VI. Các ng d ng ụ
2. Nguyên t cắ
Kỹ thu t RAPD d a trên kỹậ ự thu t PCR, b ng cách sậ ằ ử d ng nh ngụ ữ
primer ng n (kho ng 10 nucleotide) cĩắ ả trình tự bi t trế ước, b t c pắ ặ
và nhân b n ng u nhiên nh ngả ẫ ữ đo n DNA cĩạ trình tự bổ sung v i trìnhớ
tự c a các primer. Cácủ đo n m i oligonucleotide n u b t c p ng u nhiênạ ồ ế ắ ặ ẫ
v i cớ ả hai m chạ đ i di n c a m ch khuơn DNA trong kho ng cáchố ệ ủ ạ ả
cĩ thể khu chế đ iạ được (dưới 3000bp) sẽ cho ra nh ngữ đo n DNA cĩạ kích thước khác nhau sau khi khu chế đ i. Sạ ự cĩ m t c a các s n ph m DNAặ ủ ả ẩ
khác nhau ch ng tứ ỏ đã cĩ m t sộ ự tương đ ng hồn tồn hay m t ph nồ ộ ầ
gi a DNA bữ ộ gen và m i. Các m i dùng trong RAPD thồ ồ ường ng n vìắ v yậ
dễ dàng tìm được các đo n tạ ương đ ng trên m chồ ạ đ n DNA bơ ộ gen.
Do đĩ tính đa d ng thuạ được nhờ RAPD là đáng tin c y, vìậ khi cĩ sự thay đ i m t base nitổ ộ ơ nào đĩ thì nĩ sẽ ngăn c n vi c ti p h p gi aả ệ ế ợ ữ
m i vàồ DNA m ch khuơn. Sạ ự m tấ đo n nhi m s c thạ ễ ắ ể ho c sặ ự thêm
b tớ đi m g n m i cũng nhể ắ ồ ư sự xen vào c a m t gen nàoủ ộ đĩ sẽ làm thay đ iổ
kích thước đo n DNAạ được khu chế
Dùng nhi u primer khác nhau sẽề khu chế đ i nhi uạ ề đo n gen v iạ ớ
kích thước khác nhau, k t quế ả này được thể hi n trên gel v i nhi u băngệ ớ ề
(band) ở nh ng vữ ị trí khác nhau, các băng đa hình được ghi nh nậ
và từ đĩ cĩ thể vẽ được b nả đồ trên m t qu n thộ ầ ể đang phân ly.
Sinh v t cùng lồi sẽậ cĩ ki u gen hồn tồn gi ng nhau,ể ố
sẽ khuy chế đ i cácạ đo n DNA cĩạ kích thước gi ng nhau khi số ử d ng b tụ ấ
kỳ m i ng u nhiên nàoồ ẫ để ch y PCR. Sinh v t khác nhauạ ậ ít nhi u sẽề khác nhau về ki u gen _ể đa d ng vạ ề sinh h c, thìọ v i m t sớ ộ ố m i ng u nhiênồ ẫ
nào đĩ các đo n DNA đạ ược khuy chế đ i sẽạ cĩ kích thước khác nhau. M iồ
Là đo n ng n oligonucleotideạ ắ đ n (10 nu)ơ đượ ổc t ng h p m t cáchợ ộ
ng u nhiên, cĩẫ hàm lượng G+C từ 60-70%, và khơng cĩ đ u tầ ự bổ sung.
Để tìm sự khác bi t gi a các lồi, ngệ ữ ười ta thường sử d ng m tụ ộ
số lượng l n các m i ng u nhiên.ớ ồ ẫ
Trên thị trường hi n nay cĩệ r t nhi u m i ng u nhiênấ ề ồ ẫ được t ngổ
h p nhân t o.ợ ạ