CHƯƠNG 2 : ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.3. Phương pháp nghiên cứu
2.3.3.1. Nghiên cứu độc tính cấp
• Ngun tắc
Phương pháp đánh giá độc tính cấp được tiến hành theo hướng dẫn của Bộ Y tế [6] cùng với hướng dẫn của Tổ chức hợp tác và phát triển kinh tế (Organization for Economic Cooperation and Development - OECD) – TG420 [44].
• Thiết kế thí nghiệm:
Thử nghiệm được tiến hành qua 2 giai đoạn gồm thử nghiệm thăm dò và thử nghiệm chính thức.
Thử nghiệm thăm dị: Tiến hành trên số lượng chuột hạn chế, sử dụng chuột nhắt
trắng, giống cái, chia thành các nhóm và uống chế phẩm thử với liều tăng dần, nhằm xác định khoảng liều cho thử nghiệm chính thức.
Thử nghiệm chính thức: Sau khi thăm dị trên số lượng chuột hạn chế, động vật thí
nghiệm được chia thành từng lô, mỗi lô 10 động vật. Tùy theo kết quả của thử nghiệm thăm dò để lựa chọn các mức liều cho thử nghiệm chính thức. Thơng thường, thiết kế thí nghiệm với lơ đầu uống liều tối đa không gây chết động vật nào và lô cuối cùng uống liều tối thiểu gây chết toàn bộ động vật. Chuột nhắt trắng được nhịn ăn 4 giờ trước khi thí nghiệm, uống nước tự do. Kiểm tra cân nặng trước khi thử nghiệm. Cho chuột uống
26
mẫu thử với các mức liều đã được xác định từ thử nghiệm thăm dò, mỗi lần cách nhau 2 giờ. Thể tích mỗi lần cho uống là 0,2ml/10g cân nặng chuột.
Cách dùng: Lấy thể tích mẫu thử theo dự kiến và cho chuột uống bằng kim đầu tù. Sau khi uống chế phẩm thử lần cuối 2 giờ, chuột được cho ăn trở lại, uống nước bình thường. Chuột được theo dõi liên tục trong 4 giờ đầu, thường xuyên trong 72 giờ về các biểu hiện hành vi, hoạt động, ăn uống, bài tiết của chuột, số chuột sống chết. Tiếp tục theo dõi trong vịng 14 ngày.
• Thơng số đánh giá:
Theo dõi động vật trong vòng 72 giờ sau khi uống thuốc, ghi chép lại các thơng số sau:
- Tình trạng chung của chuột: hoạt động tự nhiên, tư thế, màu sắc (mũi, tai, đuôi), lông, phân, nước tiểu...
- Sự tiêu thụ thức ăn, nước uống.
- Số động vật chết: xác định tỷ lệ động vật chết trong vịng 72 giờ để tính LD50. - Khi có động vật chết, mổ để quan sát đại thể các cơ quan phủ tạng. Nếu cần, làm thêm vi thể để xác định nguyên nhân.
Tiếp tục theo dõi động vật trong vòng 14 ngày sau khi uống chế phẩm thử.