Giếng 1: Thang chuẩn 1 kb; Giếng 2: Vector tái tổ hợp p425-GmMSRA6 sau khi xử lý với SpeI và SalI;
Giếng 3: Gen đích GmMSRA6 đã được giải trình tự
Kết quả điện di cho thấy, vector tái tổ hợp p425-GmMSRA6 chứa trình tự nhận biết của 2 enzyme giới hạn SpeI và SalI, sau phản ứng cắt trên bản điện di xuất hiện 2 băng: vector p425 và gen chuyển GmMSRA6. Hai băng ADN đều sáng và rõ nét, đặc biệt băng GmMSRA6 (sản phẩm cắt) thu được có kích thước mong đợi và
tương đương với kích thước của sản phẩm PCR đã được giải trình tự. Do đó, chúng tôi sử dụng plasmid tái tổ hợp p425-GmMSRA6 đã được tinh sạch từ tế bào E. coli cho các thử nghiệm tiếp theo.
3.3.2. Kết quả thử nghiệm in vivo hoạt tính xúc tác phản ứng chuyển hóa MetO thành Met của các GmMSRA. thành Met của các GmMSRA.
Biến nạp các dòng vector tái tổ hợp p425-MSRA (mang gen mã hóa các MSRA của đậu tương GmMSRA hoặc nấm men yMSRA) vào chủng nấm men đã bị bất hoạt đồng thời cả 3 gen mã hóa cho các MSR (yMSRA, yMSRB và yfRMSR), dưới sự điều khiển của promoter mạnh GPD và nuôi cấy đồng thời trên 2 môi trường chọn lọc: mơi trường khơng có L-Leu (hình 3.11 A) và mơi trường khơng có
L-Met, có L-MetO 20 mg/L (hình 3.11 B). Gen chọn lọc của plasmid p425 liên quan
đến quá trình sinh tổng hợp Leucine (Leu), do đó dịng tế bào nấm men mang plasmid p425 sẽ có khả năng sinh trưởng trên môi trường thiếu Leu. Đối với môi trường chọn lọc thiếu Met, có MetO thì chỉ những tế bào nấm men mang plasmid được biểu hiện gen mã hóa cho enzyme MSRA và gen được biểu hiện có khả năng chuyển hóa MetO thành Met mới khả năng tồn tại và phát triển. Thí nghiệm được lặp lại 3 lần, kết quả được minh họa trong hình 3.13.