2.2.1.2. Phương pháp chiết fucoidan bằng dung dịch HCl (pH:2-3)
Phương pháp chiết fucoidan từ rong nâu bằng dung dịch axit HCl (pH:2-3) được thực hiện theo Bản quyền của Nga (Patent WO 2005/014657) [19]. Rong nâu được xử lý loại các hợp chất màu và chất béo tương tự như sơ đồ được nêu tại Hình 2.2. Mẫu rong đã loại chất béo được chiết với dung môi axit HCl (pH=2), tỉ lệ w/v = 1:20, giữ ở nhiệt độ 60 oC trong thời gian 3 giờ (3 lần). Dịch chiết được gom lại và lọc qua vải lọc, sau đó trung hịa với NaHCO3 đến pH=6-7 và cô quay chân không ở nhiệt độ 60 oC, sau đó thẩm tách loại muối bằng màng 10kDa. Dịch chiết sau khi làm sạch được cơ đặc đến 1/10 thể tích ban đầu và được kết tủa với 4 lần thể tích EtOH 96% hoặc đơng khơ thu được bột polysaccharide có chứa fucoidan thơ. Sơ đồ chiết được trình bày trên Hình 2.3.
Dịch chiết fucoidan Dịch chiết rong
Fucoidan thô Rong đã loại chất béo
Rong khô
Polyphenol, chất màu, các hợp chất có trọng lượng phân tử thấp
Bã rong
Muối, kim loại nặng, các hợp chất có trọng lượng phân tử <10kDa
Chiết với (Cồn, Aceton, Chloroform) Tỉ lệ w/v=1/10, 10-15 ngày
Chiết với HCl, pH=2, 60 oC, t = 3 giờ (3 lần)
Trung hịa với NaHCO3 8%, cơ đặc thẩm tách bằng màng 10kDa
Tủa với 3-4 lần thể tích cồn 96% hoặc đơng khơ
Hình 2. 3. Sơ đồ chiết fucoidan từ rong nâu
theo Bản quyền của Nga (Patent WO 2005/014657) [19].
2.2.1.3. Phương pháp chiết fucoidan bằng dung dịch CaCl2 2%
Phương pháp chiết fucoidan từ rong nâu bằng dung dịch CaCl2 2% được thực hiện theo phương pháp của Bilan và cộng sự [54]. Rong nâu được xử lý ở nhiệt độ phòng với hỗn hợp MeOH:CHCl3:H2O tỷ lệ 4:2:1 để loại bỏ các chất màu, lọc rửa với aceton, sấy khô. Rong sau khi sấy khô được chiết với CaCl2 2% (3 lần), mỗi lần dung dịch được khuấy trộn ở 85 oC trong 3 giờ. Dịch chiết 3 lần được gom lại, sau đó được thẩm tách loại muối bằng màng 10kDa và được kết tủa với 4 lần thể tích EtOH 96% thu được bột polysaccharide. Sơ đồ chiết được trình bày trên Hình 2.4.
Dịch chiết fucoidan Dịch chiết rong
Fucoidan thô Rong đã loại chất béo
Rong khô
Polyphenol, chất màu, các hợp chất có trọng lượng phân tử thấp
Bã rong
Muối, kim loại nặng, các hợp chất có trọng lượng phân tử <10kDa
Chiết với (MeOH:CHCl3:H2O=4:2:1)
Chiết với CaCl2 2%, 85 oC t = 3 giờ (3 lần)
Cô đặc, thẩm tách bằng màng 10kDa
Tủa với 3-4 lần thể tích cồn 96%
Hình 2. 4. Sơ đồ chiết fucoidan từ rong nâu
bằng dung dịch CaCl2 2% [54].
2.2.1.4. Phương pháp chiết fucoidan có sự hỗ trợ của enzyme
Phương pháp chiết fucoidan từ rong nâu có sự hỗ trợ của enzyme được thực hiện theo phương pháp của Thuan và cộng sự [55]. Rong nâu được xử lý loại các hợp chất màu và chất béo tương tự như sơ đồ được nêu tại Hình 2.2. Mẫu rong đã loại chất béo được xay nhỏ, bổ sung đệm acetate pH=4,5 có chứa 1% Viscozyme. Bình chiết được cho vào tủ ấm lắc với nhiệt độ 40 oC trong vòng 6 giờ. Tiến hành chiết lặp lại ba lần, dịch chiết được gom lại, cho thêm tiếp dung dịch CaCl2, lắc đều và ly tâm với tốc độ 5000 vòng/phút trong 10 phút để loại bỏ kết tủa. Dịch chiết sau đó được cơ đặc qua màng 10kDa, được kết tủa với 4 lần thể tích EtOH 96% thu được bột polysaccharide. Sơ đồ chiết được trình bày trên Hình 2.5.
Dịch chiết fucoidan Dịch chiết rong
Fucoidan thô Rong đã loại chất béo
Rong khô
Hợp chất màu, chất béo có trọng lượng phân tử thấp
Bã rong
Muối, kim loại nặng, các hợp chất có trọng lượng phân tử <10kDa
Chiết với (Cồn, Aceton, Chloroform) Tỉ lệ w/v=1/10, 10-15 ngày
Chiết với đệm acetate pH=4,5; 40 oC, Bổ sung 1% viscozyme; t = 6 giờ (3 lần)
Dung dịch CaCl2, ly tâm 5000 vịng/phút
Cơ đặc, thẩm tách bằng màng 10kDa Tủa với 4 lần thể tích cồn 96%