Giới tính Số lƣợng Tỷ lệ (%)
Nam 28 46,7
Nữ 32 53,3
Tổng 60 100
Về giới: Tỷ lệ mắc bệnh của nữ giới cao hơn nam giới (xem bảng 3.2) và cao hơn so với công bố của Siegel M. P. H. R., và cộng sự ghi nhận tại Mỹ năm 2 14 là 0,756 (23.370 nữ/30.900 nam) [52]. Sự khác nhau có thể là do ảnh hưởng của mơi trường sống cũng như thói quen sinh hoạt của người Mỹ và Việt Nam cũng như số lượng mẫu thu thập có thể cịn thấp chưa mang tính đại diện.
H nh 3.1. Biểu đồ phân loại bạch cầu cấp theo độ tuổi và giới tính
Về độ tuổi: Qua hình 3.1 cho thấy bệnh gặp ở mọi lứa tuổi, tuy vậy đối với nam tần suất mắc bệnh tỷ lệ nghịch với độ tuổi, dưới tuổi lao động chiếm tỷ lệ cao nhất (21,5%). Ngược lại, ở nữ giới thì độ tỷ lệ mắc bệnh cao nhất là ở ngoài độ tuổi lao động (20,0%).
Về phân loại thể bệnh, theo FAB (1986): bệnh bạch cầu cấp được chia thành 2 nhóm chính là bạch cầu cấp dòng tủy và bạch cầu cấp dòng lympho. Bạch cầu cấp dòng tủy gồm 8 thể bệnh từ M đến M7. Bạch cầu cấp dòng lympho gồm 3 thể bệnh
21.5 18.4 6.7 16.7 20 16.7 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 Dưới độ tuổi lao động Trong độ tuổi lao động Trên độ tuổi lao động % Độ tuổi Nam Nữ
từ L1 đến L3. Trong nghiên cứu này, bạch cầu cấp chia làm 3 nhóm, gồm bạch cầu cấp dòng tủy chiếm tỷ lệ cao nhất (50,0%), tiếp theo là thể bệnh bạch cầu cấp dịng lympho chiếm 41,7% và nhóm thứ ba chiếm tỷ lệ thấp nhất là thể lai giữa lympho và tủy chiếm 8.3% (xem hình 3.2). Tỷ lệ này cũng phù hợp với các nghiên cứu trong và ngồi nước về tình hình chung mắc bạch cầu cấp. Kết quả nghiên cứu của Trần Ngọc Vũ và cộng sự tại khoa Nhi bệnh viện Trung ương Huế cũng cho thấy nhóm bạch cầu cấp dịng tủy (55,45%) chiếm tỷ lệ cao hơn nhóm bạch cầu cấp dịng lympho (44,55%). Nghiên cứu cũng chỉ ra ở người lớn tỷ lệ mắc bạch cầu cấp dòng tủy là 70,77%, dòng lympho là 29,23%. Cịn ở trẻ em thì ngược lại tỷ lệ mắc bạch cầu cấp dòng lympho (77,22%) cao hơn nhiều so với tỷ lệ mắc bạch cầu cấp dòng tủy (27,78%) [25].
H nh 3.2. Biểu đồ phân loại bệnh bạch cầu cấp. 3.2. Nhóm bạch cầu cấp dịng lympho
3.2.1. Đặc điểm chung về nhóm bệnh bạch cầu cấp dịng Lympho
Bảng 3.3. Bảng phân loại bạch cầu cấp dòng lympho theo giới tính Giới tính Số lƣợng Tỷ lệ (%) Nam 14 56,0 Nữ 11 44,0 Tổng 25 100 50% 41,7% 8,3% Bạch cầu cấp dòng tủy Bạch cầu cấp dòng lympho
Bạch cầu cấp lai Lympho - Tủy
Về giới tính: bệnh gặp ở cả 2 giới. Tuy nhiên, tỷ lệ mắc bệnh bạch cầu cấp dòng lympho ở nam cao hơn nữ, nam chiếm 56,0%, nữ chiếm 44,0 % (nam/nữ =1,3).
Về độ tuổi: Mẫu nghiên cứu có tuổi thấp nhất là 1 tháng tuổi và cao nhất là 93 tuổi, bệnh gặp ở mọi lứa tuổi. Theo tiêu chuẩn quy định độ tuổi lao động của người Việt Nam: độ tuổi lao động của nam giới từ 18-60 tuổi, độ tuổi lao động của nữ giới từ 18 - 55 tuổi. Qua hình 3.3 cho thấy tỷ lệ mắc bệnh bạch cầu cấp dòng lympho < 18 tuổi chiếm tỷ lệ cao nhất (6 %). Điều này ảnh hưởng rất lớn đến sự phát triển kinh tế-xã hội. Số trường hợp mắc bệnh bạch cầu cấp dòng lympho tập trung chủ yếu ở nhóm tuổi vị thành niên - nguồn lực phát triển trong tương lai của đất nước, cần được gia đình và xã hội quan tâm chăm sóc nhiều hơn.
Kết quả này phù hợp với các công bố của các tác giả trong và ngoài nước. Theo Trần Thị Hồng Hà (2 4), độ tuổi mắc bệnh bạch cầu cấp dòng lympho hay gặp nhất từ 4-5 tuổi [5]. Nguyễn Công Khanh (1987) thấy rằng gần 50% trẻ mắc bệnh dưới 5 tuổi và tỷ lệ này cũng giảm dần ở trẻ lớn [8]. Theo Bùi Ngọc Lan (2 7), độ tuổi mắc bệnh trung bình là 6,0 ± 3,8 [9 . Đối với người trên 16 tuổi, nhiều nghiên cứu cho thấy ở Việt Nam, tỷ lệ người mắc bệnh trẻ tuổi chiếm tỷ lệ khá cao. Nghiên cứu của Phạm Quang Vinh (2003), có trên 256 bệnh nhân có 40,0% số bệnh nhân dưới 30 tuổi [24].
H nh 3.3. Biểu đồ phân loại bệnh bạch cầu cấp dòng lympho theo độ tuổi
60% 20%
20%
Dưới độ tuổi lao động Trong độ tuổi lao động Ngoài độ tuổi lao động
3.2.2. Phân loại thể bệnh bạch cầu cấp dòng lympho sử dụng bộ kit nhuộm HICYTEC HICYTEC
Như đã đề cập ở phần tổng quan, nhuộm hóa học tế bào là dùng các phản ứng hóa màu để phát hiện các chất hóa học có trong tế bào. Mỗi kỹ thuật nhằm phát hiện một thành phần hóa học của tế bào ung thư giúp chẩn đoán, phân loại các thể bệnh và theo dõi điều trị bệnh bạch cầu cấp.
a) Phân loại thể bệnh bạch cầu cấp dòng lympho theo tiêu chuẩn FAB
Việc phân loại thể bệnh dựa vào hình thái học và hóa học tế bào theo tiêu chuẩn FAB đối với bệnh bạch cầu cấp dòng lympho được chia thành 3 thể L1, L2, L3. Kết quả phân loại thể bệnh bạch cầu cấp dịng lympho bằng bộ kít HICYTEC được thể hiện trên bảng 3.4:
Bảng 3.4. Kết quả phân loại thể bệnh bạch cầu cấp dòng lympho
Thể bệnh Kết quả bộ kít HICYTEC Số lƣợng Tỷ lệ (%) L1 2 8 L2 23 92 L3 0 0 Tổng cộng 25 100
Kết quả bảng 3.4 cho thấy tỷ lệ mắc bệnh bạch cầu cấp thể L2 gặp nhiều nhất (chiếm 92%), tiếp đến là thể L1 (chiếm 8%) và không gặp trường hợp nào thể L3. Kết quả này phù hợp với các nghiên cứu của Nguyễn Thị Minh An (1995) [1], Lâm Thị Mỹ và cộng sự (2 4) đều thấy thể L2 chiếm tỷ lệ cao trong bạch cầu cấp dòng lympho [10]. Tuy vậy, khác với nghiên cứu của tác giả C. H. Pui (2001) tỷ lệ mắc bệnh bạch cầu cấp dịng lympho hầu hết có phân loại theo FAB thuộc thể L1 chiếm tới 70% [48].
Tiêu chuẩn FAB dựa trên kết quả nhuộm giemsa để xác định hình thái học và hóa học tế bào [27]:
Thể L1:
Dưới 50% số lượng tế bào tủy là nguyên hồng cầu;
Lớn hơn 3 % tế bào blast tủy có kích thước nhỏ, nhân mịn đồng nhất, hình thoi dẹt, có thể có 1 vài hạt nhân nhỏ hoặc khơng rõ, bào tương rộng và ưa bazơ;
Nhuộm hóa học tế bào cho phản ứng PAS dương tính hạt to trong 80% trường hợp, phản ứng peroxidaza âm tính, sudan đen âm tính, esteraza đặc hiệu và khơng đặc hiệu âm tính trừ lympho T có thể dương tính hạt.
Thể L2:
Dưới 50% số lượng tế bào tủy là nguyên hồng cầu;
Lớn hơn 3 % tế bào blast tủy có kích thước to nhỏ khơng đều, nhân khơng đồng nhất, có thể có một vài hạt nhân kích thước lớn, nguyên sinh chất rộng và ưa bazơ;
Nhuộm hóa học tế bào cho phản ứng PAS dương tính hạt to trong 80% trường hợp, phản ứng peroxidaza âm tính, sudan đen âm tính, esteraza đặc hiệu và khơng đặc hiệu âm tính trừ lympho T có thể dương tính hạt. Dưới đây là hình ảnh nhuộm giemsa hình thái học tế bào của bệnh nhân thể L1 và L2 (Hình 3.4 và Hình 3.5):
H nh 3.4. Ảnh nhuộm giemsa
mẫu tủy của bệnh nhân Doãn Hữu T- thể L1
H nh 3.5. Ảnh nhuộm giemsa mẫu tủy của
bệnh nhân Nguyễn Hữu T - thể L2 Hình 3.4 là ảnh nhuộm giemsa hình thái học tế bào của bệnh nhân Dỗn Hữu T mắc bạch cầu cấp dòng lympho thể L1 cho thấy trên tiêu bản chủ yếu là các tế
bào blast dịng lympho có kích thước nhỏ, nhân mịn và đồng nhất, hạt nhân nhỏ và không rõ, bào tương ưa bazơ đậm, ngồi ra, cịn có 1 vài tế bào non dịng tủy.
Hình 3.5 là ảnh nhuộm giemsa hình thái học tế bào của bệnh nhân Nguyễn Hữu T mắc bệnh bạch cầu cấp dòng lympho thể L2 cho thấy trên tiêu bản có nhiều tế bào blast dịng lympho có kích thước tế bào lớn, to nhỏ không đều, nhân không đồng nhất, 1 vài tế bào blast có hạt nhân to, rõ, bào tương ưa bazơ vừa. Ngồi ra trên tiêu bản cịn gặp ngun hồng cầu ưa đa sắc và một vài tế bào dòng tủy.
Về nhuộm hóa học tế bào: Chủ yếu dựa vào kết quả của kỹ thuật nhuộm Periodic - axit schiff (PAS). Bản chất của nhuộm PAS là phản ứng hoàn nguyên nhằm bộc lộ glycogen trong nguyên sinh chất của tế bào. Cơ chế của phản ứng gồm 2 giai đoạn: axit periodic oxi hóa glycogen trong tế bào thành diandehit, diandehit tạo thành sẽ tác dụng với thuốc thử Schiff thành phẩm màu Quinoit màu đỏ. PAS dương tính hạt với bạch cầu ung thư dịng lympho, tế bào trưởng thành thì mức độ dương tính càng mạnh. Các tế bào dịng tủy mẫu tiểu cầu, tiểu cầu dương tính lan tỏa, dịng mono dương tính yếu; bạch cầu ưa axit, bazơ, hồng cầu gần như âm tính. Kết quả nhuộm PAS được thể hiện trên hình 3.6 và hình 3.7:
H nh 3.6. Ảnh nhuộm PAS
bệnh nhân Doãn Hữu T - Thể L1
H nh 3.7. Ảnh nhuộm PAS
bệnh nhân Nguyễn Hiền A- Thể L2 Hình 3.6 là ảnh nhuộm PAS với độ phóng đại 1.000 lần của bệnh nhân Dỗn Hữu T mắc bạch cầu cấp dịng lympho thể L1 cho thấy kết quả dương tính, hạt màu đỏ trên nguyên sinh chất của các tế bào blast dịng lympho ngồi ra trên tiêu bản cịn có một vài tế bào dịng tủy dương tính lan tỏa bào tương có màu đỏ tươi mịn. Hình 3.7 là ảnh nhuộm PAS với độ phóng đại 1.000 lần của bệnh nhân Nguyễn
Hiền A mắc bạch cầu cấp thể L2 cho thấy trên tiêu bản các tế bào blast dịng lympho dương tính hạt to, màu đỏ tươi trên nền nhân và hồng cầu màu xanh.
Các phương pháp nhuộm hoá học tế bào khác như: Peroxidaza, lipit bằng sudan đen các tế bào blast cho kết quả âm tính. Hình 3.8 - 3.9 là ảnh nhuộm peroxidaza của bệnh nhân Doãn Hữu T và Nguyễn Hiền A mắc bạch cầu cấp thể L1, L2 cho thấy phản ứng peroxidaza âm tính với các tế bào blast dịng lympho khơng bắt màu vàng nâu và 1 số tế bào dịng tủy dương tính bắt màu vàng nâu trên tiêu bản.
H nh 3.8. Ảnh nhuộm PER
bệnh nhân Doãn Hữu T - Thể L1
H nh 3.9. Ảnh nhuộm PER
bệnh nhân Nguyễn Hữu T- Thể L2 Hình 3.10 và hình 3.11 là ảnh nhuộm Sudan đen hạt mỡ của 2 bệnh nhân bạch cầu cấp thể L1 và L2 cho thấy các tế bào blast dòng lympho không bắt màu đen cho phản ứng Sudan B âm tính, trên tiêu bản cịn có 1 vài tế bào dịng tủy dương tính, bắt màu đen.
H nh 3.10. Ảnh nhuộm SD
bệnh nhân Doãn Hữu T - Thể L1
H nh 3.11. Ảnh nhuộm SD
b) Đ nh gi mức độ phù hợp phân loại thể bệnh bạch cầu cấp dòng lympho bằng bộ kít nhuộm đồng bộ HICYTEC so với kết quả chẩn đo n x c định của Viện Huyết học-Truyền m u trung ƣơng
Bảng 3.5. Kết quả phân loại thể bệnh bạch cầu cấp dịng tuỷ bằng bộ kít HICYTEC
và kết chẩn đốn xác định của Viện Huyết học-Truyền máu trung ương trên từng bệnh nhân TT Mã BN Họ và tên Năm sinh Ngày XN Kết luận của viện HH-TM TW Kết luận thể bệnh sử dụng kit HICYTEC 1. 15010165 Nguyễn Thị L. 1949 30/04/2015 L2 L2 2. 15013692 Dương Ngọc L. 2013 28/05/2015 L2 L2 3. 15013057 Nguyễn Sơn H. 2013 22/05/2015 L2 L2 4. 15012072 Nguyễn Mạnh D. 2007 14/05/2015 L2 L2 5. 14034835 Lưu Kế X. 1954 01/10/2014 L2 L2 6. 15011022 Nguyễn Thị Đ. 1936 11/05/2015 L2 L2 7. 15011378 Vũ Trung T. 2010 11/05/2015 L2 L2 8. 15010693 Vũ Thị Đ. 1947 13/05/2015 L2 L2 9. 15011337 Phùng Thị A. 2012 08/05/2015 L2 L2 10. 15011154 Ngô Văn Tr. 2008 07/05/2015 L2 L2 11. 15009721 Tô Phương L. 2008 30/04/2015 L2 L2 12. 14035107 Trương Thị T. 1994 27/04/2015 L2 L2 13. 15010527 Trần Đức A. 2013 28/04/2015 L2 L2 14. 14019748 Đỗ Minh T. 2013 27/04/2015 L2 L2 15. 15008709 Lê Ngọc Bảo P. 2015 27/04/2015 L2 L2 16. 15010257 Nguyễn Hữu T. 2000 24/04/2015 L2 L2
TT Mã BN Họ và tên Năm sinh Ngày XN Kết luận của viện HH-TM TW Kết luận thể bệnh sử dụng kit HICYTEC 17. 856 Nguyễn Văn T. 1992 31/03/2015 L2 L2 18. 14037484 Nguyễn Hiền A. 2012 10/10/2014 L2 L2 19. 14037438 Giàng Thị N. 2012 10/10/2014 L2 L2 20. 14038058 Lê Phạm V. 1963 17/10/2014 L2 L2 21. 14038278 Trần Hoàng Th. 1997 21/10/2014 L2 L2 22. 14035789 Doãn Hữu T. 1922 26/09/2014 L1 L1 23. 14087493 Nguyễn Ngọc A. 2013 10/10/2014 L2 L2 24. 14035765 Nguyễn Trọng T. 1998 22/09/2014 L1 L1 25. 14035113 Hoàng Mai P. 2009 15/09/2014 L2 L2
Tổng hợp lại kết quả ở trên được bảng phân loại thể bệnh trên bảng 3.6.
Bảng 3.6. Kết quả phân loại thể bệnh bạch cầu cấp dòng lympho
Thể bệnh Chẩn đo n x c định Viện HH-TMTW Kết quả bộ kít HICYTEC Sai khác Số lƣợng Tỷ lệ (%) Số lƣợng Tỷ lệ (%) Số lƣợng Tỷ lệ (%) L1 2 8 2 8 0 0 L2 23 92 23 92 0 0 L3 0 0 0 0 0 0 Tổng cộng 25 100 25 100 0 0
Như vậy, mức độ phù hợp phân loại thể bệnh theo phương pháp hình thái học-hóa học tế bào bằng kít nhuộm đồng bộ HICYTEC so với kết quả chẩn đoán xác định của Viện Huyết học-Truyền máu trung ương dựa trên 3 phương pháp:
miễn dịch, di truyền và hình thái học-hóa học tế bào đạt 100% theo tiêu chuẩn FAB. Kết quả này cao hơn so với nghiên cứu của Trần Ngọc Vũ và cộng sự (2014) khi sử dụng 5 phương pháp nhuộm: Giem sa, peroxidaza, sudan B, PAS và esteraza khơng đặc hiệu tự pha thì độ nhạy là 1 %, độ đặc hiệu là 73,77%, giá trị dự báo phân loại dòng lympho là 88,88%. Sự phù hợp chẩn đốn giữa hình thái-hóa học tế bào và miễn dịch tế bào là 89,10% [25].
3.2.3. Kết quả nhuộm photphataza axit bạch cầu xác định loại lympho T trên bệnh nhân bạch cầu cấp dòng lympho bệnh nhân bạch cầu cấp dòng lympho
Bảng 3.7. Kết quả nhuộm photphataza axit phân loại dòng lympho T Dòng tế bào Số lƣợng Tỷ lệ (%) Dòng tế bào Số lƣợng Tỷ lệ (%)
Lympho B 24 80
Lympho T 6 20
Tổng 30 100
Photphataza axit bạch cầu (Naphtol AS-BI acid photphataza-AP) là enzym xúc tác cho phản ứng thủy phân nhóm photphat. AP có mặt trong nhiều lysosom của nhiều loại tế bào máu như dòng tủy, lympho, tương bào, dòng tiểu cầu, dòng mono [30 . Đối với dòng bạch cầu lympho T dương tính với nhuộm AP cao hơn lympho B. Hoạt tính của AP tăng khi tế bào lympho chuyển dạng kích thích. Kỹ thuật giúp phân loại tế bào B đặc biệt là dạng tế bào tóc (Hairy cell) [28].
Phophataza axit dương tính mạnh trong bệnh bạch cầu cấp dịng lympho loại tế bào tóc (hairy cell), tế bào liên võng, hủy cốt bào và các nguyên mẫu tiểu cầu. Dòng hồng cầu, mono, lympho và dòng tủy từ nguyên tủy bào đến tiền tủy bào cho kết quả âm tính [40, 56].
Hình 3.12 là ảnh chụp qua kính hiển vi với độ phóng đại 1.000 lần bệnh cho thấy các tế bào lympho T bắt màu dương tính mạnh khi nhuộm photphataza axit bạch cầu ở điều kiện nhuộm tối ưu với nồng độ cơ chất naphtol AS-BI photphat là 0,35 mg/ml, muối fast blue BB 0,30 mg/ml và ở pH=5,2 [19].
H nh 3.12. Ảnh nhuộm photphataza axit
Các tế bào bạch cầu lympho có photphataza axit dương tính và khơng thấy các hạt các giả túc dạng tế bào tóc nên được xác định thuộc dịng tế bào lympho T [57] (xem hình 3.12). Bảng 3.7 cho thấy, tỷ lệ bệnh bạch cầu cấp lympho dòng B (8 %) cao hơn so với dòng T (20%). Kết quả này tương tự so với tác giả C. H. Pui [48 , nhưng cao hơn so với nghiên cứu của Bùi Ngọc Lan (2007) tỷ lệ dòng lympho B chiếm 70,1%, dòng lympho T chiếm 25,8% [9]. Tủy đồ có hạn chế là khơng thể phân biệt được dòng B và T như kỹ thuật miễn dịch tế bào. Trong khi đó dựa vào