CHƢƠNG 2 ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.2. Phương pháp nghiên cứu
2.2.9. Phương pháp sơ bộ đánh giá khả năng ứng dụng hỗn hợp vi sinh vật nhằm
hạn chế hàm lượng nhôm linh động trong đất trồng chè.
Để đánh giá khả năng ứng dụng hỗn hợp VSV nhằm hạn chế hàm lượng nhôm linh động trong đất trồng chè tiến hành nuôi cấy các chủng VSV trong môi trường đất của khu vực nghiên cứu quy mơ phịng thí nghiệm:
ước 1: Nhân giống tạo hỗn hợp sinh khối của các chủng VSV:
- Chuẩn bị các môi trường dịch thể (không chứa thạch và không chứa nhôm) phù hợp với các chủng VSV (các chủng vi khuẩn được nuôi trong môi trường LB, các chủng nấm mốc được nuôi trong môi trường Hansen). Khử trùng 100 ml mơi trường dịch thể đã được phân phối vào bình nón.
- Sử dụng que cấy móc, cấy truyền từng khuẩn lạc của các chủng VSV từ ống nghiệm giống vào các bình nón chứa dịch thể, nút kín miệng bình.
- Đặt các bình nón cố định trong tủ ấm lắc tạo mơi trường, thiết lập chương trình chạy máy với tốc độ lắc 150 vòng/phút, nhiệt độ 30oC. Bật tủ lắc trong vòng 7 ngày nhằm tăng sinh khối.
- Sau 7 ngày, ly tâm dịch thể với tốc độ 3000 vòng/phút trong 15 phút rồi thu sinh khối của các chủng VSV.
ước 2: Cấy các chủng VSV tuyển chọn được vào mẫu đất thuộc khu vực nghiên cứu.
Cân 1 mg sinh khối của mỗi chủng (hai chủng vi khuẩn B2, B4 và ba chủng nấm mốc F8, F13 và F17), rồi phối trộn đều hỗn hợp sinh khối, thu được 5 mg hỗn hợp sinh khối có tỉ lệ (1:1:1:1:1).
Cân 100 g đất của mẫu đất trồng chè MĐ1 vào bình đã khử trùng và bổ sung 5 mg hỗn hợp sinh khối trên phân phối đều vào trong mẫu đất.
Do khả năng chịu axit của nấm mốc thường cao hơn so với vi khuẩn. Nên nấm mốc được cho là chiếm ưu thế trong tổng số VSV chịu axit và kháng nhơm. Mặt khác, trong q trình nghiên cứu chủng nấm mốc Penicillium janthinellum F17 có hiệu suất hấp thụ nhơm là lớn hơn cả so với hai chủng nấm mốc cịn lại nên tơi bố trí thêm mẫu đất có bổ sung chủng nấm mốc Penicillium janthinellum F17 nhằm đánh giá tiềm năng ứng dụng của chủng F17 so với hỗn hợp VSV. Cân 5 mg sinh khối của chủng nấm mốc F17 sau đó phân phối vào 100 g đất của mẫu đất trồng chè MĐ1 do chủng nấm mốc F17 có hiệu suất hấp thụ nhơm tương đối cao nên đã được lựa chọn để thử nghiệm.
Thực tế trong đất đã chứa hệ VSV đất hoạt động thường xun, chính vì vậy để đánh giá khả năng ứng dụng của các chủng VSV nghiên cứu tôi bố trí thêm mẫu đối chứng (mẫu đất khơng bổ sung VSV). Chuẩn bị thêm 100 mg đất không bổ sung hỗn hợp VSV vào bình đã khử trùng để đối chứng.
Sau đó sử dụng giấy bạc đậy kín các miệng bình.
ước 3: Tiến hành ủ mẫu đất đã bổ sung hỗn hợp sinh khối của các chủng VSV ở nhiệt độ 30oC trong 7 ngày.
Sau 7 ngày xác định hàm lượng nhôm linh động trong các mẫu đất trồng chè (mẫu đối chứng) và mẫu đất sau khi ủ (mẫu thí nghiệm để so sánh và đánh giá khả năng ứng dụng các chủng VSV nghiên cứu vào thực tiễn.