣơng pháp
As 0,10 0,34 0,60 1,80 0,15 0,50 0,10 0,34
Se 0,32 0,75 0,96 2,10 0,19 0,49 0,07 0,19
Nhƣ vậy, có thể thấy các giá trị LOD, LOQ chọn đƣợc đều ở mức dƣới 1ppb. Đối chiếu với mức hàm lƣợng As cho phép có trong nƣớc tự nhiên (<10ppb) thì kết quả này đồng nghĩa với phƣơng pháp phân tích hồn tồn ứng dụng rất tốt vào thực tế phân tích các mẫu có hàm lƣợng As, Se ở dạng vết và siêu vết.
3.3.2. So sánh phƣơng pháp HG – AAS - PCR với phƣơng pháp HPLC – HG - AAS
Hiện nay ở Việt Nam có một số trung tâm phân tích mơi trƣờng đã xác định đƣợc đồng thời các dạng As(III), As(V), MMA, DMA bằng phƣơng pháp HPLC –
không gửi mẫu đi phân tích ở nƣớc ngồi đƣợc nên chúng tơi sử dụng kết quả phân tích các mẫu tự tạo chứa bốn dạng As là As(III) vô cơ, As(V) vô cơ, DMA, MMA (chuẩn bị theo mục 2.2.4.1) của các trung tâm phân tích mơi trƣờng để so sánh phƣơng pháp. Kết quả so sánh phƣơng pháp HPLC – HG – AAS với phƣơng pháp HG – AAS - PCR đƣợc trình bày ở bảng 3.23.
Bảng 3. 23. Kết quả phân tích mẫu tự tạo theo phương pháp HPLC – HG – AAS và HG – AAS - PCR
Hàm lƣợng As (ppb) trong mẫu tự tạo As(III) As(V) DMA MMA
5,0 12,0 2,0 5,0
Kết quả phân tích theo phƣơng pháp HPLC – HG – AAS
(số lần đo n = 5)
Hàm lƣợng As (ppb) 4,7 11,5 1,8 4,7
Sai số (%) - 6 - 4 - 10 - 6
Độ lệch chuẩn (S) 0,128 0,158 0,164 0,130
Kết quả phân tích theo phƣơng pháp HG – AAS – PCR
(số lần đo n = 5)
Hàm lƣợng As (ppb) 4,7 11,4 1,6 5,1
Sai số (%) - 6 - 5 - 19 + 2
Độ lệch chuẩn (S) 0,084 0,152 0,158 0,148
Giá trị Ftn (độ tin cậy 95%; Flt = 6,39) 2,32 1,08 1,08 1,30 Giá trị ttính (độ tin cậy 95%; tbảng = 2,31) 0,00 2,08 1,97 1,56
Kết quả ở bảng 3.23 cho thấy, với độ tin cậy 95% giá trị Ftn của mỗi dạng trong phép phân tích lặp đều nhỏ hơn giá trị Flt, điều đó chứng tỏ độ lặp lại của hai phƣơng pháp khác nhau khơng có ý nghĩa thống kê. Mặt khác, các giá trị ttính đều nhỏ hơn tbảng nên có thể kết luận giá trị trung bình hàm lƣợng các dạng As, đƣợc xác định theo hai phƣơng pháp HPLC – HG – AAS và HG – AAS - PCR, khác nhau do ngẫu nhiên. Mặc dù kết quả xác định hàm lƣợng dạng DMA theo phƣơng pháp HG – AAS – PCR có sai số lớn (≈20%), nhƣng có thể chấp nhận đƣợc vì hàm lƣợng các dạng As ở mức hàm lƣợng siêu vết (ppb). Nhƣ vậy, có thể nói hai phƣơng pháp HG – AAS - PCR và HPLC – HG – AAS cho kết quả giống nhau.
3.3.3. Ảnh hƣởng của dạng khác đến phép xác định đồng thời
Do điều kiện không đặt mua đƣợc các dạng khác của Se nên chúng tôi không tiến hành kiểm chứng với nguyên tố này, tuy nhiên từ kết quả khảo sát với As có thể đánh geiá khả năng áp dụng của phƣơng pháp HG – AAS - PCR. Trong thí nghiệm này, dạng Arsenobetaine (AsB) đƣợc thêm vào mẫu tự tạo với hàm lƣợng gần bằng
dịch thu đƣợc đem tiến hành đo tín hiệu phân tích với các điều kiện giống nhƣ các thí nghiệm trƣớc. Kết quả xác định hàm lƣợng trung bình của bốn dạng As(III) vô cơ, As(V) vô cơ, DMA, MMA trong mẫu này sau 5 lần đo đƣợc ghi lại ở bảng 3.24.