PHẦN 4 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
4.3. KẾT QUẢ RT – PCR CHẨN ĐOÁN PED
Dựa vào một số triệu chứng lâm sàng của bệnh PED trên lợn nói chung: Lợn mệt mỏi, ủ rũ; lười bú; bỏ ăn, giảm ăn; lợn ỉa chảy, phân lỗng, tanh, vàng. Chúng tơi tiến hành mổ khám 34 lợn Mán con nghi mắc và lấy mẫu từ phân, ruột và hạch ruột để làm phản ứng RT – PCR.
Sản phẩm RNA của virus thu được sau khi chiết tách từ bệnh phẩm (phân, ruột, hạch ruột) bằng kít tách chiết QIAgen sẽ được khuếch đại bằng kĩ
thuật RT – PCR với sự tham gia của enzym sao chép ngược (Reverse Transcription) và sử dụng cặp mồi một phần gen S cho phép xác định đoạn gen của virus PED có kích thước 651bp.
Sản phẩm sau khi khuếch đại được điện di và chụp ảnh. Kết quả của phản ứng RT – PCR xác định sự có mặt của PEDV được thể hiện ở bảng 4.8.
Từ kĩ thuật RT – PCR với kết quả này chúng tơi có thể khẳng định sự có mặt của virus PED tại các trại đang nghiên cứu. Phương pháp này cho phép chẩn đốn nhanh với độ chính xác cao.
Kết quả dương tính với phản ứng RT – PCR được thể hiện ở ảnh sau:
Kết quả chạy điện di của phản ứng RT – PCR đối với 3 mẫu bệnh phẩm dương tính. Gen được khuếch đại: một phần gen S (651 bp).
Mồi: PS1, PS2. Thang chuẩn M 100bp. Giếng 1: mẫu phân của lợn Mán nghi PED. Giếng 2: mẫu ruột của lợn Mán nghi mắc PED. Giếng 3: mẫu hạch ruột của lợn Mán nghi mắc PED. Giếng 4: đối chứng âm (huyết thanh âm tính với PED) Giếng 5: đối chứng dương (chủng virus PED vacxin)
Kết quả điện di kiểm tra sản phẩm cho thấy: từ giếng 1 cho đến giếng 3 và giếng 5 có vạch phát sáng điều này có nghĩa là 3 mẫu bệnh phẩm được chạy RT
651bp
– PCR đều có virus PED trong đó. Sản phẩm điện di cho vạch DNA tương ứng với 651 bp đúng theo thiết kế của đoạn mồi.
Kỹ thuật RT-PCR được sử dụng trong nghiên cứu này đã được chứng minh kiểm tra dễ dàng, nhanh chóng, chính xác để phát hiện các virus từ mẫu bệnh phẩm, cung cấp một phương pháp thực tiễn cho việc chẩn đốn nhanh chóng nguyên nhân gây bệnh, một cơng cụ hữu ích và thiết thực cho việc phát hiện nhiễm virus trong mẫu bệnh phẩm.
Như vậy kết quả cho thấy các trại nghiên cứu dương tính với PEDV trên lợn Mán đúng như bệnh PED đã từng được nghiên cứu ở các nghiên cứu trước. Khi làm phản ứng RT – PCR chúng ta lấy mẫu phân, ruột, hạch ruột sẽ cho kết quả tốt.
Kết quả của phản ứng RT – PCR xác định sự có mặt của PEDV được thể hiện ở các bảng 4.8.
Bảng 4.8. Kết quả phản ứng RT – PCR chẩn đoán PED của lợn Mán tại Hà Giang
Mẫu Ruột Phân Hạch ruột
Vị Xuyên Số mẫu 12 12 12 9 Số mẫu (+) 9 6 Tỷ lệ % 75,0 50,0 75,0 Bắc Quang Số mẫu 11 11 11 Số mẫu (+) 10 6 8 Tỷ lệ % 90,9 54,5 72,7 Hồng Su Phì Số mẫu 11 11 11 Số mẫu (+) 8 6 8 Tỷ lệ % 72,7 54,5 72,7 Tổng hợp Số mẫu 34 34 34 Số mẫu (+) 27 18 25 Tỷ lệ % 79,4 52,9 73,5
Kết quả bảng 4.8. cho thấy rằng mẫu chiết tách RNA từ phân, ruột, hạch ruột của 34 con lợn Mán được mổ khám trong nghiên cứu thu thập ở các trại nghi mắc PED cho kết quả dương tính với PEDV, dao động trong khoảng từ 50,0%
đến 90,9%. Trong đó, tỷ lệ dương tính cao ở các mẫu lấy từ ruột 79,4%, hạch ruột là 73,5%, mẫu phân có tỷ lệ dương tính thấp hơn với 52,9%.