CHƯƠNG 3 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.2. PHÂN LẬP CÁC HỢP CHẤT HỮU CƠ TỪ CAO ETHYL ACETATE
3.2.2. Khảo sát phân đoạn DTE3
Sắc ký cột silica gel phân đoạn DTE3 (123mg), nạp silica gel vào cột ở
dạng sệt (dung môi n-hexane) và nạp mẫu chất vào cột theo phương pháp khô. Ban đầu sắc ký cột với dung môi n-hexane 100%, sau đó đến hệ n-hexane :
Cao Ethyl acetate (10 gam) Sắc ký cột silica gel DTE1 m = 112 mg DTE2 m = 70 mg DTE3 m = 123 mg DTE4 m = 93 mg DTE5 m = 712,5 mg DTE6 m = 153,7 mg DTE7 m = 1,27 g DTE8 m = 3 g
ethyl acetate có tỉ lệ ethyl acetate tăng dần. Dung dịch ra khỏi cột được hứng vào các ống nghiệm có đánh số thứ tự (mỗi ống nghiệm hứng khoảng 10ml). Tiến hành sắc ký lớp mỏng dung dịch trong các ống nghiệm với dung mơi
phù hợp, sau đó hiện hình các vết bằng thuốc thử Vanilin/H2SO4 đặc và hơ
nóng, những ống nghiệm có sắc ký lớp mỏng giống nhau được gom chung lại thành một phân đoạn nhỏ, cô quay đuổi dung môi và xác định khối lượng của chúng. Sau đó sắc ký lớp mỏng lại các phân đoạn trên, hiện hình các vết bằng thuốc thử Vanilin/H2SO4 đặc, kết quả được trình bày trong Bảng 3.4.
Bảng 3.4. Kết quả sắc ký cột silica gel phân đoạn DTE3
Kết quả SKLM Phân đoạn Dung môi SKC STT ống nghiệm Khối
lượng Dung môi
SKLM Rf Ghi chú DTE3.0 H 100% đến H:E=100:4 3.1 – 3.34 H:E=10:1 Khơng có vết
DTE3.1 H:E=100:5 3.35–3.55 17mg H:E=10:1
1 vết tím đậm có Rf=0,2 1 vết bẩn nhạt phía trên Có chất sạch
DTE3.2 H:E=100:5 3.56–3.63 25mg H:E=10:1
2 vết trịn
đậm có
Rf=0,2 và Rf=0,4 Trong đó: H: n-hexane E: ethyl acetate
Hình 3.5. Sắc ký lớp mỏng 3.35 – 3.55
Dung môi sắc ký lớp mỏng n-hexane : Etthyl acetate = 10:1 Hiện hình bằng thuốc thử Vanilin/H2SO4 đặc
Phân đoạn DTE3.1 được rửa bằng methanol, ta thu được hai phần: Phần
không tan trong methanol (DTE3.1A), phần tan trong methanol (DTE3.1B). Phần DTE3.1A thử hòa tan trong dichlomethan (CH2Cl2) thì thấy tan hoàn toàn. Sắc ký lớp mỏng DTE3.1A và DTE3.1B, dung môi sắc ký lớp mỏng n- hexane : Etthyl acetate = 8 : 2, hiện hình bằng thuốc thử Vanilin/H2SO4 đặc.
Hình 3.6. SKLM DTE3.1A và DTE3.1B Hình 3.7. SKLM DTE3.1A
Kết quả cho thấy phần DTE3.1A đã thu được chất sạch kí hiệu là
DTE3.I. Cô quay đuổi dung môi thu được chất rắn màu trắng có khối lượng
và hơ nóng cho vết màu tím (khơng hiện UV) có Rf = 0,5, rộng 0,3 cm, cao 0,4 cm.
Tiến hành SKLM so sánh DTE3.I với chất chuẩn β-sitosterol, dung môi SKLM n-hexane : Etthyl acetate = 8 : 2, kết quả cho thấy hai chất này đều
hiện vết màu tím trên bản mỏng sau khi phun thuốc thử Vanilin/H2SO4 đặc
(khơng hiện UV), đều có Rf = 0,5.
Đo phổ 1H – NMR (500 Hz, CDCl3 ), 13C – NMR (125 MHz, CDCl3) của DTE3.I để xác định cấu trúc.