Một thành phần khác trong pha động cũng rất quan trọng đó là chất tạo cặp 2- Mercaptoethanol. Các dạng thủy ngân là những hợp chất có độ phân cực rất lớn, ái lực với cột C18 rất nhỏ do đó muốn phân tìch bằng sắc ký pha đảo cần sử dụng thêm chất tạo cặp trong pha động giúp tăng khả năng tương tác của từng chất phân tìch nhờ đó các chất được tách dễ dàng trên cột. Trong nghiên cứu này nhóm nghiên cứu khảo sát các nồng độ khác nhau của 2-Mercaptoethanol: 0,05%, 0,10%, 0,20%. Kết quả được thể hiện qua hình 3.11-3.13:
Hình 3. 12:Khảo sát nồng độ2-Mercaptoethanol trong pha động, nồng độ 0,1%
Hình 3. 13: Khảo sát nồng độ2-Mercaptoethanol trong pha động, nồng độ 0,2%
Kết quả cho thấy, khi nồng độ chất tạo cặp 2-ME tăng lên, tín hiệu chất phân tìch cũng như độ phân giải của các chất phân tìch tăng nhưng khơng nhiều. Dung mơi 2-ME có khả năng bay hơi mạnh, mùi khó chịu, có thể ảnh hưởng tới sức khỏe người sử dụng. Do đó, nồng độ của 2-ME 0,10% được lựa chọn phù hợp cho các khảo sát tiếp theo.
*Điều kiện tối ưu trên hệ thiết bị HPLC-ICP-MS
Qua quá trính khảo sát và tối ưu, điều kiện phân tìch trên hệ thiết bị HPLC-ICP- MS Nexion 350X của hãng Perkin Elmer được tổng hợp trong bảng 3.4
Bảng 3. 4: Các điều kiện tối ưu phân tích dạng Thủy ngân
LC
Cột C18 (5µm, 150 x 4,6 mm)
Pha động
20mmol/l ammonium acetate + 0,1% (v/v) 2- Mercaptoethanolcaptoethanol + 4%(v/v) isopropanol Thể tìch tiêm mẫu 20µl Tốc độ pha động 0,9 ml/phút ICP-MS Cơng suất RF 1250 W Tốc độ khì nebulizer 0,8 ml/phút Đồng vị 202Hg Lặp lại 1
Thời gian ghi 20phút
Dịng khì phụ trợ 1,4 ml/phút
Khí plasma 19 L/phút
3.3. Điều kiện xử lý mẫu
Các mẫu hải sản nói chung có hàm lượng protein khá cao, axit hydrochloric với nồng độ thìch hợp 1 mol/L [2, 9, 13] được sử dụng để phá hủy mẫu, nhằm chiết được hoàn toàn các dạng thủy ngân. Các điều kiện cần khảo sát để đạt được hiệu quả xử lý mẫu tốt nhất gồm: nhiệt độ và thời gian chiết, tỷ lệ 2-ME trong dung mơi chiết.
Theo đó quy trính ban đầu được đưa ra để tiến hành khảo sát như sau:
Sơ đồ 1: Quy trình xử lý mẫu dự kiến