Chương 3: SẮC KÍ LỎNG
3.4.3.2. Phát triển một pha động để cải thiện độ chọn lọc
Khi phát triển một phép tách, mục tiêu đầu tiên là tìm cho được một cặp dung môi tốt nhất. Nhưng thỉnh thoảng việc trộn hai dung môi như cách chọn trên không tạo pha động có thể tách tốt. Vì thế cần phải thử một dung dịch hỗn hợp mới, ví dụ nếu hỗn hợp metanol/nước không cho phép tách tốt như mong đợi thì có thể nghĩ đến hỗn hợp acetonitril/nước, hoặc một hỗn hợp dung môi hữu cơ khác/nước.
Nói chung nếu metanol khơng thích hợp thì chọn lựa tiếp theo là acetonitril. Các pha động có lực rửa giải giống nhau được gọi là các isoeluotropic. Khi sửdung các pha động isoeluotropic thay thế thì có thể tăng cường độ chọn lọc của những hợp chất có cùng giá trịk’ khi pha động là dung dịch hỗn hợp được chọn lúc ban đầu, nghĩa là có thể tách được chúng.
Đôi khi một hỗn hợp hai dung môi không thểgiúp phép tách đạt được. Trong trường hợp này hỗn hợp 3 dung mơi là hữu ích. Có nhiều tài liệu về việc sử dụng nhiều hơn một dung môi hữu cơ cho pha động để đạt được độ chọn lọc. Cũng có nhiều phần mềm trợ giúp phát triển các pha động sử dụng tới 4 dung mơi trộn lẫn (ví dụ metanol/acetonitril/ tetrahydrofuran/nước).
Tuy nhiên, các pha động sử dụng ba dung môi không phải xảy ra phổ biến, thực tế chỉ cần đến chúng cho những trường hợp rất khó khăn trong việc tách và thường đòi hỏi sự trợ giúp của những chương trình máy tính.
Hình 3.5: Tối ưu hóa phép tách HPLC sử dụng các pha động có thành phần thay đổi. Các pic: (1) paracetamol, (2) caffein, (3) aspirin, (4) phenacetin, sử dụng cột C18, 5μm,
detection 235 nm.