CHƯƠNG 2 : ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.3. Phương pháp nghiên cứu
2.3.3.2. Phương pháp đánh giá khả năng giải phóng PGT qua da chuột
Tham khảo tài liệu [13] và khảo sát sơ bộ với điều kiện phịng thí nghiệm, thí nghiệm đánh giá lượng PGT giải phóng qua da lưng chuột nhắt trắng được lựa chọn như sau:
a) Điều kiện thử
- Thiết bị: Hệ thống đánh giá giải phóng thuốc qua màng Hanson Research - Bình khuếch tán có thể tích V = 7 ml và diện tích thử 1,767 cm2
- Môi trường khuếch tán: nước và ethanol với tỉ lệ là 50 : 50
- Màng khuếch tán: da vùng lưng chuột nhắt đực (khối lượng từ 20 – 30 g), đã được xử lý loại bỏ lông và lớp mỡ dưới da bằng dao kéo phẫu thuật
- Tốc độ khuấy 400 vòng/phút - Nhiệt độ thử 32oC ± 0,5oC - Khối lượng mẫu thử: 0,3 g.
b) Cách tiến hành
• Cân chính xác khoảng 0,3g mẫu cho vào ngăn cho của bình khuếch tán Franz. Lấy mẫu ở các thời điểm 1; 3; 5; 6; 7; 8 và 24 giờ. Thể tích mỗi lần lấy mẫu là 0,6 ml. Sau mỗi lần lấy mẫu, bổ sung một thể tích dung dịch mơi trường mới (đã được điều nhiệt ở 32oC) bằng đúng thể tích mơi trường đã lấy ra. Xác định lượng PGT giải phóng bằng phương pháp HPLC rồi so sánh với dung dịch chuẩn PGT trong pha động có nồng độ 30,0 µg/ml. Mỗi cơng thức làm 3 lần.
19
Lượng PGT giải phóng từ hệ sau khoảng thời gian t giờ (t = 1; 3; 5; 6; 7; 8 và 24 giờ) tính theo cơng thức:
Xt = Cc Sc 1
Sm (V1 Sk + V2 ∑𝑘𝑡=2𝑆t-1) Trong đó:
- Xt là hàm lượng PGT thấm qua 1 đơn vị diện tích da (µg/cm2)
- Sc, Sk (k là thứ tự các thời điểm lấy mẫu, k= 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7) lần lượt là diện tích pic của dung dịch chuẩn và dung dịch thử tại các thời điểm là 1; 3; 5; 6; 7; 8 và 24 giờ (mAU.s)
- Cc là nồng độ dung dịch chuẩn (µg/ml)
- V1 là thể tích mơi trường có trong ngăn nhận (ml) - V2 là thể tích mơi trường lấy ra tại các thời điểm t (ml) - Sm là diện tích da thử (cm2).
Vẽ đồ thị lượng dược chất giải phóng theo thời gian. Thơng lượng khuếch tán - flux (μg/cm2.giờ) được xác định bằng độ dốc của đường hồi quy tuyến tính Xt từ thời điểm 24 giờ chia cho diện tích màng khuếch tán. Thời gian trễ - tlag là giao điểm của đường hồi quy tuyến tính trên với trục thời gian.