- Tỷ lệ bờ nghộ cú những biểu hiện lõm sàng của bệnh cầu trựng.
- Sự thay đổi một số chỉ số huyết học của bờ, nghộ bị bệnh cầu trựng.
2.3.3. Nghiờn cứu biện phỏp phũng, trị cầu trựng cho bờ, nghộ
- Xỏc định cụng thức ủ phõn nhiệt sinh học cú khả năng sinh nhiệt tốt
để diệt Oocyst cầu trựng bờ, nghộ.
- Nghiờn cứu tỏc dụng của thuốc trị cầu trựng bờ, nghộ.
- Bƣớc đầu đề xuất quy trỡnh phũng, trị bệnh cầu trựng cho bờ, nghộ.
2.4. BỐ TRÍ THÍ NGHIỆM VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIấN CỨU
2.4.1. Bố trớ điều tra và phƣơng phỏp xỏc định tỡnh hỡnh nhiễm cầu trựng ở bờ, nghộ ở bờ, nghộ
2.4.1.1. Bố trớ thu thập mẫu phõn
Bố trớ thu thập mẫu theo phƣơng phỏp lấy mẫu chựm nhiều bậc, thu thập và xột nghiệm phõn của 1516 bờ, nghộ dƣới 1 năm tuổi tại 3 huyện của tỉnh Bắc Giang.
Việc thu thập, xột nghiệm mẫu phõn bờ, nghộ ở 3 huyện đƣợc bố trớ cụ thể nhƣ sau:
Địa phƣơng (huyện, xó) Số bờ, nghộ xột nghiệm phõn (con) Yờn Thế Bố Hạ 121 An Thƣợng 127 Canh Nậu 131 Đồng Hƣu 125 Tõn Yờn Lam Cốt 124 Việt Ngọc 126 Ngọc Chõu 119 Phỳc Sơn 134 Yờn Dũng Lóo Hộ 125 Tõn Mỹ 116 Hƣơng Giỏn 129 Tõn An 139 Tớnh chung 1516
2.4.1.2. Phƣơng phỏp định loài và xỏc định tỡnh hỡnh nhiễm cầu trựng ở bờ, nghộ
* Phương phỏp định loại cầu trựng
- Định loài cầu trựng theo khoỏ định loài của Ajayi J. A. (2004) [52], Daugschies A., Njadrowski M. (2005) [55] và Levine N. (Ed) (1985) [75], dựa trờn 2 căn cứ:
- Thời gian Oocyst sản sinh bào tử ở ngoại cảnh:
Đƣa Oocyst cầu trựng đó thu nhận đƣợc vào dung dịch Bicromate kali
2,5%, lắc nhẹ thƣờng xuyờn và theo dừi sự phỏt triển của Oocyst cầu trựng.
Ghi lại thời gian Oocyst phỏt triển thành Oocyst cú sức gõy bệnh.
* Phương phỏp lấy mẫu, xột nghiệm và đỏnh giỏ cường độ nhiễm cầu trựng
- Phƣơng phỏp thu thập mẫu: Lấy mẫu theo phƣơng phỏp lấy mẫu chựm nhiều bậc.
Mẫu phõn: Thu thập ngẫu nhiờn ở bờ, nghộ nuụi ở nụng hộ, trại tập thể và gia đỡnh. Lấy mẫu phõn trực tiếp từ trực tràng con vật. Để riờng mỗi mẫu phõn vào một tỳi nilon nhỏ, mỗi tỳi đều cú nhón ghi: loại gia sỳc (bờ, nghộ), địa điểm, tuổi, trạng thỏi phõn, thời gian lấy mẫu và cỏc biểu hiện lõm sàng của bờ, nghộ (những thụng tin này cũng đƣợc ghi vào nhật ký đề tài). Trong quỏ trỡnh lấy mẫu, căn cứ vào yếu tố cần xỏc định cú liờn quan đến đặc điểm dịch tễ để lấy mẫu cho tƣơng đối đồng đều về cỏc yếu tố khỏc.
Cỏc mẫu đƣợc xột nghiệm ngay trong ngày (hoặc bảo quản ở nhiệt độ 2 - 4o
C và xột nghiệm trong thời gian khụng quỏ 3 ngày).
* Phương phỏp xỏc định tỷ lệ và cường độ nhiễm cầu trựng
- Phƣơng phỏp xỏc định tỷ lệ nhiễm cầu trựng: Tất cả cỏc mẫu phõn bờ,
nghộ đều đƣợc xột nghiệm bằng phƣơng phỏp Fulleborn với dung dịch muối
NaCl bóo hũa, tỡm Oocyst dƣới kớnh hiển vi (độ phúng đại x 100 và x 400).
- Phƣơng phỏp xỏc định cƣờng độ nhiễm cầu trựng: Cƣờng độ nhiễm cầu trựng đƣợc xỏc định bằng số lƣợng Oocyst/g phõn (đếm trờn buồng đếm
Mc.Master), nhƣ mụ tả của Nguyễn Thị Kim Lan và cs (2008) [15].
- Phƣơng phỏp làm: Cõn 4 gam phõn vào cốc thủy tinh, thờm 56 ml
1 cốc khỏc và khuấy đều. Trong khi khuấy, lấy cụng tơ hỳt hỳt lấy dung dịch phõn nhỏ đầy cả hai buồng đếm Mc. Master (mỗi buồng đếm cú dung tớch 0,5 ml). Để yờn 5 phỳt rồi kiểm tra dƣới kớnh hiển vi (độ phúng đại 10 x 10).
Đếm toàn bộ số Oocyst trong những ụ của hai buồng đếm, rồi tớnh theo
cụng thức:
Số Oocyst/gam phõn =
Tổng số Oocyst ở 2 buồng đếm x 60
4
(tổng số Oocyst ở 2 buồng đếm là số Oocyst cú trong 1 ml dung dịch phõn).