V t thy tinh, nha ự
3.K IM TRA CH ỂẤ ƯỢNG MU Ẫ
3.1/Đo OD đ i v i m u vi khu n vàố ớ ẫ ẩ tơm
L y 100ml nấ ước khử ion vơ trùng vào cuvet 100ml, đo đ i ch ng.ố ứ
Hồ 10ml d ch ADN c nị ầ đo vào 90ml n c khớ ử ion vơ trùng, b m vàoơ
cuvet, đo ở bước sĩng 260nm, 280nm Đ cọ độ h p thấ ụ trên máy đo quang phổ ở bước sĩng 260 nm, 280 nm. Xử lý số li uệ
3.2Đi n diệ đ i v i m u láố ớ ẫ
Khay đi n diệ được đ t lặ ược s nẳ ở m tộ đ u khay. Sầ ử d ng lụ ược cĩ số răng là 17. Khay được đ tặ ở n i b ng ph ng.ơ ằ ẳ
Gel sử d ng ch yụ ạ đi n di lá:ệ 40ml v i n ngớ ồ độ 1% agrarose.
Trước tiên cân 0,4g agrarose cho vào chai th y tinh, sauủ đĩ cho vào chai 50ml Bufer TE, trừ hao trong quá trình n u b c h i h t 10ml. L c chaiấ ố ơ ế ắ
cho agrarose hịa tan vào Buffer TE, sau đĩ đem n u trong microwave trongấ
2 phút ở 450W (n u cho agrarose hịa tan hồn tồn vàấ trong như nu c),ớ
agrarose sau khi n u xongấ để ngu i kho ng 60ộ ả oC r iồ đổ nhẹ dung d ch vàoị
m tộ đ u khay dung d ch sẽầ ị tự tr iả đ u khay. Kho ng 45 phút sau gelề ả đ cặ
l i, ta dùng tay l y lạ ấ ược ra nh ng ph i c n th n tránh bư ả ẩ ậ ị bể gel.
Đ t khay vào bặ ể đi n di, thêm dung d chệ ị đi n di phệ ủ m t gel kho ngặ ả
Sau khi gel chu n bẩ ị xong, ta ti n hành load m u vào các gi ng c aế ẫ ế ủ
gel
+ Load m u:ẫ
Đ u tiên hút dung d ch loading buffer (m t dung d ch t i DNA ch aầ ị ộ ị ả ứ
30% glycerol, 0,25% bromophenol blue (BPB) và 0,25% xylencyanol (XC), trong thành ph n cĩầ ch a glycerol cĩứ tỷ tr ng cao sẽọ kéo DNA n m trongằ
gi ng khơng bế ị trơi ra ngồi trong khi load m u) vàẫ nhỏ thành t ng gi từ ọ
nhỏ kho ng 2ml ra gi y paraflim, sau đĩ hút 10ml dung d ch m uả ấ ị ẫ
tr nộ đi u v i dung d ch loading buffer vàề ớ ị ti n hành load m u vào gi ngế ẫ ế
c a gel. B tủ ắ đ u load tầ ừ gi ng thế ứ 2, gi ng thế ứ nh t dùngấ để load thang chu n.ẩ
Sau khi load xong ta đ y n p bậ ấ ể đi n di l i vàệ ạ ti n hành ch yế ạ đi nệ
di. Th i gian đi n di thayờ ệ đ i phổ ụ thu c vàoộ độ l n c a DNA,ớ ủ
n ngồ độ agarose c a gel vàủ cường độ dịng đi n. Sau khi ch yệ ạ đi n di xongệ
b n gelả đượ ấc l y nhẹ ra kh i khuơn gel vàỏ ngâm vào dung d ch EtBr trongị
th i gian 30 phút cĩờ tác d ngụ đánh d u phân tấ ử DNA, hĩa ch t này cĩấ
khả năng g n xen vào gi a các base c a nucleic acid vàắ ữ ủ sẽ phát huỳnh quang dưới tác d ng c a tia tụ ủ ử ngo i. Sauạ đĩ r a s ch b n gel b ng nử ạ ả ằ ước c t.ấ
Quan sát và ch p hình: B n gelụ ả được quan sát dưới ánh sáng tử ngo iạ λ = 260-360 nm trên bộ đ c gel bio-rad. Quan sát th yọ ấ
ADN hi n lên dệ ướ ại d ng các v ch sáng.ạ
4.K T QUẾ Ả VÀ TH O LU NẢ Ậ 4.1/K t quế ả
K t quế ả đo OD các m u DNA.ẫ
OD
M uẫ OD260 0 OD260/OD28 DNA (ng/µl)N ng đồ ộ
Tơm 2.5825 1.9888 1291.25