CHƯƠNG II : THỰC NGHIỆM
2.2. Phương pháp phân tích đối chứng xác định các sulfamid
2.2.1. Phương pháp đối chứng xác định Sulfaguanidin
Tiến hành: Định lượng bằng phương pháp chuẩn độ thể tích theo DĐVN 4. Cân 20 viên, tính khối lượng trung bình viên và nghiền thành bột mịn. Cân chính xác một lượng bột viên tương ứng với khoảng 0,2 g sulfaguanidin, thêm 15 ml dung dịch acid hydrocloric 25% và 50 ml nước. Lắc kỹ, tiến hành chuẩn độ bằng nitrit (1 ml dung dịch natri nitrit 0,1M tương đương với 21,42 mg C7H10N4O2S.).
Hàm lượng (%) sulfaguanidin trong chế phẩm được tính tốn theo cơng thức dưới đây 2 1, 4 2 ( / ê ) t a T B T V k m H L m g v i n m
Trong đó: Vt: thể tích dung dịch natri nitrit 0,1M đã chuẩn độ (ml)
ka: hệ số hiệu chỉnh của dung dịch natri nitrit nếu nồng độ của dung dịch này không phải là 0,1M.
mt: khối lượng cân của mẫu thử (mg)
mtb: khối lượng trung bình của một viên thuốc (mg)
21,42: là hệ số quy đổi 1 ml dung dịch natri nitrit 0,1M tương đương với 21,42 mg C7H10N4O2S.
2.2.2. Phương pháp đối chứng xác định Sulfamethoxazol và Trimethoprim
Tiến hành theo phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao như dược điển Mỹ USP 34- NF 29 [37]. như sau:
Điều kiện sắc ký: Cột C 18 (250 x 4,6 mm; 5µm), detector UV: 254 nm, tốc độ dòng: 1,8 ml/ phút, thể tích tiêm: 20 µl. Pha động: 700ml nước + 200ml Acetonitril + 1ml triethylamin, điều chỉnh pH 5,9 ± 0,1 bằng dung dịch acid acetic 1% hoặc dung dịch natri hydroxyd 0,2N, thêm nước vừa đủ 1000 ml.
Chun ngành hóa phân tích 33 Trường ĐHKHTN
- Dung dịch chuẩn: Cân chính xác khoảng 320mg sulfamethoxazol chuẩn và khoảng 64mg trimethoprim chuẩn vào bình định mức 100,0 ml, thêm 50ml methanol, lắc siêu âm hoà tan để nguội, thêm methanol đến vạch, lắc đều. Hút chính xác 5,0 ml dịch trên vào bình định mức 50,0ml, thêm pha động vừa đủ đến vạch. Lắc đều, lọc qua màng lọc 0,45µm.
- Dung dịch thử: Cân 20 viên, tính khối lượng trung bình rồi nghiền thành bột mịn. Cân chính xác một lượng bột chế phẩm tương ứng khoảng 320mg Sulfamethoxazol vào bình định mức 100,0ml, thêm 50ml methanol, lắc siêu âm hoà tan để nguội, thêm methanol đến vạch, lắc đều, lọc bỏ dịch đầu. Hút chính xác 5,0 ml dịch lọc trên vào bình định mức 50,0ml, thêm pha động vừa đủ đến vạch. Lắc đều, lọc qua màng lọc 0,45µm. Tiến hành sắc ký lần lượt với dung dịch chuẩn và dung dịch thử. Tính lượng hàm lượng Sulfamethoxazol (C10H11N3O3S) và Trimethoprim (C14H18N4O3) có trong chế phẩm dựa vào diện tích pic trên sắc ký đồ
của dung dịch thử, dung dịch chuẩn, hàm lượng của Sulfamethoxazol chuẩn, Trimethoprim chuẩn và các thông số liên quan.
Cơng thức tính tốn hàm lượng sulfamethoxazol (mg/ viên)
S S tb T S t m HL m E HL (mg/viê )= E m n
Trong đó: ES, Et: lần lượt là diện tích pic của dung dịch chuẩn, thử mS, mt: lần lượt là khối lượng cân của chuẩn, của thử (mg) HLS: hàm lượng nguyên trạng của sulfamethoxazol chuẩn (%)
mtb: khối lượng trung bình của một viên thuốc (mg)
Cơng thức tính tốn hàm lượng trimethoprim (mg/ viên)
S S tb T S t m HL m E HL (mg/viê )= E m n
Trong đó: ES, Et: lần lượt là diện tích pic của dung dịch chuẩn, thử
mS, mt: lần lượt là khối lượng cân của chuẩn, của thử (mg)
HLS: hàm lượng nguyên trạng của trimethoprim chuẩn (%) mtb: khối lượng trung bình của một viên thuốc (mg)
Chun ngành hóa phân tích 34 Trường ĐHKHTN