Tên mẫu/ kênh đọc Mean 1SD 2SD
TEB101(HPV16)/HEX 21,4 1,1 2,2
B252(HPV18)/Cy5 34,1 2 4
B252(HPV52)/FAM 23,3 0,2 0,4
Mean - Giá trị trung bình; SD – Độ lệch chuẩn
Hình 3.17A
Hình 3.17B
Hình 3.17C
Mean - Giá trị trung bình; SD – Độ lệch chuẩn
Hình 3.17 Biến động giá trị Ct của thí nghiệm đánh giá hệ số lặp lại
(Hình 3.17 A, B, C tương ứng với các kênh HEX, Cy5 vàFAM)
Trong cả 3 lần lặp lại trong 1 thí nghiệm, mẫu dương tính với HPV16 đều cho kết quả dương tính với kênh HEX (Bảng 3.8), với giá trị Ct không chênh lệch
sau từng chu kì sát nhau và gần như là chồng khít lên nhau. Mẫu dương tính với HPV18 kết quả dương tính với kênh Cy5, giá trị Ct có sự chênh lệch nhau, thể hiện trên Hình 3.16B có một đường biểu diễn tín hiệu huỳnh quang lệch xa 2 đường cịn lại. Mẫu dương tính với HPV52 đều cho kết quả dương tính trên kênh FAM, với giá trị Ct không chênh lệch nhau nhiều, thể hiện trên Hình 3.16C cả 3 đường biểu diễn tín hiệu huỳnh quang sau từng chu kì sát nhau và gần như là chồng khít lên nhau. Giá trị Ct giữa 3 lần thực hiện của cùng một mẫu trên các kênh đọc tương ứng HEX, Cy5, FAM đều nằm trong khoảng Mean±2SD (thể hiện trong Bảng 3.9 và Hình 3.17A, B, C), sự biến động Ct giữa các lần thực hiện của cùng một kỹ thuật viên với phương pháp này nằm trong khoảng cho phép. Trên kênh Cy5.5, giá trị Ct thống nhất giữa cả 3 lần chạy, đường tín hiệu huỳnh quang cả 3 lần chạy của 1 mẫu đều chồng khít lên nhau.
3.3.2.2 Xác định hệ số tái lập của phƣơng pháp
Tiến hành kỹ thuật realtime PCR đa cặp primer và probe với 2 mẫu dương tính với một trong các chủng HPV16, HPV18, HPV33/52, mẫu thuộc bộ mẫu chuẩn của nghiên cứu trong đó có 1 mẫu dương tính với HPV16 (A410) và 1 mẫu dương tính HPV18, 52 (B252), mỗi mẫu được thực hiện 3 lần bởi 3 kỹ thuật viên khác nhau trong 3 lần thí nghiệm riêng biệt. Kết quả được trình bày trong Bảng 3.10 và Hình 3.18, 3.19,3.20.Giá trị trung bình và độ lệch chuẩn của giá trị Ct trong 3 lần thí nghiệm riêng biệt của từng mẫu được thể hiện ở Bảng 3.11 và Hình 3.21.
Kết quả tổng kết trong Bảng 3.10 cho thấy trong cả 3 lần thí nghiệm riêng biệt mẫu A410 (HPV16) đều cho kết quả dương tính trên kênh HEX tương ứng với 1 đường biểu diễn tín hiệu huỳnh quang điển hình trongHình 3.18A, 3.19A, 3.20A. Mẫu B252 (HPV18, 52) cho kết quả dương tính trên cả 2 kênh Cy5 (Hình 3.18B, 3.19B, 3.20B) và FAM (Hình 3.18C, 3.19C, 3.20C).Xác định giá trị trung bình và độ lệch chuẩn (Bảng 3.11), Ct của cùng một mẫu thực hiện bởi 3 kỹ thuật viên khác nhau đều nằm trong khoảng mean ±2SD (Hình 3.21A, B, C), sự biến động Ct giữa các kỹ thuật viên khác nhau với phương pháp này nằm trong khoảng cho phép.Tất cả các mẫu trong cả 3 lần thí nghiệm đều cho kết quả dương tính trên kênh Cy5.5, chứng âm trong 3 lần thí nghiệm đều cho kết quả âm tính, chứng tỏ khơng xảy ra sai sót nhiễm chéo và khơng có lẫn chất ức chế trong mẫu .
Bảng 3.10.Kết quả thí nghiệm xác định hệ số tái lập của phương pháp Bảng 3.10A.Kết quả thí nghiệm xác định hệ số tái lập thực hiện bởi kỹ thuật viên 1