CHƯƠNG 2 : ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.3. Phương pháp nghiên cứu
2.3.3.2. Nghiên cứu độc tính bán trường diễn
• Ngun tắc
Thử nghiệm độc tính bán trường diễn của Sâm báo với liều nhắc lại 28 ngày trên chuột cống trắng được thực hiện dựa trên hướng dẫn của Bộ Y tế [6] và tổ chức OECD TG-407 [43].
• Cách tiến hành:
Chuột cống trắng, cả hai giống được chia thành 3 lô:
Lô chứng: uống nước cất, thể tích 2ml/100g cân nặng chuột.
Lơ thử 1 (cao SB1): uống cao Sâm báo liều 1,35g/kg cân nặng chuột, thể tích 2ml/100g cân nặng chuột.
Lô thử 2 (cao SB2): uống cao Sâm báo liều 2,7g/kg cân nặng chuột, thể tích 2ml/100g cân nặng chuột.
Cho chuột uống Cao Sâm báo và nước cất (đối với lô chứng) vào các buổi sáng từ 8- 10 giờ, 1 lần/ngày, uống liên tục trong 28 ngày. Theo dõi tình trạng chung, xác định trọng lượng cơ thể chuột mỗi tuần, đồng thời điều chỉnh lượng thuốc uống theo cân nặng. Tại thời điểm kết thúc (sau 28 ngày uống thuốc), tiến hành lấy máu tĩnh mạch chân chuột cho vào 2 loại ống nghiệm: ống có chứa chất chống đơng để làm các xét nghiệm huyết học và ống không chứa chất chống đông, để lắng sau đó ly tâm lấy huyết thanh để làm các xét nghiệm hóa sinh.
27
Quy trình xác định độc tính bán trường diễn được thể hiện qua Hình 2.5:
Hình 2.5. Quy trình tiến hành thí nghiệm đánh giá độc tính bán trường diễn của
cao Sâm báo
• Các thơng số đánh giá:
- Tình trạng tồn thân: theo dõi các biểu hiện của của động vật thực nghiệm (tình trạng da, lơng, mắt, sự tiết dịch mũi, miệng, hô hấp, phân, nước tiểu…), hoạt động tự nhiên, tư thế, hành vi, sự tiêu thụ thức ăn, nước uống hàng ngày.
- Đánh giá chức năng tạo máu thông qua: số lượng bạch cầu (WBC), số lượng hồng cầu (RBC), nồng độ hemoglobin (HGB), tỷ lệ hematocrit (HCT), thể tích trung bình hồng cầu (MCV), số lượng tiểu cầu (PLT).
- Đánh giá chức năng gan thông qua định lượng một số enzym: ALT, AST, glucose, cholesterol toàn phần, protein toàn phần.
- Đánh giá chức năng thận thông qua định lượng creatinin trong huyết thanh chuột. - Đại thể các cơ quan: quan sát các cơ quan tim, gan, thận, phổi, lách, tuyến thượng thận; cân khối lượng các cơ quan và và tính tỷ lệ khối lượng cơ quan so với khối lượng cơ thể theo công thức (5):
x = 𝑚
𝑃 x 100% (5) Trong đó:
X (%): tỷ lệ khối lượng của cơ quan so với khối lượng cơ thể m (g): khối lượng cơ quan
P (g): cân nặng chuột.
- Mô bệnh học: sau khi giết động vật thực nghiệm, các mẫu gan và thận được cố định bằng dung dịch Carnoy, vùi trong parafin, cắt các lát mỏng 5 – 7µm, nhuộm hematoxylin – eosin và quan sát dưới kính hiển vi quang học để đánh giá cấu trúc hình thái vi thể gan, thận. Các kĩ thuật làm tiêu bản và quan sát vi thể gan thận được thực hiện tại bộ môn Giải phẫu bệnh, trường Đại học Y Hà Nội.
Uống nước/cao sâm báo hàng ngày Ni thích nghi
Ngày
Theo dõi hàng ngày Cân khối lượng hàng tuần
Lấy máu xét nghiệm.
Đánh giá đại thể và vi thể các cơ quan
28