KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN
3.5.2. Kết quả phân tích sự nhân bản DNA với các cặp mồ
Để tiến hành phân tích và đánh giá sự đa dạng di truyền của các giống hoa cẩm chướng ở mức độ phân tử của 6 dòng đột biến H1, H2, H3, H4, H6, H7 và giống Quận Chúa (ĐC) được nhân bản bằng phương pháp PCR với 20 mồi SSR. Các sản phẩm được điện di trên gel agarose 3,5%.
Bảng 3.24. Thống kê số băng DNA thu được của các mẫu giống cẩm chướng
STT Primer Số lượng vạch xuất hiện Tổng số
băng DNA ĐC H1 H2 H3 H4 H6 H7 1 CB003a 0 1 1 1 1 1 1 6 2 CB004a 1 3 2 1 0 4 3 14 3 CB006a 1 0 1 2 1 1 0 6 4 CB011a 2 2 2 2 2 2 2 14 5 CB016a 1 0 1 2 1 1 1 7 6 CB018a 1 1 1 2 1 1 1 8 7 CB020a 1 1 1 1 0 0 1 5 8 CB026a 1 0 4 3 1 1 1 11 9 CB027a 1 1 0 1 1 1 1 6 10 CB041a 1 1 1 0 1 1 0 5 11 CB047a 1 1 1 1 1 1 0 6 12 CB057a 1 1 1 0 1 1 0 5 13 CDB221 1 1 1 1 1 1 1 7 14 CF003a 1 1 1 1 1 0 1 6 15 DCB109 0 1 1 1 1 1 0 5 16 DCB131 2 0 1 1 2 0 1 7 17 DCB134 1 1 1 0 0 1 0 4 18 DCB135 2 2 2 1 2 2 1 12 19 DCB140 1 1 0 1 1 1 1 6 20 DCB224 1 1 2 2 1 2 1 10 Tổng số băng DNA 21 21 23 21 18 22 14 150
Kết quả phân tích (bảng 3.24) cho thấy với 140 phản ứng PCR nhân lên được tổng số 150 băng với kích thước chiều dài nhỏ nhất khoảng 100bp và băng có kích thước lớn nhất khoảng 1200bp.
3.5.2.1. Kết quả phân tích với mồi CB003a
Kết quả điện di sản phẩm PCR của 6 dòng đột biến và giống Quận Chúa với mồi CB003a cho xuất hiện 1 alen với tổng số 5 băng đơn hình của 5 dòng H1, H2, H3, H4, H6, H7 ở vị trí có kích thước khoảng 200bp. Mẫu ĐC không cho kết quả.
Hình 3.14. Kết quả phân tích với mồi CB003a
3.5.2.2. Kết quả phân tích với mồi CB004a
Kết quả điện di sản phẩm PCR của 6 dòng đột biến và giống Quận Chúa với mồi CB004a cho 8 alen với tổng số 14 băng với kích thước khác nhau (nhỏ nhất là 550bp lớn nhất là 1100bp, trong đó của 2 dòng H4 không cho kết quả, ĐC cho băng đơn hình ở vị trí có kích thước khoảng 1000bp. Dòng H1, H2, H6, H7 cho kết quả đa hình. Đặc biệt dòng H6 cho 4 alen. Kết quả điện di cho thấy 2 dòng H6 và H7 có sự khác biệt cho 2 băng có kích thước lớn vượt qua cả thang chuẩn.
100 bp 200 bp 1000 bp
Hình 3.15. Kết quả phân tích với mồi CB004a
3.5.2.3. Kết quả phân tích với mồi CB006a
Kết quả điện di sản phẩm PCR của 6 dòng đột biến và giống Quận Chúa với mồi CB006a cho 3 loại băng với kích thước khác nhau (nhỏ nhất là 150bp lớn nhất là 220bp, trong đó dòng H1, H7 không cho kết quả, dòng H3 cho băng đa hình, giống ĐC và dòng H2, H6 cho kết quả đơn hình ở vị trí 200bp.
Hình 3.16. Kết quả phân tích với mồi CB006a
3.5.2.4. Kết quả phân tích với mồi CB011a
Kết quả điện di sản phẩm PCR của 6 dòng đột biến và giống Quận Chúa với mồi CB011a, kết quả ở cả giống ĐC và 6 dòng đột biến đều xuất hiện 2 alen với kích thước 200bp và 250bp. Như vậy với mồi CB011a không có sự sai khác giữa các dòng, giống cẩm chướng nghiên cứu.
100 bp 1000 bp 900 bp 500 bp 100 bp 200 bp 300 bp 500 bp 1000 bp
Hình 3.17. Kết quả phân tích với mồi CB011a
3.5.2.5. Kết quả phân tích với mồi CB016a
Kết quả điện di sản phẩm PCR của 6 dòng đột biến và giống Quận Chúa với mồi CB016a cho 3 alen với tổng số 7 băng với kích thước 150bp đến 200bp ở dòng H1 không cho kết quả. Dòng H3 xuất hiện 2 alen.
Hình 3.18. Kết quả phân tích với mồi CB0016a
3.5.2.6. Kết quả phân tích với mồi CB018a
Kết quả điện di sản phẩm PCR của 6 dòng đột biến và giống Quận Chúa với mồi CB018a cho 2 alen với tổng số 8 băng với kích thước 150bp và 200bp, trong đó dòng H3 cho kết quả đa hình đa hình và giống ĐC và dòng H1, H2, H4, H6, H7 cho băng đơn hình.
100 bp 200 bp 300 bp 500 bp 1000 bp 1000 bp 500 bp 100 bp 200 bp 300 bp
Hình 3.19. Kết quả phân tích với mồi CB018a
3.5.2.7. Kết quả phân tích với mồi DCB134
Kết quả điện di sản phẩm PCR của 6 dòng đột biến và giống Quận Chúa với mồi DCB134 cho 2 alen có kích thước 150bp và 200bp với tổng số 4 băng. Trong đó dòng H1, H2, H6, H7 có cùng một loại băng đơn hình khác với giống ĐC. Dòng H3, H4, H7 không có kết quả.
Hình 3.20. Kết quả phân tích với mồi DCB134
3.5.2.8. Kết quả phân tích với mồi DCB224
Kết quả điện di sản phẩm PCR của 6 dòng đột biến và giống Quận Chúa với mồi DCB224 xuất hiện 2 alen với tổng số 9 băng có kích thước 250bp và 150bp. Trong đó dòng H1, H4, H7 có cùng một loại băng đơn hình kích thước 150bp, dòng H2, H3, H6 cho băng đa hình kích thước 250bp và 150bp, giống ĐC cho băng đơn hình kích thước 250bp.
1000 bp 500 bp 200 bp 100 bp 1000 bp 500 bp 100 bp 200 bp
Hình 3.21. Kết quả phân tích với mồi DCB224
3.5.2.9. Kết quả phân tích với mồi DCB109
Kết quả điện di sản phẩm PCR của 6 dòng đột biến và giống Quận Chúa với mồi DCB109, kết quả cho 1 alen có kích thước 150bp với tổng số 5 băng đơn hình. Trong đó giống ĐC và dòng H7 không cho kết quả, dòng H1, H2, H3, H4, H6 cho một băng đơn hình kích thước 150bp.
Hình 3.22. Kết quả phân tích với mồi DCB109
3.5.2.10. Kết quả phân tích với mồi DCB140
Kết quả điện di sản phẩm PCR của 6 dòng đột biến và giống Quận Chúa với mồi DCB140, kết quả cho 1 alen có kích thước 100bp với tổng số 5 băng đơn hình. Trong đó giống ĐC và dòng H1, H2, H3, H4, H6, H7 cho một băng đơn hình, dòng H2 không cho kết quả.
1000 bp 500 bp 300 bp 200 bp 100 bp 1000 bp 500 bp 200 bp 100 bp
Hình 3.23. Kết quả phân tích với mồi DCB140
3.5.2.11. Kết quả phân tích với mồi CB027a
Kết quả điện di sản phẩm PCR của 6 dòng đột biến và giống Quận Chúa với mồi CB027a, kết quả xuất hiện 1alen với tổng số 6 băng băng đơn hình với kích thước khoảng 180bp. Trong đó dòng H2 không cho kết quả, giống ĐC và dòng H1, H3, H4, H6, H7 cho một băng đơn hình kích thước 180bp.
Hình 3.24. Kết quả phân tích với mồi CB027a
3.5.2.12. Kết quả phân tích với mồi CB020a
Kết quả điện di sản phẩm PCR của 6 dòng đột biến và giống Quận Chúa với mồi CB020a, kết quả cho 1 alen có kích thước 150bp với tổng số 5 băng đơn hình. Trong đó giống ĐC và dòng H1, H2, H3, H7 cho một băng đơn hình, dòng H4 và H6 không cho kết quả.
1000 bp 500 bp 100 bp 200 bp 1000 bp 100 bp 200 bp 500 bp 100 bp
Hình 3.25. Kết quả phân tích với mồi CB020a
3.5.2.13. Kết quả phân tích với mồi DCA221
Kết quả điện di sản phẩm PCR của 6 dòng đột biến và giống Quận Chúa với mồi DCB221, kết quả cho 1 alen có kích thước khoảng 170bp với tổng số 7 băng đơn hình.
Hình 3.26. Kết quả phân tích với mồi DCB221
3.5.2.14. Kết quả phân tích với mồi DCB131
Kết quả điện di sản phẩm PCR của 6 dòng đột biến và giống Quận Chúa với mồi DCB131 cho kết quả 2 alen có kích thước 700bp và 340bp với tổng số 7 băng. Trong đó giống ĐC và dòng H4 có cùng một loại băng đa hình, dòng H2, H3, H7 cho băng đơn hình kích thước, dòng H1 và H6 không cho kết quả.
DCB221 1000 bp 1000 bp 500 bp 200 bp 100 bp 1000 bp 500 bp 200 bp 100 bp
Hình 3.27. Kết quả phân tích với mồi DCB131
3.5.2.15. Kết quả phân tích với mồi CB026a
Kết quả điện di sản phẩm PCR của 6 dòng đột biến và giống Quận Chúa với mồi CB026a cho kết quả 5 alen có kích thước nhỏ nhất khoảng 200bp và lớn nhất trên 1000bp với tổng số 11 băng. Trong đó giống ĐC và dòng H6, H7 có cùng một loại băng đơn hình kích thước 200bp, dòng H2, H3 cho băng đa, dòng H1 không cho kết quả. Kết quả cũng cho thấy dòng H2, H3 cho băng có kích thước vượt qua cả thang chuẩn, điều này cho thấy tác nhân gây đột biến đã làm thay đổi rất lớn DNA của 2 dòng này.
Hình 3.28. Kết quả phân tích với mồi CB026a DCB131 1000 bp 700 bp 500 bp 300 bp 400 bp 100 bp 1000 bp 500 bp 200 bp 100 bp
3.5.2.16. Kết quả phân tích với mồi CB047a
Kết quả điện di sản phẩm PCR của 6 dòng đột biến và giống Quận Chúa với mồi CB047a, kết quả cho 1 alen có kích thước khoảng 160bp với tổng số 6 băng đơn hình. Trong đó dòng H7 không cho kết quả, giống ĐC và dòng H1, H2, H3, H4, H6 cho một băng đơn hình.
Hình 3.29. Kết quả phân tích với mồi CB047a
3.5.2.17. Kết quả phân tích với mồi DCB135
Kết quả điện di sản phẩm PCR của 6 dòng đột biến và giống Quận Chúa với mồi DCB135 cho kết quả xuất hiện 2 alen với tổng số 12 băng. Trong đó giống ĐC và dòng H1, H2, H4 và H6 có cùng một loại băng đa hình; dòng H3 cho 1 băng đơn hình kích thước 140bp, dòng H7 cho băng đơn hình kích thước 200bp.
Hình 3.30. Kết quả phân tích với mồi DCB135 CB047a DCB135 1000 bp 500 bp 200 bp 100 bp 1000 bp 500 bp 200 bp 100 bp
3.5.2.18. Kết quả phân tích với mồi CB057a
Kết quả điện di sản phẩm PCR của 6 dòng đột biến và giống Quận Chúa với mồi CB057a, kết quả cho tổng số 5 băng, gồm 1 loại băng đơn hình với kích thước khoảng 130bp. Trong đó dòng H3 và H7 không cho kết quả.
Hình 3.31. Kết quả phân tích với mồi CB057a
3.5.2.19. Kết quả phân tích với mồi CB041a
Kết quả điện di sản phẩm PCR của 6 dòng đột biến và giống Quận Chúa với mồi CB041a, kết quả cho tổng số 5 băng, gồm 1 loại băng đơn hình với kích thước khoảng 150bp. Trong đó dòng H3 và H7 không cho kết quả.
Hình 3.32. Kết quả phân tích với mồi CB041a CB057A 1000 bp 100 bp 200 bp 500 bp 1000 bp 500 bp 100 bp 200 bp
3.5.2.20. Kết quả phân tích với mồi CF003a
Kết quả điện di sản phẩm PCR của 6 dòng đột biến và giống Quận Chúa với mồi CF003a, kết quả cho tổng số 6 băng đơn hình với kích thước khoảng 130bp. Trong đó dòng H6 không cho kết quả.
Hình 3.33. Kết quả phân tích với mồi CF003a