CHƢƠNG 2 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.3. Thực nghiệm
2.3.1. Bệnh phẩm, dụng cụ, máy móc và hóa chất nghiên cứu
a) Bệnh phẩm: 202 mẫu tủy sinh máu chọc lần đầu tại Viện Huyết học-Truyền
máu trung ương
Cố định tiêu bản trong dung dịch cố định tiêu bản với thời gian 1 phút;
Với các nghiên cứu dài ngày, tiêu bản được bảo quản trong hộp bảo quản từng tiêu bản có chất chống ẩm ở nhiệt độ -370C. Khi đưa vào nhuộm nghiên cứu thì tiến hành nâng nhiệt độ lên nhiệt độ phịng thí nghiệm.
b) Dụng cụ và máy móc:
Máy ủ nhiệt CW-20G từ 0-500C, độ chính xác ±0,10
C;
Máy đo pH inoLab 730 với độ chính xác đến 10-3
;
Cân phân tích Sartorius TE214S có độ chính xác 10-4
;
Kính hiển vi Nikon với độ phóng đại 1.000 lần có gắn máy chụp ảnh;
Pipet tự động của hãng Thermo kèm đầu côn 0,2 mL, 1,0 mL và 10 ml của hãng Gilson;
Hộp nhuộm của hãng HICYTEC.
c) Hóa chất: Bộ kít nhuộm hóa học tế bào HICYTEC tại trung tâm Huyết học- Truyền máu bệnh viện 19-8, Bộ Công an.
Bảng 2.1. Thành phần bộ kít nhuộm hóa học tế bào Thuốc Thuốc
thử Tên thuốc thử Thể tích Bảo quản
R1 Xitrat-fomol-axeton 10ml 25ºC
R2 Giemsa 2,5ml 25ºC
R3 Kali feroxyanua 2,5ml 25ºC
R4 Naphthol AS-D chloroacetate 2,5ml <-20ºC R5 Naphthol AS acetat 5,0ml <-20ºC R6 Naphthol AS-BI phosphate 5,0ml <-20ºC
R7 Sudan B 2,5ml 25ºC
R8 Fastred violet LB salt 12,5ml <-20ºC
R9 Đệm giemsa 50ml 25ºC
R10 HCl 50ml 25ºC
R11 Đệm esteraza đặc hiệu 50ml 25ºC R12 Đệm esteraza không đặc hiệu 50ml 25ºC R13 Đệm esteraza khơng đặc hiệu có chất ức chế NaF 50ml 25ºC
Thuốc
thử Tên thuốc thử Thể tích Bảo quản
R14 Đệm photphataza axit 50ml 25ºC R15 Đệm photphataza kiềm 50ml 25ºC R16 Đệm Sudan B 50ml 25ºC R17 Benzidin 50ml 25ºC R18 Periodic 50ml 25ºC R19 Dung dịch cố định màu 100ml 25ºC R20 Dung dịch schiff 20ml 25ºC
R21 Nuclear Fast red 50ml 25ºC
R22 Hematoxylin 100ml 25ºC
R23 Dung dịch tăng màu 100ml 25ºC
Bộ thuốc thử đủ cho 20 lần nhuộm, mỗi lần 2 bộ tiêu bản. Hạn sử dụng 1 năm kể từ ngày sản xuất. Bộ kít gồm 2 phần bảo quản lạnh dưới -20ºC và ở nhiệt độ phịng thí nghiệm.