- Vacxin nhũ dầu cúm gia cầm chủng NIBRG14 do Viện Công nghệ sinh họcthuộc Viện Khoa học và Công nghệ Việt Nam sản xuất
2. Kỹ thuật chiết tách ARN (bộ kit Qiagen RNeasy) làm phản ứng RRT-PCR
Các mẫu bệnh phẩm như mô, phủ tạng của gia cầm nghi mắc cúm ựược nghiền, pha 1/10 với dung dịch PBS pH 7,0 - 7,4 rồi ly tâm ở 1.000 vòng trong 10 phút lấy dịch nổi ựể chiết tách ARN. Mẫu dịch ngoáy hoặc dịch niệu mô thu hoạch sau khi tiêm trứng chỉ cần ly tâm như trên rồi lấy dịch nổi chiết tách. Kỹ thuật chiết tách bằng bộ kit Qiagen RNeasy thực hiện theo hướng dẫn của nhà sản xuất như sau:
- Nhỏ 200 ộl dịch nghiền mô (hoặc 500 ộl dịch swab) vào ống ly tâm 1,5 ml cùng với 500ộl Buffer RLT có bổ sung1% β-ME, lắc ựều trên máy Votex rồi ly tâm nhẹ.
- Thêm 500ộl cồn Ethanol 70% vào ống, lắc mạnh bằng máy Votex rồi ly tâm nhẹ.
- Chuyển tất cả dịch nổi sang cột lọc RNeasy Qiagen, ly tâm trong 15 giây với tốc ựộ ≥ 8.000 vòng ở nhiệt ựộ phòng.
- Nhỏ 700 ộl dung dịch rửa 1 (RW1 buffer) vào cột lọc RNeasy Qiagen, ly tâm trong 15 giây ở tốc ựộ ≥ 8.000 vòng, thay ống thu mới vào cột lọc.
- Nhỏ 500 ộl dung dịch rửa RPE buffer vào cột lọc và ly tâm trong 15 giây ở tốc ựộ ≥ 8.000 vòng, thay ống thu mới, lặp lại 2 lần với dung dịch rửa RPE buffer.
- Thay ống thu mới, ly tâm cột lọc và ống thu trong 2 phút ở tốc ựộ tối ựa, bỏ ống thụ
- đặt cột lọc vào ống thu ARN, nhỏ 50 ộl RNase free H2O vào cột lọc, ủ ở nhiệt ựộ phòng trong ắt nhất 1 phút. Tách ARN bằng cách ly tâm trong 1 phút ở tốc ựộ ≥ 8.000 vòng, bỏ cột lọc, giữ lại dịch trong ống thu ARN.
- Bảo quản mẫu ARN thu ựược ở 4oC trong thời gian ngắn trước khi làm RRT-PCR, nếu sau 24 giờ, nên bảo quản mẫu ở - 20oC hoặc nhiệt ựộ thấp hơn.