Chương 3 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.4. KẾT QUẢ PHÂN TÍCH ĐẶC TÍNH GEN MÃ HĨA ENZYME GmMSRA
3.4.4. Xác định sự biểu hiện của gen chuyển bằng RT-PCR
Nhằm kiểm tra gen chuyển có được phiên mã thành ARN và biểu hiện trong tế bào hay không? Chúng tơi tách chiết ARN tổng số sử dụng hóa chất Tripure từ các cây A. thaliana 14 ngày tuổi, được trồng trên đĩa thạch mơi trường ½ MS,
kanamycin 30 mg/L (dòng cây đối chứng và dòng cây chuyển gen 35S::GmMSRA6). Đoạn cADN được tổng hợp sử dụng KIT GoscriptTM Reverse Transcription System (Promega, Mỹ) với mồi hexamer ngẫu nhiên, sau đó thực hiện
phản ứng PCR với mồi đặc hiệu cho GmMSRA6. Điện di kiểm tra sản phẩm trên gel agarose 1,3%, nhuộm ethidium bromide và quan sát dưới tia cực tím ở bước sóng 245 nm. Kết quả được minh họa trên hình 3.19.
Hình 3.19. Điện di sản phẩm phản ứng RT-PCR trên gel agarose 1.3%, nhuộm ethidium bromide
Giếng 1: Thang chuẩn 1 kb; Giếng 2: Đối chứng (-); Giếng 3,4: sản phẩm RT-PCR cADN từ mẫu lá cây đối
chứng; Giếng 5, 6: sản phẩm RT-PCR cADN từ mẫu lá cây chuyển gen 35S::GmMSRA6-1; Giếng 7: giếng trống; Giếng 8, 9: sản phẩm RT-PCR cADN mẫu lá cây chuyển gen 35S::GmMSRA6-2.
Kết quả điện di cho thấy: Giếng 2: đối chứng âm (sử dụng nước tinh khiết thay cho khuôn) khơng xuất hiện băng, chứng tỏ thí nghiệm khơng bị nhiễm ADN lạ. Giếng 3, 4: sử dụng cADN của cây đối chứng làm khuôn, kết quả điện di không thấy xuất hiện băng, chứng tỏ cặp mồi sử dụng cho phản ứng RT-PCR đặc hiệu cho gen chuyển GmMSRA6.
Giếng 5, 6, 8, 9: sử dụng cADN của cây chuyển gen làm khuôn cho phản ứng RT- PCR, băng ADN thu được có kích thước mong đợi (206 nucleotide), sáng và rõ nét, chứng tỏ gen chuyển có được phiên mã thành ARN và biểu hiện trong tế bào.