CHƯƠNG 2 : NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.3. Phương pháp nghiên cứu
2.3.7. Phương pháp đánh giá khả năng sinh enzyme cellulase
a. Nguyên tắc của thử nghiệm
Mục đích là để xác định xem vi khuẩn có khả năng sản sinh ra enzyme cellulase thủy phân cellulose thành glucose hay không?
b. Cơ sở sinh hóa
Cellulase C1 cịn được gọi là exocellulase (exobiohydrolase; 1,4-α-D-glucan cellobiohydrolase). Enzyme này thủy phân đặc hiệu liên kết α -1,4-glucoside ở đầu không khử của chuỗi cellulose hoặc các cellodextrin để giải phóng cellobiose (cấu trúc gồm 2 phân tử D-glucose nối với nhau bằng liên kết α -1,4-glucoside). Enzyme này khơng có khả năng phân giải cellulose ở dạng kết tinh mà chỉ làm thay đổi tính chất lý hóa, giúp cho enzyme endocellulase phân giải chúng.
Cellulase Cx còn được gọi là endocellulase (endoglucanase; 1,4-β-D-glucan-4- glucanohydrolase). Enzyme này thủy phân liên kết α-1,4-glucoside ở vị trí ngẫu nhiên trong chuỗi cellulose, chuỗi cellodextrin và các dẫn xuất cellulose như CMC và HEC. Chúng tham gia tác động mạnh đến cellulose vơ định hình, tác động yếu đến cellulose kết tinh.
α -glucosidase (cellbiase; α -D-glucoside glucohydrolase) khơng có khả năng phân hủy cellulose nguyên thủy mà tham gia phân hủy cellobiose, cellodextrin tạo thành D- glucose.
c. Cách tiến hành thí nghiệm
Tiến hành chuẩn bị dịch vi khuẩnB.velezensisnhư trên.
Trên đĩa môi trường CMC, tiến hành đục các lỗ có đường kính 7mm. Sau đó gắpcác khối thạch chứa sinh khối vi khuẩn vào các lỗ trên đĩa môi trường khảo sát. Đem ủ ở nhiệt độ 370C trong 24 giờ.
Sau đó nhỏ lugol vào và đọc kết quả.
d. Đọc kết quả
Thử nghiệm ( + ): không xuất hiện màu nâu xung quanh điểm cấy.